广东省自然科学基金(04020415)
- 作品数：16 被引量：68H指数：5
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- 氯化锂联合脐血干细胞移植修复大鼠脊髓损伤被引量：8
- 2010年
- 目的观察氯化锂联合脐血干细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤的修复效果。方法成年雌性SD大鼠80只,建立胸9脊髓全横断损伤模型,随机分对照组(A组,n=20)、氯化锂组(B组,n=20)、细胞移植组(C组,n=20)和氯化锂+细胞移植组(D组,n=20)。于术后1d、3d及每周的最后1天,应用BBB评分评价大鼠脊髓功能的恢复情况;8周后取材,通过Brdu细胞核标记观察移植细胞的存活、迁移;通过荧光金逆行追踪,观察脊髓神经纤维的再生与分布。结果 4只大鼠死亡。术后8周可观察到Brdu标记的脐血干细胞在体内存活并在脊髓内迁移;细胞移植组和氯化锂+细胞移植组可见少量连续性神经纤维通过损伤区。荧光金逆行脊髓追踪显示C组和D组可见被荧光金标记的神经锥体细胞穿越损伤区。术后8周A、B、C、D四组后肢功能运动BBB评分分别为4.11±0.14、4.50±0.15、8.31±0.11、11.15±0.18。结论氯化锂能促进人脐血间充质干细胞在损伤区的存活并向神经细胞分化,氯化锂联合脐血干细胞与脊髓去细胞支架移植能够促进细胞移植修复大鼠脊髓损伤的效果。
- 邓许勇周荣平鲁凯伍金大地
- 关键词：脊髓损伤氯化锂脐血干细胞移植
- 嗅鞘细胞体外诱导神经干细胞分化的实验研究
- 2009年
- 目的:研究嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)体外诱导神经干细胞(neuron stell cells,NSCs)分化的作用。方法:分别从3月龄SD大鼠的嗅球和新生SD大鼠的海马中分离OECs及NSCs,进行体外分离、培养及免疫荧光鉴定。构建OECs与NSCs共培养体系,分为3组,纯化培养的OECs+NSCs组,未纯化培养的OECs+NSCs组,单纯NSCs组。共培养后4、8、12d行神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光鉴定,统计NSCs分化为神经元的百分率。结果:经P75和S100双重免疫荧光鉴定所培养的细胞为OECs,经巢蛋白抗体(Nestin)免疫荧光鉴定所培养的细胞为NSCs。荧光显微镜观察可见被特异性烯醇化酶-异硫氰酸荧光素(NSE-FITC)荧光标记的神经元大多为多极神经元,少部分为双极神经元或假单极神经元,带有较长的轴突。在各时间点,共培养组中可见到多个神经元聚集生长,神经元数目明显多于单纯NSCs培养组,而共培养组之间无明显差别。共培养后12d,共培养组中NSCs分化为神经元的百分率大约为23%,而单纯NSCs培养组约为4%。在各时间点,共培养组神经元的转化率与单纯NSCs培养组神经元的转化率之间有显著性差异(P<0.001),而共培养组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:OECs在体外能够有效诱导NSCs向神经元转化。
- 闫慧博金大地张忠民鲁凯伍江建明
- 关键词：嗅鞘细胞神经干细胞共培养诱导分化
- 胶质细胞源性神经营养因子慢病毒载体体外转染嗅鞘细胞MOI值的研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）慢病毒载体（lentivirus vector）体外转染嗅鞘细胞（OECs）并能稳定表达目的 蛋白的最佳感染复数（MOI）.方法 构建GDNF-lentivirus,体外转染293T细胞,获得高滴度的慢病毒浓缩液,测定病毒滴度达2×108 TU/ml.不同MOI的情况下,GDNF-lentivirus体外转染OECs,Western blot检测GDNF的表达.结果 相差显微镜明视野下动态观察转染后的OECs生长状态良好,荧光显微镜下见大量绿色荧光蛋白（GFP）标记的转染成功的OECs.MOI=100时,OECs的转染率最高,约为75%,MOI=50时约为68%,MOI=10和MOI=1时分别为25%和13%,阴性对照组未见有绿色荧光表达.转染后第5天,收集OECs进行Western blot检测,MOI=100和MOI=50时GDNF表达最强,两者差异无统计学意义（P＞0.05）,MOI=10表达较少,而MOI=1表达最少,对照组无GDNF表达.结论 GDNF-lentivirus在体外既能高效转染OECs又不影响细胞活性,且转染后的OECs可以长期稳定表达GDNF的适宜MOI为50～100之间.
- 闫慧博鲁凯伍张忠民王晓佳金大地
- 关键词：GDNF慢病毒载体嗅鞘细胞
- 大鼠脊髓全横断损伤模型标准化的初步探索
- 目的:对比研究两种脊髓全横断模型大鼠的后肢运动功能评分和病理学特征,探索建立标准化的脊髓全横断模型。方法:成年雌性SD大鼠60只,随机分为A组(n=12)、B组(n=24)和C组(n=24),每组再随机分为术后7、14、...
- 尹文化金大地鲁凯伍闫慧博王璐邓许勇
- 关键词：脊髓损伤
- 文献传递
- 荧光金标记技术在脊髓损伤修复中的应用
- 目的:建立人脐血干细胞移植修复脊髓全横断损伤模型,采用荧光金(FG)逆行追踪技术,观察大鼠脊髓全横断损伤修复过程中的组织学变化,及其与大鼠后肢运动功能BBB评分之间的关系。方法:取健康足月产新生儿脐带血,分离、培养和鉴定...
- 尹文化金大地鲁凯伍闫慧博王璐邓许勇
- 关键词：荧光金脊髓损伤干细胞
- 文献传递
- OECs移植联合IN-1抗体修复急性脊髓损伤的实验研究被引量：7
- 2008年
- 目的:研究嗅鞘细胞移植联合轴突生长抑制蛋白抗体IN-1局部持续注射对大鼠横断性脊髓损伤的修复作用。方法:成年雄性SD大鼠40只,建立胸脊髓全横断损伤模型,随机分成单纯对照组(10只)、嗅鞘细胞移植组(10只)、IN-1抗体微泵注射组(10只)和嗅鞘细胞移植联合IN-1抗体组(10只)。应用NF200免疫组化染色和免疫荧光染色对脊髓损伤区神经纤维再生进行形态学观察。采用BBB评分评估大鼠后肢功能恢复情况。结果:横断损伤共有9只大鼠死亡。术后8周可观察到Hoechet标记的嗅鞘细胞在体内存活并在脊髓内迁移;联合治疗(OECs+IN-1)组和OECs组可见脊髓损伤区杂乱无序的再生轴突,但无连续性神经纤维通过损伤区;IN-1组和对照组脊髓残端萎缩,未见轴突再生。后肢功能运动平均BBB评分:对照组、IN-1抗体组、细胞移植组和联合治疗组分别为7.70±0.24、7.89±0.15、10.50±0.25、11.33±0.24。结论:OECs移植联合IN-1抗体可促进损伤的脊髓神经轴突的存活和再生,较单纯应用OECs或IN-1能更好的促进脊髓损伤修复和大鼠后肢功能恢复。
- 闫慧博鲁凯伍江建明金大地
- 关键词：嗅鞘细胞脊髓损伤
- 氯化锂体外诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨氯化锂体外诱导人脐血间充质干细胞（MSCs）向神经细胞分化的可行性。方法无菌条件下收集正常足月儿的脐带血，肝素抗凝，密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞，贴壁法纯化，用含15％FBS的低糖DMEM培养基进行扩增培养，流式细胞仪检测表面抗原。取3代的脐血MSCs进行诱导，A组：用含15％FBS和20ng／ml bFGF的DMEM完全培养基预诱导24h，3mol／L LiCl的DMEM培养基继续诱导6d：B组：含3mol／L LiCl的DMEM培养基诱导7d；C组：含15％FBS的DMEM培养基正常培养7d。光镜下观察细胞形态，用免疫组化技术检测细胞NSE、MAP2及GFAP的表达。结果A组与B组诱导3d后细胞即出现形态学上的改变，细胞变成不规则形，立体感增强，从胞体伸出突起。免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示，诱导后的细胞能表达神经元特异性标志NSE和MAP2，阳性表达率A组[分别为（73．6±7．8）％，（75．5±8．5）％]明显高于B组[分别为（31．0±4．3）％、（33．5±5．0）％]，而星形胶质细胞特异性标志GFAP阳性细胞较少，A、B、C三组阳性表达率分别为（4．7±3．3）％、（5．1±4．6）％、（8．5±3．2）％。结论LiCl联合生长因子bFGF体外可诱导人脐血MSCs分化为神经元样细胞。
- 邓许勇闫慧博鲁凯伍金大地
- 关键词：人脐带血间充质干细胞氯化锂分化
- 大鼠脊髓全横断损伤模型标准化的初步探索被引量：5
- 2008年
- 目的:对比研究两种脊髓全横断模型大鼠的后肢运动功能评分和病理学特征,探索建立标准化的脊髓全横断模型。方法:成年雌性SD大鼠60只,随机分为A组(n=12)、B组(n=24)和C组(n=24),每组再随机分为术后7、14、28d3小组。以T9椎体为中心,A组行椎板切除,为假手术对照组;B、C两组行脊髓全横断,造成脊髓急性损伤模型,其中B组采用常规外科方法造模,C组采用标准化显微操作技术造模。各小组于术后7、14和28d行后肢运动功能BBB评分,然后采用过量麻醉处死大鼠,经心脏灌注取材,切片行HE染色。观测脊髓横断处瘢痕组织厚度、脊髓残端间距、空洞横径和脑脊液囊腔形成情况,计算瘢痕指数、残端间距指数和空洞指数,并对B、C两组的BBB评分及各项检测指标进行对比研究。结果:A组术前、术后BBB评分和脊髓病理无明显变化。B、C两组大鼠术后后肢完全性瘫痪,其中B组大鼠后肢功能无恢复。术后1～2周,C组大鼠开始出现后肢运动功能自发性恢复,且C组脊髓病理学检测指标值均明显低于B组,差异具有极显著性意义(P<0.01)。各组病理学观测指标与BBB评分之间无相关关系。结论:标准化脊髓全横断造模方法有利于消除个体差异,更有利于对治疗效果的量化分析和研究比较。
- 尹文化金大地鲁凯伍闫慧博余磊王璐
- 关键词：脊髓损伤
- GDNF基因修饰的嗅鞘细胞移植联合IN-1注射修复大鼠急性脊髓损伤被引量：4
- 2009年
- 目的研究胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的嗅鞘细胞（OECs）移植联合轴突生长抑制蛋白抗体（IN-1）局部持续注射对大鼠急性横断性脊髓损伤（SCI）的修复作用。方法构建载有GDNF基因的慢病毒（Lentivirus）载体并体外转染OECs，WesternBlot检测GDNF的表达。用50只成年雌性SD大鼠建立胸脊髓全横断损伤模型，随机分为A（对照组）、B（IN-1微泵注射组）、c（OECs组）、D（GDNF-OECs组）和E（GDNF-OECs＋IN-1组）5组各10只。应用神经丝蛋白200（NF200）单抗免疫组化、生物素化的葡聚糖胺（BDA），顺行神经追踪对SCI区神经纤维再生进行形态学观察。采用BBB评分评估大鼠后肢功能恢复情况。结果术后共有13只大鼠死亡。术后8周可观察到Hoechst标记的OECs在体内存活并在脊髓内迁移；E组和D组可见SCI区杂乱无序的再生轴突，有连续性神经纤维通过损伤区；C组可见少量无序的再生轴突，可疑连续性神经纤维通过损伤区；B组和A组脊髓残端萎缩，未见轴突再生。A、B、C、D和E组后肢功能运动平均BBB评分分别为7．70±0．24、7．89±0．15、10．50±0．25、11．43±0．23和12．81±0．40。结论GDNF-OECs移植联合IN-1抗体注射可有效促进损伤脊髓神经轴突的存活、再生，促进损伤脊髓的修复。
- 闫慧博张忠民金大地王晓佳鲁凯伍
- 关键词：细胞移植胶质细胞源性神经营养因子脊髓损伤
- 大鼠脊髓去细胞支架化学萃取方法的初步探讨
- 2009年
- 脊髓损伤是脊柱外科常见疾病，制备脊髓去细胞支架，获得天然的脊髓基质和三维结构，构建组织工程化脊髓，可能有助于改变目前脊髓损伤治疗效果不理想的现状。应用化学萃取的方法可有效制备同种异体外周神经去细胞支架，而且不出现宿主免疫排斥反应。本研究采用Sondell等报道的方法萃取大鼠脊髓，观察其形态学变化特点，为制备具有天然脊髓结构的组织工程化脊髓提供理论依据。
- 尹文化鲁凯伍邓许勇金大地
- 关键词：脊髓损伤化学萃取组织工程化免疫排斥反应
