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河北省卫生厅科研基金(20130105)
河北省卫生厅科研基金(20130105)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：石晓明吕柏楠吴胜春唐雷杨永宾更多>>
- 相关机构：河北省人民医院更多>>
- 发文基金：河北省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默AQP-5表达对结肠癌细胞株HT-29凋亡影响机制探讨被引量：1
- 2015年
- 目的通过抑制内源性水通道蛋白(AQP-5)的表达,探讨AQP-5对HT-29细胞凋亡及凋亡抑制蛋白(inhibitaors of apoptosis proteins,IAPs)表达的影响。方法体外常规培养人结肠癌HT-29细胞,通过siRNA技术抑制内源性AQP-5的表达,并经蛋白质印迹法检测AQP-5-siRNA转染效率;采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染AQP-5-siRNA的HT-29细胞IAPs家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP、NAIP、Survivin和Livin表达水平。结果蛋白质印迹法检测结果显示,转染AQP-5-siRNA的HT-29细胞AQP-5表达下调达90%。MTT分析结果显示,与转染NS-siRNA组细胞增殖抑制率(1.13±0.11)%相比,AQP-5-siRNA组的HT-29细胞增殖抑制率显著增加,高达(27.9±5.16)%,t=12.705,P<0.001;流式细胞分析结果发现,与NS-siRNA组细胞凋亡率(0.99±0.18)%相比,AQP-5-siRNA组的HT-29细胞凋亡率显著增加,高达(10.81±1.32)%,t=-12.767,P<0.001。荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,与转染NS-siRNA组相比较,AQP-5-siRNA组c-IAP1(t=-3.232,P=0.018)、c-IAP2(t=-0.651,P=0.001)、XIAP(t=-9.296,P<0.001)和Livin(t=-8.07,P<0.001)的mRNA表达水平下降,AQP-5-siRNA组c-IAP1(t=-0.591,P=0.007)、c-IAP2(t=-4.889,P=0.008)、XIAP(t=-6.487,P=0.003)和Livin(t=-6.216,P=0.003)蛋白表达水平也下降,其中以XIAP下降最明显;Survivin和NAIP表达变化不明显。结论 AQP-5-siRNA可体外促进HT-29细胞凋亡,其机制可能与下调c-IAP1、c-IAP1、XIAP和Livin mRNA及蛋白表达有关。
- 石晓明吴胜春唐雷杨永宾吕柏楠
- 关键词：结肠肿瘤水通道蛋白5凋亡抑制蛋白
- 水通道蛋白-8对结肠癌细胞株HT-29多药耐药因子的影响被引量：1
- 2014年
- 目的 通过转染过表达水通道蛋白-8（AQP-8）的真核表达载体,观察AQP-8对结肠癌HT-29细胞株多药耐药因子表达的影响.方法 取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验.构建绿色荧光蛋白（GFP）-AQP-8真核表达载体并转染至HT-29细胞,通过Western blot检测GFP-AQP-8转染效率;采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率;通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot检测转染GFP-AQP-8的HT-29细胞多药耐药因子P-糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽S转移酶-π（GST-π）及拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）的mRNA和蛋白相对表达量.结果 Western blot结果显示,GFP-AQP-8转染后结肠癌HT-29细胞AQP-8mRNA相对表达水平（0.976 ±0.086）与对照质粒GFP-N1转染组（0.140 ±0.024）比较显著上调（P＜0.05）.MTT分析结果显示,转染了GFP-AQP-8的结肠癌HT-29细胞增殖抑制率[（22.86±3.75）％]与GFP-N1组[（1.12±0.17）％]比较显著升高（P＜0.05）;与转染GFP-N1的对照组[（4.95±0.58）％]比较,转染了GFP-AQP-8的HT-29的细胞凋亡率显著增加[（14.08±2.37）％,P＜0.05].FQ-PCR和Western blot结果显示,GFP-AQP-8组P-gp、GST-π和TopoⅡ的mRNA表达水平（分别为0.44±0.05、0.34±0.03、0.38±0.05）比转染GFP-N1的对照组各基因mRNA表达水平（分别为0.99±0.12、1.02±0.12、0.96±0.14）均明显降低（P＜0.05）,GFP-AQP-8组P-gp和GST-π蛋白表达水平（分别为0.28±0.04、0.37±0.05）与转染GFP-N1对照组表达水平（分别为0.83±0.08、0.75±0.10）比较明显下降（P＜0.05）,TopoⅡ的蛋白表达在GFP-AQP-8组（0.60±0.08）与GFP-N1组（0.62±0.07）比较变化不明显（P＞0.05）.结论 过表达AQP-8可抑制HT-29细胞生长,该抑制作用可能与抑制耐药基因P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达有关.
- 杜海潮刘杰石晓明吴胜春姜广伟吕柏楠
- 关键词：结肠肿瘤多药耐药性
