广西科技厅自然科学基金(0542083)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：冯乐平杨月莲张木勋夏宁梁瑜祯更多>>
- 相关机构：桂林医学院华中科技大学广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：广西科技厅自然科学基金国家自然科学基金教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高浓度葡萄糖对体外培养小鼠胰岛细胞NF-κB的表达及细胞凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨核因子κB(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导胰岛细胞凋亡中的作用。方法:对分离纯化的小鼠胰腺胰岛细胞进行体外培养,按DMEM培养液里葡萄糖浓度不同,分为6组:G1组(5.6mmol·L-1葡萄糖)、G2组(7.8mmol·L-1)、G3组(11.1mmol·L-1)、G4组(16.7mmol·L-1)、G5组(22.2mmol·L-1)及G6组(27.6mmol·L-1)。采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平;免疫组织化学染色法检测NF-κB活性;免疫荧光法检测细胞色素C释放和细胞核染色检测细胞凋亡。结果:当葡萄糖浓度5.6～11.1mmol·L-1时,随着葡萄糖浓度升高,胰岛细胞胰岛素分泌逐渐增加(P<0.05),NF-κB的活性逐渐增加(P<0.05),但此时细胞凋亡未见显著的变化(P>0.05),细胞色素C释放的组间比较差异无显著性(P>0.05)。当葡萄糖浓度≥16.7mmol·L-1时,与葡萄糖浓度≤11.1mmol·L-1各组比较,NF-κB表达明显增加,细胞色素C的释放也逐渐增强(P<0.05),胰岛细胞凋亡百分率同时也呈明显增加趋势(P<0.05)。结论:高浓度葡萄糖可以诱导胰岛细胞NF-κB表达增加,细胞色素C释放增强,同时诱导胰岛细胞凋亡,提示NF-κB的激活与胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系,抑制NF-κB活性可能对于保护胰岛细胞有重要作用。
- 梁瑜祯张木勋夏宁杨月莲冯乐平
- 关键词：细胞凋亡高浓度葡萄糖NF-ΚB细胞色素C类
- 高浓度葡萄糖对胰岛细胞的IRS2表达及细胞凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 目的探讨高浓度葡萄糖条件下胰岛细胞胰岛素受体底物2(IRS2)和Bax基因表达和激活情况以及对诱导胰岛细胞凋亡的影响。方法将小鼠胰腺进行分离纯化所得的胰岛细胞进行体外培养,按培养液里葡萄糖浓度不同分为G1组(5.6mmol/L)、G2组(7.8mmol/L)、G3组(11.1mmol/L)、G4组(16.7mmol/L)、G5组(22.2mmol/L)及G6组(27.6mmol/L)。细胞培养至72h后,采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平、免疫细胞组织化学法检测IRS2表达、免疫荧光法检测细胞Bax激活和细胞核Hoechst33342染色检测细胞凋亡情况。结果当葡萄糖浓度在5.6～11.1mmol/L时,胰岛素分泌水平升高,IRS2表达和Bax激活分别呈进行性增加,但此时细胞凋亡率无明显改变。随着葡萄糖浓度升高至超过16.7mmol/L时,IRS2表达逐渐减少,胰岛素分泌量明显降低,而Bax激活则逐渐增强,胰岛细胞凋亡率呈明显增加趋势。结论高浓度葡萄糖可以导致胰岛细胞IRS2表达下降,胰岛素分泌量下降;同时Bax激活增强,胰岛细胞凋亡率也明显增加。说明IRS2表达下降与凋亡相关蛋白Bax激活及其胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系,而且IRS2表达下降可能是胰岛素分泌减少的原因之一。增强胰岛素信号传导通路中IRS2蛋白的表达可能对于保护胰岛细胞有重要作用。
- 梁瑜祯冯乐平夏宁杨月莲张木勋
- 关键词：胰岛细胞凋亡高浓度葡萄糖BAX
- 一种高效经济的小鼠胰岛细胞分离纯化新技术被引量：1
- 2009年
- 目的:建立一种经济高效的小鼠胰岛细胞分离纯化方法,为进行NOD小鼠的胰岛移植提供实验条件。方法:将5-7周龄、体重20～25g的雄性昆明小鼠的胆总管结扎,并逆行Hank's液和胶原酶P灌注和分离消化,依次加入84%、67%、50%浓度的Histopaque介质后进行不连续密度梯度离心纯化胰岛细胞。双硫腙(dithizon,DTZ)和台盼兰染色分别鉴定胰岛细胞。用含5.6mmol/L葡萄糖DMEM培养液体外培养胰岛细胞,培养后的第3、5、7、9、11天取细胞上清检测胰岛素水平,并用16.7mmol/L的高浓度葡萄糖进行刺激,检测胰岛素水平确定胰岛细胞功能。结果:每个胰腺的胰岛细胞收获量在1200±124个,且纯度和活性均大于90%;体外培养9天内胰岛细胞基础胰岛素分泌水平无显著差异,至第11天时则明显减少(P<0.05);应用16.7mmol/L葡萄糖刺激后,第5、7、9、11天的胰岛素分泌水平较第3天的明显减少(P<0.05),然而在第7天、9天、11天时的胰岛素水平较第5天时显著降低。结论:胆总管逆行注射Hank's液和胶原酶P消化消化和不连续密度梯度Histopaque纯化的方法可以获得大量状态良好的胰岛,且胰岛细胞数量多,分泌状态良好。本分离方法是一种经济高效的胰岛细胞分离方法,同时离体后于5.6mmol/L葡萄糖DMEM培养第3天胰岛细胞胰岛素储备功能最佳,为移植研究的最佳状态。
- 梁瑜祯杨月莲罗静思刘丹冯乐平
- 关键词：胰岛素细胞培养
