国家科技重大专项(2008ZX10003-009) 作品数:25 被引量:250 H指数:8 相关作者: 赵雁林 夏辉 宋媛媛 赵冰 李强 更多>> 相关机构: 中国疾病预防控制中心 北京市结核病胸部肿瘤研究所 广州市胸科医院 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 首都医学发展科研基金 比尔和梅琳达·盖茨基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
相对定量分析异烟肼、链霉素单耐药与多耐药结核分枝杆菌临床分离株的蛋白质组差异 被引量:2 2018年 【目的】探讨异烟肼(isoniazid,INH)、链霉素(streptomycin,SM)单耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)与INH/SM多耐药MTB蛋白质组差异。【方法】应用i TRAQ结合Nano LC-MS/MS定量蛋白质组学技术,分析临床分离INH、SM或INH/SM耐药MTB与H37Rv标准株间均表达差异蛋白;并以INH/SM耐药MTB与H37Rv比值为对照,相对定量分析单耐药与多耐药MTB蛋白表达差异倍数;运用DAVID 6.7分析差异蛋白生物功能;STITCH 5.0分析差异蛋白与INH和SM相互作用。【结果】与H37Rv标准株比较,58个蛋白在INH、SM耐药与INH/SM耐药MTB间均有表达差异,共同差异蛋白生物功能主要为氧化还原酶活性和转移酶活性;主要参与丙酸代谢信号通路。共同差异蛋白中,与INH/SM耐药MTB比较,Rv2986c和Rv1908c在INH、SM耐药MTB均表达上调>1.25倍;Rv3133c和Rv0577则均表达下调<0.7倍;生物信息学预测发现以上4种蛋白可直接或间接与INH、SM进行相互作用。【结论】INH、SM单耐药和INH/SM多耐药MTB蛋白表达谱有较大差异,蛋白Rv2986c、Rv1908c、Rv3133c和Rv0577表达水平及相互作用可能与INH和SM耐药有关。 朱传智 赵雁林 黄香玉 逄宇 庄玉辉 何秀云关键词:结核分枝杆菌 异烟肼 链霉素 197例临床结核分枝杆菌分离株的快速耐药性检测报告 2010年 目的评估线性探针MTBDR—Plus检测临床分离株对利福平(RFP)和异烟肼(INH)药物敏感性的效能。方法应用病例对照研究方法选取197例临床结核菌分离株,进行传统比例法药物敏感性试验和MTBDR—Plus检测,分析MTBDR—Plus方法的敏感性和特异性。结果MTBDR-Plus方法检测RFP和INH耐药的敏感性分别为88.6%和79.3%,特异性分别为98.8%和98.8%。结论MTBD-Plus方法灵敏度和特异性高,具有较好的应用前景。 李强 赵雁林关键词:分枝杆菌 结核 利福平 异烟肼 微生物敏感性试验 结核分枝杆菌对左氧氟沙星与莫西沙星的交叉耐药性及gyrA和gyrB基因突变分析 被引量:23 2010年 目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对左氧氟沙星(1evofloxacin,LVF)与莫西沙星(moxifloxacin,MXF)的交叉耐药性,分析gyrA和gyrB基因突变位点分布及突变位点与耐药水平的关系。方法采用改良罗氏培养基检测MTB标准菌株H。,Rv、66株LVF耐药和55株LVF敏感的MTB临床分离菌株LVF和MXF的最低抑菌浓度(minimal inhibition concentration,MIC)。通过PCR直接测序法测定gyrA和gyrB耐药基因片段。结果MXF的MIC比LVF低2~4倍,MXF抗MTB菌株的活性是LVF的2~4倍。MTB标准菌株H37Rv未见gyrA和gyrB基因突变。66株LVF耐药和55株LVF敏感菌株均存在gyrAAGc95ACC(Ser→Thr)突变;55株LVF敏感菌株gyrA和gyrB基因未见其他突变。66株LVF耐药菌株中,40株(60.6%)gyrA GAC94(AAC或GGC或GCC或CAC或TAC)(Asp→Asn或Gly或Ala或His或Tyr)突变;19株(28.8%)gyrAGCG90GTG(Ala→Val)和1株(1.59/6)gyrA GCG90AAG(Ala→Lys)(未见报导)双碱基突变;3株(4.6%)gyrA TCG91CCG(Ser→Pro)突变;1株(1.5%)gyrBGAC500AAC(Asp→Asn)突变;2株(3.0%)呈gyrA GAC94(AAC或GCC)(Asp→Asn或Ala)与gyrB GGG551AGG(Gly→Arg)(未见报导)双位点突变。gyrA GAC94(AAC或GGC)(Asp→Asn或Gly)突变引起FOs药物较高水平耐药;GAC94GCC(Asp→Ala)和GCG90GTG(A1a→Val)突变引起FQs药物较低水平耐药。结论LVF与MXF之间存在交叉耐药,MXFMIC随LVFMIC增高而增高,但耐药水平不同。GyrA基因突变位点可能与耐药水平有关,有可能根据基因突变的位点分析耐药水平。 李国利 陈澎 孙昌文 张灵霞 李邦印 赵雁林关键词:氧氟沙星 莫西沙星 GYRA GYRB 116株结核分枝杆菌链霉素耐药菌株rspL和rrs基因突变特征研究 被引量:5 2010年 谢彤 李桂莲 巨韩芳 赵德福 赵慧 穆成 王撷秀关键词:耐药菌株 链霉素 结核分枝杆菌 突变特征 氨基糖苷类抗生素 RPSL基因 耐异烟肼和链霉素的结核分枝杆菌临床分离株与敏感株差异蛋白表达研究 被引量:2 2013年 目的鉴定结核分枝杆菌对异烟肼和链霉素耐药相关的潜在蛋白。方法以药物敏感株(01105)和标准株H37Rv为对照,核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)结合Nano液相色谱-串联质谱分析仪(LC-MS-MS)技术和生物信息学,鉴定并相对定量结核分枝杆菌对异烟肼与链霉素耐药的临床分离株02166菌体蛋白。结果 02166菌株分别与01105菌株和H37Rv菌株比较差异表达蛋白为153个和130个,02166菌株与01105菌株和H37Rv比较差异表达蛋白均为86个(共同差异表达蛋白)。差异表达蛋白理论相对分子质量和等电点分布广泛,相对分子质量从7.63~326.22,等电点从3.74~12.48,其主要参与中间代谢、呼吸作用和脂类代谢。共同差异表达蛋白:9个核糖体蛋白(Rv0056、Rv0651、Rv0652、Rv0701、Rv0719、Rv1630、Rv2785c、Rv2909c和Rv3458c)在02166菌株中表达下调;5个蛋白(Rv0234c、Rv2466c、Rv2626c、Rv2986c和Rv3118)在02166菌株中呈显著差异表达,其中琥珀酸半醛脱氢酶(Rv0234c)和假定未知蛋白(Rv2466c)在02166菌株中表达上调倍数>1.2,DNA结合蛋白HU同系物hupB(Rv2986c)、假定未知蛋白(Rv2626c和Rv3118)在02166菌株中表达下调倍数<0.5。结论 iTRAQ发现了耐异烟肼和链霉素的结核分枝杆菌临床分离株差异表达蛋白,为进一步探讨结核分枝杆菌异烟肼或链霉素耐药机制奠定了基础。 何秀云 朱传智 黄香玉 蒋丽气 庄玉辉 逄宇 赵雁林关键词:异烟肼 链霉素 SMIS检测分枝菌酸在分枝杆菌菌种鉴定中的作用 2011年 目的评估用SMIS检测分枝菌酸在分枝杆菌菌种鉴定中的作用。方法收集北京市结核病胸部肿瘤研究所2007年1~12月的分枝杆菌118株,通过PNB培养基初筛,其中结核分枝杆菌复合群25株,非结核分枝杆菌93株。同时用测序方法和SMIS分析分枝菌酸方法鉴定118株分枝杆菌,以16SrDNA和16-23S rDNAITS测定作为菌种鉴定的标准,评估利用SMIS分离分枝菌酸鉴定分枝杆菌菌种的符合率及一致性;并验证以上两种方法鉴定结果分别与PNB初筛分结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌结果的符合率及一致性。结果SMIS与测序鉴定分枝杆菌相比的符合率为92%(108/118),其中结核分枝杆菌复合群鉴定的符合率为95%(35/37),非结核分枝杆菌为90%(73/81),Kappa分析显示两种方法鉴定结果的一致性很好(Kappa=0.96)。回顾验证初筛结果显示,SMIS与PNB培养基方法鉴定结果符合率90%(106/118),一致性较好(Kappa=0.73):测序方法与PNB培养基方法鉴定结果符合率也为90%(106/118),一致性较好(Kappa=0.74),但有11株测序和分枝菌酸菌种鉴定方法结果相同的结核分枝杆菌复合群与PNB实验结果不一致。结论利用分枝菌酸对临床分离的分枝杆菌进行菌种鉴定是一种快速、简便和准确的方法,对处置应急和突发公共卫生事件中的分枝杆菌菌种鉴定具有一定的参考价值,是分枝杆菌菌种多相鉴定策略的重要组成部分。 刘冠 宋媛媛 姜广路 赵立平 毕志强 黄海荣 赵雁林关键词:分枝菌酸 分枝杆菌属 rpoB基因在结核分枝杆菌利福平/利福布丁交叉耐药株中突变情况的差异分析 被引量:5 2011年 目的 了解结核分枝杆菌利福平/利福布丁交叉耐药株与利福平耐药/利福布丁敏感株rpoB全基因突变特征的差异.方法 测定rpoB全基因序列,比较278株利福平/利福布丁交叉耐药(rifampicin/rifabutin cross-resistant,RIF/Rfb-R)株和40株利福平耐药/利福布丁敏感(rifampicinresistant/rifabutin-susceptible,RIF-R/Rfb-S)株,30株利福平/利福布丁敏感(rifampicin-susceptible/rifabutin-susceptible,RIF-S/Rfb-S)株及标准株H37 Rv之间的rpoB全基因序列突变差异.结果 利福平/利福布丁敏感株和H37Rv rpoB全基因未发现突变;利福平/利福布丁交叉耐药株的常见突变位点是531(70.5%)和526( 20.9%).223( 80.2%)株单点突变株分别含有S531L、S531W、H526D、H526Y、H526R、Q513K、Q513P、Q510H、V176F、P287R、Y395C及H404Y单点突变,55( 19.8%)株多重突变株分别以S531L、H526R、H526Y、H526D、D516G和Q513K位点与其他位点联合突变为主.利福平耐药/利福布丁敏感株的常见突变位点分别是516(65.0%)、526( 17.5%)和533( 10.0%).21(52.5%)株单点突变株分别含有L533P、H526L、H526S、S522L、D516V、D516Y和D516F单点突变,19(47.5%)株多重突变株分别以D516V和L533P位点与其他位点联合突变为主.结论 本批标本中,利福霉素耐药株rpoB基因突变率为100%,利福平/利福布丁交叉耐药株与利福平耐药/利福布丁敏感株rpoB全基因单点突变株的突变位置或氨基酸替换类型、多重突变株的突变位置或组合类型以及常见突变位点或其氨基酸替换类型完全不同,rpoB全基因DNA序列分析对临床科学应用利福平和利福布丁有指导意义. 胡族琼 蔡杏珊 罗春明 刘欣 邹彩蓉 谭耀驹关键词:细菌蛋白质类 利福平 利福布丁 中国区县级结核病防治机构结核分枝杆菌涂片和培养结果多中心比对分析研究 被引量:4 2011年 目的分析我国区县级结核病防治机构(简称"结防机构")就诊患者痰涂片和培养结果之间的关系。方法选取全国耐药性基线调查期间通过分层整群抽样方法随机抽取的18个区县级结防机构,自2007年4—12月连续纳入的1230例初治和复治涂阳患者痰标本,共计3550份,采取"三涂两培"的方法(即3份痰标本均为阳性,选取阳性级别高的2份痰标本进行培养;3份痰标本2份阳性,选取2份阳性痰标本进行培养;3份痰标本1份阳性,选取阳性标本和1份质量好的阴性标本进行培养),完成涂片和培养试验,计算患者即时痰、夜间痰和晨痰不同痰标本的涂片阳性率和培养阳性率,分析涂片和培养结果的相关关系。结果结核病患者即时痰、夜间痰和晨痰涂片阳性率分别为78.8%(917/1164)、87.0%(1070/1230)和90.0%(1040/1156),即时痰、夜间痰和晨痰培养阳性率分别为96.9%(504/520)、97.1%(881/907)和97.8%(709/725),对2147份痰标本涂片结果阳性级别和培养结果阳性级别进行趋势χ2检验,发现两者存在一定的线性趋势相关关系(χ2=206.2,P<0.01)。结论涂片结果在一定程度上可为培养结果提供依据,涂片阳性级别越高,培养阳性级别也越高。 欧喜超 李强 夏辉 王胜芬 周杨 逄宇 赵冰 宋媛媛 赵雁林关键词:细菌学技术 多中心研究 结核病患者痰样本培养前间期与培养阳性率的相关性分析 被引量:1 2012年 目的探讨结核病患者痰样本进行培养前间期和痰样本数量与培养阳性率的关系。方法在3个地市的20个区县6月内同时连续纳入涂阳肺结核病人,患者的痰样本运输到相应地市专科医院进行中和法分离培养,比较阳性率的差异。结果痰样本进行分离培养前的时间间隔与痰培养的阳性率呈负相关,从样本接收到分离培养间隔在7d内的痰样本培养阳性率高于大于7d的痰样本培养阳性率,差异具有统计学意义(P<0.05);样本运输时间间隔在3d内与大于3d的培养结果差异有统计学差异(P<0.05);结核病人留取痰样本的数量与培养的结果呈正相关,1份痰样本和2份痰样本以上的病人痰培养结果差异有统计学意义(P<0.001)。结论对可疑结核病患者进行痰分离培养时,需要留取2份以上痰样本,自留取痰液始,1周内完成分离培养操作具有可接受的培养阳性率。 李强 赵冰 夏辉 欧喜超 赵雁林关键词:结核病 培养阳性率 结核分枝杆菌对左氧氟沙星与莫西沙星的交叉耐药性及gyrA和gyrB基因突变分析 目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对左氧氟沙星(levofloxacin,LVF)与莫西沙星(moxifloxacin,MXF)的交叉耐药性,分析gyrA和gyrB基因突... 李国利 陈澎 孙昌文 张灵霞 李邦印 赵雁林关键词:结核分枝杆菌 耐药性 左氧氟沙星 莫西沙星 GYRA GYRB 文献传递