国家自然科学基金(81000066)
- 作品数：7 被引量：25H指数：2
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- PI3K信号通路在神经生长因子β减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧时内质网应激性细胞凋亡中的作用
- 2015年
- 目的 评价1-磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信号通路在神经生长因子β（NGF-β）减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧时内质网应激性细胞凋亡中的作用.方法 H9c2细胞株,以5＆#215; 105个/ml的密度接种于96孔板（100μl/孔）.采用随机数字表法,将培养孔分为5组（n=15）：正常对照组（C组）、缺氧/复氧组（H/R组）、NGF-β组（N组）、NGF-β＋ NGF-β受体trkA拮抗剂K252a组（N＋K组）和NGF-β＋PI3K抑制剂LY294002组（N＋L组）.H/R组、N组、N＋K组和N＋L组接种于无氧培养基,在95％ N2-5％CO2无氧培养箱内孵育4h,然后在有氧培养基中培养4 h;N组、N＋K组和N＋L组复氧的同时分别用含NGF-β、NGF-β与K252a的混合液和NGF-β与LY294002混合液的有氧培养基孵育,NGF-β、K252a和LY294002的终浓度分别为50 ng/ml、100 nmol/L和50 μmol/L.采用CCK-8法测定细胞存活率,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP）、caspase-12、Akt、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）的表达水平,并计算p-Akt与Akt表达的比值（p-Akt/Akt）.结果 与C组比较,H/R组和N组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,H/R组GRP78、CHOP和caspase-12的表达上调,N组p-Akt/Akt升高（P＜0.05）;与H/R组比较,N组细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,GRP78、CHOP和caspase-12的表达下调,p-Akt/Akt升高（P＜0.05）,N＋K组和N＋L组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与N组比较,N＋K组和N＋L组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,GRP78、CHOP和caspase-12的表达上调,p-Akt/Akt降低（P＜0.05）.结论 NGF-β可减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧时内质网应激性细胞凋亡,其机制与激活PI3K信号通路有关.
- 魏珂谢飞刘力罗洁闵苏
- 关键词：1-磷脂酰肌醇3-激酶内质网细胞凋亡细胞低氧
- 神经生长因子β预先给药对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响：与预处理法比较被引量：1
- 2013年
- 目的 评价神经生长因子β（NGF-β）预先给药对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,8～ 10周龄,体重200～300 g,制备Langendorff离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏24个,采用随机数字表法,将其分为3组（n=8）：缺血再灌注组（I/R组）、NGF-β预先给药组（NGFPt组）、NGF-β预处理组（NGFPc组）.各组先用K-H液平衡灌注10 min；I/R组K-H液继续灌注30 min,NGFPt组用含0.1 μg/ml NGF-β的K-H液继续灌注20 min,NGFPc组用含0.1 μg/ml NGF-β的K-H液继续灌注20 min,再用K-H液冲洗10 min；各组均停灌30 min,K-H液复灌120 min.于平衡灌注末、停灌前即刻、再灌注5、30、60和120 min（T1-6）时,记录心率（HR）、左室舒张末压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左室内压最大上升速率（＋dp/dtmax）；于T1和T3-6时收集冠脉流出液2 ml,测定肌酸激酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）的活性；T6时取心肌组织测定心肌细胞凋亡情况,观察心肌病理学改变.结果 与T1时比较,各组T3-6时＋ dp/dtmax降低,LVEDP、冠脉流出液CK-MB、LDH的活性升高,I/R组T3-6时LVDP、HR降低,NGFPt组T3,4时和NGFPc组T3-6时LVDP降低,NGFPt组和NGFPc组T2-6时HR升高（P＜0.05）.与I/R组比较,NGFPt组和NGFPc组LVDP、＋dp/dtmax和HR升高,LVEDP、冠脉流出液CK-MB、LDH活性和心肌细胞凋亡指数降低（P＜0.05）；与NGFPc组比较,NGFPt组LVDP、HR和＋ dp/dtmax升高,冠脉流出液LDH活性降低,心肌细胞凋亡指数降低（P＜0.05）,LVEDP和冠脉流出液CK-MB活性差异无统计学意义（P＞0.05）.I/R组心肌病理学损伤明显,而NGFPt组和NGFPC组明显减轻.结论 NGF-β（0.1 μg/ml）预先给药可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,其效果优于预处理法.
- 敖丽魏珂刘力闵苏
- 关键词：神经生长因子缺血预处理心肌再灌注损伤预先给药
- 神经生长因子对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后凋亡的保护作用及其机制被引量：15
- 2014年
- 目的探讨神经生长因子(NGF)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后凋亡的保护作用及其机制。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、NGF组(N组)、NGF+PI3k受体特异性阻断剂LY294002组(N+L组)和LY294002组(L组)。C组用正常培养液在通有95%空气+5%CO2的37℃培养箱内正常培养8 h;H/R组用预先经95%N2+5%CO2的混合气饱和1 h的模拟缺氧液置换正常培养液后,放入通有95%N2+5%CO2的37℃培养箱缺氧培养4 h,然后将模拟缺氧液换用预先经95%空气+5%CO2饱和的正常培养液,在正常条件下复氧4 h;N组、N+L组和L组先缺氧培养4 h(缺氧条件同H/R组),再分别用预先经95%空气+5%CO2饱和的含NGF、NGF+LY294002和LY294002的正常培养液置换模拟缺氧液,在正常条件下复氧4 h。NGF和LY294002的终浓度分别为0.05 mg·L-1和3 mg·L-1。CCK-8比色法测定各组细胞的存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测胞内Akt磷酸化水平及内质网应激蛋白Caspase-12蛋白的表达。结果 N组与N+L组或H/R组或L组相比能明显提高H9c2心肌细胞经H/R损伤后的存活率,减少细胞凋亡率,上调Akt磷酸化水平,降低内质网应激蛋白Caspase-12表达;LY294002明显抑制了NGF对Akt磷酸化水平的上调作用。结论 NGF对经H/R损伤的H9c2心肌细胞有抗凋亡作用,其机制可能与PI3k-Akt通路有关。
- 谢飞魏珂闵苏郝学超朱贤林
- 关键词：H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤神经生长因子
- 神经生长因子β预先给药对大鼠离体心脏再灌注时内质网应激性细胞凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的 评价神经生长因子β（NGF-β）预先给药对大鼠离体心脏缺血再灌注时内质网应激性细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠32只,体重180 ～ 220 g,制备Langendorff离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏32个,采用随机数字表法,将其分为4组（n=8）：正常对照组（C组）、缺血再灌注组（I/R组）、NGF-β预先给药组（N组）和NGF-β联合trkA受体拮抗剂K252a组（N＋K组）.C组用K-H液持续灌注195 min.I/R组先用K-H液平衡灌注45 min,N组和N＋K组用K-H液平衡灌注15 min,再分别用含有0.1 μg/ml NGF-β和0.1 μg/ml NGF-β混合100 nmol/L K252a的K-H液继续灌注30min.除C组外,其余各组均停止灌注30 min和再灌注120 min.于平衡灌注末（基础水平）、再灌注5、30、60和120 min时记录心率（HR）、左室舒张末压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左室内压最大上升速率（＋dp/dtmax）;再灌注120 min时取心肌组织,测定心肌细胞凋亡指数、葡萄糖调节蛋白78 （GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和caspase-12的表达水平.结果 与C组比较,I/R组和N组HR、LVDP和＋dp/dtmax降低,LVEDP升高,心肌组织细胞凋亡指数、GRP78和CHOP表达升高,I/R组心肌组织caspase-12表达上调（P＜0.05）;与I/R组比较,N组HR、LVDP和＋dp/dtmax升高,LVEDP降低,心肌组织细胞凋亡指数、GRP78、CHOP和caspase-12表达降低,N＋K组心肌组织GRP78表达下调（P＜0.05）,心功能各指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与N组比较,N＋K组HR、LVDP和＋dp/dtmax降低,LVEDP升高,心肌组织细胞凋亡指数、GRP78和CHOP表达升高,心肌组织caspase-12表达上调（P＜0.05）.结论 NGF-β预先给药可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,其机制与激活trkA受体后抑制内质网应激性细胞凋亡有关.
- 魏珂刘力谢飞罗洁闵苏
- 关键词：内质网细胞凋亡心肌再灌注损伤
- 内源性神经生长因子在大鼠心脏缺血再灌注急性期的表达变化被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨内源性神经生长因子（NGF）在大鼠心脏缺血再灌注过程中不同阶段和不同部位表达的特点.方法 健康清洁级雄性SD大鼠24只,鼠龄8～10周,体重200～300 g,随机分为3组（n=8）：假手术组（S组）、单纯缺血组（I组）和缺血再灌注组（I/R组）,术中监测左心血流动力学.S组左冠状动脉前降支（LAD）仅穿线,不结扎,持续观察150 min后抽血取心肌标本;I组结扎LAD 30 min; I/R组结扎LAD 30 min后,复灌120 min制备心脏缺血再灌注损伤模型.各组实验处理结束后在颈总动脉处采血测定血清肌酸激酶（CKMB）和乳酸脱氢酶（LDH）的浓度,然后处死大鼠.I/R组分别取左室和右室心肌组织用免疫组化法观察NGF的表达.各组取心尖组织心肌Westem-bloting测定NGF的表达;RT-PCR检测各组NGFmRNA的表达.结果 与S组相比,I组和I/R组在缺血和再灌注末期左心功能明显降低,血清LDH、CKMB浓度升高,心肌组织中NGF mRNA和NGF蛋白表达均明显增加（P＜0.05）,I/R组高于I组;在经历I/R的心脏中,缺血区NGF表达高于非缺血区（P＜0.05）.结论 心肌缺血能诱发内源性NGF的表达增加并持续至再灌注过程,这种NGF的高表达在缺血区心肌中尤其明显.
- 魏珂敖丽刘力闵苏
- 关键词：神经生长因子再灌注损伤心肌
- 体外循环术后认知功能障碍的机制和相应预警指标的研究展望被引量：8
- 2015年
- 体外循环术后认知功能障碍(POCD)发生率居高不下,严重影响患者预后生活质量。本文总结了体外循环术后POCD的发生机制,包括:炎性反应和氧化应激机制、Tau蛋白的过度磷酸化机制、大脑皮层中血容量和血氧降低机制,并根据其发病机制选择相应的POCD预警指标,以期通过不同技术手段所得结果的交叉印证,最终推进POCD的早期诊断和防治。
- 刘超韩建阁
- 关键词：体外循环发病机制预警指标
- 不同浓度神经生长因子β预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨不同浓度神经生长因子β（NGF—β）预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响。方法健康SPF级雄性sD大鼠，8～10周龄，体重200～300g，采用Langendorff装置制备离体心脏灌注模型。取模型制备成功的心脏32个，采用随机数字表法，将离体心脏随机分为4组（n=8）：缺血再灌注组（I／R组）和不同浓度NGF-8组（N，组～N，组）。I／R组用K-H液继续灌注30min，停灌30min，复灌120min；N1组～N3组分别用含有0．1、0．2和0．4ng／ml鼠源性NGF-β的K—H液继续灌注20min，再用K—H液冲洗10min，停灌30min，复灌120min。于平衡灌注末（T1）、停灌前即刻（T2）及再灌注5（L）、30（T4）、60（L）、120min（L）时记录HR、左室舒张末压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左心室内压最大上升速率（＋dp／dtmax）。于T1、T3—T6时收集冠状动脉流出液，测定CK-MB、LDH的活性；T6时取心肌组织，采用TUNEL法检测细胞凋亡情况，计算凋亡指数，并观察心肌病理学结果。结果 与T1时比较，各组L～R时LVDP、＋dp／dtmax降低，LVEDP升高，LDH和CK．MB活性升高，I／R组、N2组和N，组HR降低，N，组HR升高（P〈0．05）；与I／R组比较，N1组LVDP、＋dp／dtmax和HR升高，LVEDP降低，CK和LDH活性降低，凋亡指数降低，N2组HR、LVDP和＋dp／dtmax降低，CK和LDH活性升高（P〈0．05），LVEDP和凋亡指数差异无统计学意义（P〉0．05），N，组LVDP、HR和＋dp／dtmax降低，LVEDP、CK和LDH活性、凋亡指数升高（P〈0．05）；与N1组比较，№组和N3组LVDP、＋dp／dtmax和HR降低，LVEDP、CK和LDH活性、凋亡指数升高（P〈0．05）；与N2组比较，N3组LVDP、＋dp／dtmax和HR降低，LVEDP、CK和LDH活性、凋亡指数升高（P〈0．05）。N。组心肌病理学损伤较I／R组、N1组和N，组减轻。结论适宜浓度的NGF—β预处理可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤，而浓度�
- 敖丽魏珂刘力闵苏
- 关键词：神经生长因子缺血预处理心肌再灌注损伤
