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猪繁殖与呼吸综合征病毒检测方法的研究进展被引量：17: 2014年; 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，eRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）引起的以猪繁殖障碍与呼吸道疾病为特征的主要疫病之一。该病于1987年在美国首次发现，随后德国、法国及全世界很多国家也报道了该病。2006年我国首次暴发由PPRSV变异株引起的“猪无名高热症”，给养猪业造成了重大的经济损失。根据血清学及结构基因序列，已将PRRSV划分成2个基因型：欧洲型（A群，代表株为Lelystad—virus，Lv）和美洲型（B群，代表株为vR．2332株）。我国流行的病毒株主要是美洲型。; 朱佳毅任晓峰; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征 PRRS病毒猪繁殖障碍无名高热症 PRRSV

猪轮状病毒DN30209株的驯化培养被引量：1: 2013年; 为获得一株猪轮状病毒弱毒疫苗的候选株,用恒河猴肾细胞(MA-104)培养之前分离的猪轮状病毒DN30209株(PRV DN30209),并对预处理病毒的胰酶的浓度及时间、维持液(DMEM)中胰酶浓度和时间等条件进行优化,在最佳培养条件下对病毒进行连续传代,检测各代次病毒的TCID50,达到最高且稳定时,用该代次的病毒免疫PRV阴性BALB/c小鼠,于免疫后不同时间检测血清特异性中和抗体效价。结果,经20μg/mL胰酶37℃孵育40min,吸附90min,在含2μg/mL胰酶的DMEM中,病毒能在MA-104稳定增殖。经60代培养病毒TCID50由最初的103.40/mL增至106.00/mL,传至第60～63代时病毒TCID50维持在106.00/mL左右,并趋于稳定。选第60代病毒免疫小鼠,2周后小鼠血清中和效价为1∶91,4周后达到1∶128。结果表明,PRV DN30209株通过传代驯化培养可以作为弱毒疫苗候选株。; 赵高伟段凤娟任玉东佟玲王婧婧曹丽艳任晓峰; 关键词：轮状病毒疫苗株

猪传染性胃肠炎病毒M蛋白的表达与抗体制备被引量：3: 2014年; 文章表达猪传染性胃肠炎病毒TGEV M基因,制备抗M蛋白多克隆抗体。扩增的M基因经Bam H I和Eco R I双酶切后克隆到原核表达载体PGEX-6P-1上,构建重组表达质粒PGEX-6P-1-TGEV-M,经IPTG诱导,获得以包含体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白作为免疫原免疫大白兔制备兔抗TGEV-M抗体,进行效价测定及生物活性检测。结果表明,多抗效价达1:262 144;间接ELISA和间接免疫荧光试验说明,此多抗可与TGEV-M重组蛋白及TGEV发生抗原抗体反应。此多抗可作为鉴别诊断试剂将TGEV从众多猪源病毒中区分出来。; 任晓峰邹昊孙雪娇; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒原核表达抗体制备

M13噬菌体肽库扩增及兔抗血清制备被引量：1: 2013年; 为制备M13噬菌体多克隆抗体,将噬菌体十二肽原始文库进行大量扩增,作为免疫原制备兔抗M13的多克隆抗体血清并进行间接ELISA鉴定。结果表明,该多抗效价达1 1 048 576,说明此多抗可与扩增噬菌体文库发生很好的抗原抗体反应。将制备的噬菌体M13多克隆抗体与商业化M13抗体水平比较,制备多抗与商业化M13抗体效果相当。本研究成功制备兔抗M13噬菌体多克隆抗体,为深入研究噬菌体展示技术提供了材料。; 任晓峰马晓微; 关键词：噬菌体肽库间接ELISA

猪流行性腹泻病毒S1蛋白截短表达及多抗制备被引量：6: 2013年; 文章旨在表达猪流行性腹泻病毒PEDV截短S1基因(rS1636-789),并制备特异性多克隆抗体。扩增PEDV rS1636-789基因克隆到原核表达载体PGEX-6P-1上,构建重组表达质粒PGEX-6P-1-rS1636-789,经IPTG诱导,获得以包含体形式表达重组蛋白。将重组蛋白作为免疫原制备兔抗rS1636-789抗体并进行效价测定及生物活性检测。结果表明,多抗效价达1:65 536,间接ELISA和Western blot说明此多抗可与rS1636-789重组蛋白发生很好抗原抗体反应。研究进一步定位PEDV S蛋白免疫优势区,为PEDV基因工程疫苗研究奠定基础。; 任晓峰贾文龙; 关键词：猪流行性腹泻病毒表位原核表达抗体制备

细胞自噬与病毒感染被引量：4: 2013年; 自噬是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性降解途径,在维持细胞存活、更新、物质再利用和内环境稳定中起着重要作用。目前已经发现大量新的自噬相关基因,同时发现自噬在病毒感染过程中发挥着重要的抗病毒作用:自噬可以将胞质中的病毒转运到溶酶体中,降解病毒;也可以将病毒核酸转运至胞内感受器上激活天然免疫;还可以将病毒抗原递呈给MHCⅡ类分子激活适应性免疫。自噬参与胞内微生物感染具有双重作用。一方面,自噬能够降解入侵的微生物,即以异源吞噬(xenophagy)的方式清除胞内的病原体;另一方面,有些微生物能够通过某些机制逃避自噬而利于自身存活。本文就细胞自噬及其与不同病毒感染关系的最新研究进展进行综述。; 陶冶任晓峰; 关键词：细胞自噬病毒自噬相关基因

猪繁殖与呼吸综合征病毒HH08株GP3蛋白的原核表达及其多抗血清的制备与检测: 2013年; GP3蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒次要结构蛋白之一,是由ORF3基因编码一种高度糖基化糖蛋白,在病毒致病性、复制、装配、变异和保护性反应等方面具有重要意义。目前对GP3蛋白研究仍不透彻,在病毒感染细胞过程中所起作用也不清楚。试验扩增PRRSV-HH08株ORF3,连接至PGEX-6P-1载体,导入大肠杆菌内诱导表达,获得以包涵体存在GP3蛋白,纯化后作为抗原制备兔抗GP3多抗血清,Western-blotting结果表明,该蛋白与多抗血清有免疫反应,鉴于ORF3与ORF5基因保守度极低,可用于与其他蓝耳病毒株GP3或GP5蛋白为抗原制作多抗血清比较敏感性及特异性。; 任晓峰刘和; 关键词：PRRSV 抗血清

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-10-0144)