国家科技重大专项(2009ZX08006-003B)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：孟庆玲陈创夫蔡扩军乔军黄炯更多>>
- 相关机构：石河子大学新疆畜牧科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- O型口蹄疫病毒间接免疫荧光检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为建立猪O型口蹄疫病毒(FMDV)间接免疫荧光(IFA)检测方法,以猪抗O型口蹄疫病毒阳性血清为一抗、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的SPA蛋白(葡萄球菌蛋白A)为二抗,通过反应条件的优化,建立检测方法。结果表明,IFA最佳工作条件为,一抗最适稀释度为1∶50,FITC标记的二抗的最适稀释度为1∶800,最适孵育时间均为1h。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法只能检测O型FMDV,而A型、AsiaⅠFMDV型和猪水疱病病毒(SVDV)检测结果均为阴性。建立的检测O型FMDV抗原的IFA检测方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,可用于FMDV感染的实验室诊断及其在感染机体中的定位和动态分布研究。
- 蔡扩军乔军孟庆玲陈创夫马铈委黄炯魏婕
- 关键词：O型口蹄疫病毒间接免疫荧光
- 靶向O型口蹄疫病毒shRNA转基因猪体细胞抗病毒活性研究
- 2013年
- 为研究靶向O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因shRNA转基因猪体细胞的抗病毒活性,本实验在成功培育转基因克隆猪的基础上,通过分离与培养转基因猪体细胞,对其shRNA进行PCR和Southern blot检测,并将FMDV感染体细胞中,通过细胞病变(CPE)、间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析转基因猪体细胞抗FMDV活性。结果表明,转基因猪体细胞基因组DNA中携带有靶向FMDV VP1基因的shRNA基因片段。与非转基因猪体细胞相比,接种FMDV转基因猪体细胞其出现CPE的时间延迟,细胞内病毒含量显著降低,细胞感染病毒36 h时,对细胞中FMDV VP1基因抑制效率为53.6%。表明该靶向FMDV shRNA转基因克隆猪体细胞在体外具有良好的抗病毒活性。本研究为进一步在体内评价转基因动物的抗病毒活性奠定了基础。
- 蔡扩军马铈委乔军孟庆玲陈创夫黄炯张再超杨海波
- 关键词：SHRNA转基因克隆猪体细胞抗病毒活性
- 靶向口蹄疫病毒shRNA表达载体转染后特异性siRNA的分子检测
- 2013年
- 通过Poly A polymerase对小干扰RNA分子(Small interfering RNA,siRNA)3′端进行加"Poly A"处理,然后进行RT-PCR扩增,并将扩增产物克隆到T载体上进行测序。结果表明,通过该方法可以快速检测FMDV特异性siRNA分子的表达,这为siRNA的干扰FMDV复制分子机制和抗FMDV转基因动物细胞水平的评价研究提供了技术支撑。
- 蔡扩军孟庆玲乔军陈创夫马饰委黄炯张再超田振中杨丽红
- 关键词：SIRNA反转录PCR口蹄疫病毒
