国家自然科学基金(30973811)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 相关作者：谭宇蕙杜标炎张广献吴映雅肖建勇更多>>
- 相关机构：广州中医药大学暨南大学广东药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省中医药管理局基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 吴茱萸碱诱导肾癌786-0细胞G2/M期阻滞及其分子机制被引量：5
- 2015年
- 【目的】研究吴茱萸碱对肾癌细胞的生长抑制作用及其分子机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测吴茱萸碱对肾癌细胞786-0增殖的影响,流式细胞术分析吴茱萸碱对786-0细胞周期的影响,免疫印迹法检测细胞周期相关靶基因表达水平。【结果】吴茱萸碱能浓度依赖性显著抑制肾癌细胞增殖;细胞周期分析表明吴茱萸碱处理的786-0细胞被阻滞在G2/M期;免疫印迹结果证明吴茱萸碱处理后786-0细胞P53、P21及Cyclin B1蛋白表达均上调。【结论】吴茱萸碱作用786-0细胞导致细胞周期G2/M阻滞,其机制可能依赖于P53和P21蛋白信号通路。
- 何佩仪江燕妮谭宇蕙杜标炎邵红伟贺振泉张广献
- 关键词：细胞周期
- 靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响
- 2013年
- 目的探讨靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞增值和凋亡的影响。方法分别用0、10、20、40μmol/L靛玉红甲肟作用于HepG2细胞24、48、72h,采用MTT法检测细胞抑制率;用0、10、20、40μmol/L靛玉红甲肟作用于HepG2细胞24h后收集样品,采用流式细胞术法检测细胞周期及其凋亡率。结果 MTT法测定靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞的增殖具有抑制作用,且表现出剂量和时间的依赖性,随着浓度升高时间加长,抑制明显(P<0.01)。流式细胞术测定也表明靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞有诱导凋亡的作用,凋亡随着靛玉红甲肟浓度的增大不断地增加。细胞形态学方面也可观察出细胞随着靛玉红甲肟剂量和时间的增大而逐渐出现越来越多的凋亡,细胞核染色质深染,聚集于核膜下呈新月形,细胞膜突起呈小泡样,小泡脱落形成含核小体片段的凋亡小体。结论靛玉红甲肟确实可以诱导HepG2细胞凋亡,但靛玉红甲肟对肝癌细胞作用机制还不明确,需要作进一步的深入研究。
- 陈雅婷谭宇蕙吴映雅丘鹏翔杜标炎赵青
- 关键词：靛玉红甲肟HEPG2
- RO3306对人结肠癌细胞HT29增殖及凋亡的影响
- 2012年
- 目的观察RO3306对人结肠癌细胞HT29增殖及凋亡的影响。方法选用苔盼蓝染色细胞计数法、细胞集落形成法检测RO3306对人结肠癌细胞HT29细胞增殖影响;采用流式细胞术检测RO3306对HT29细胞周期及凋亡指数的影响。结果苔盼蓝染色和集落形成法结果均显示,RO3306作用HT29细胞后,细胞的生长抑制率随着药物浓度的增加、作用时间的延长而逐渐增高;流式细胞仪检测结果显示,RO3306在0.2mg/L,2mg/L浓度下作用48h对HT2凋亡指数呈现随浓度的提高而逐步上升的趋势,当药物浓度增加到20mg/L,HT29的凋亡指数显著上升,其细胞周期有明显阻滞,随着作用时间的推移出现了更明显的S期阻滞。结论 RO3306具有时间和浓度依赖性地抑制大肠癌HT29细胞的增殖,阻滞其细胞周期、诱导其凋亡。
- 李晶晶吴映雅谭宇蕙丘鹏翔陈雅婷肖建勇杜标炎
- 关键词：结肠癌凋亡细胞周期
- 吴茱萸碱联合RO3306对人肝癌细胞HepG2的协同抑制被引量：3
- 2011年
- 【目的】探讨吴茱萸碱(EVO)联合细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的特异抑制剂RO3306对人肝癌细胞HepG2的生长抑制、诱导凋亡是否具有协同增效作用。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测EVO诱导不可逆凋亡的时间转折点;采用MTT法、集落形成法、PI单染流式细胞术检测EVO和RO3306联合用药与单独用药比较是否具有协同增效作用(q>1.15为协同作用)。【结果】MTT法结果显示:作用16 h起,再撤药培养12 h与撤药前比较抑制率明显上升。流式细胞术检测表明:细胞同步化处理后吴茱萸碱作用12 h大部分细胞发生M期阻滞(M-arrest);作用20 h细胞发生M期滑移(M-slippage)。MTT法检测2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/L RO3306及两者联合作用的抑制率分别是33.64%、6.10%和52.74%,q值为1.32。集落形成法显示:1μmol/L吴茱萸碱、2μmol/LRO3306和两者联合作用的抑制率分别是48.21%、11.13%和78.13%,q值为1.83;2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/LRO3306和两者联合作用的抑制率分别是9.75%、66.8%和91.2%,q值为1.3。流式细胞术显示:2μmol/L吴茱萸碱、2μmol/L RO3306和两者联合作用的抑制率分别是23.7%、6.6%和44.8%,q值为1.31。【结论】吴茱萸碱诱导M-arrest发生于12 h左右,诱导不可逆凋亡的时间转折点为20 h左右,吴茱萸碱联合RO3306对HepG2具有明显的协同抑制作用。
- 何培泳谭宇蕙吴映雅张广献杜标炎王剑李药菊
- 关键词：细胞培养
- 丹参酮IIA对肾癌786-O细胞生长抑制作用及其分子机制被引量：8
- 2012年
- 目的研究丹参酮IIA对肾癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法 MTT法检测丹参酮IIA对肾癌细胞活力影响;流式细胞分析检测丹参酮IIA对肾癌细胞周期阻滞;免疫印迹检测细胞周期阻滞相关靶蛋白蛋白表达水平;激光共聚焦观察核仁蛋白Nucleophosmin(NPM)/B23定位的变化。结果丹参酮能够呈浓度依赖方式显著抑制肾癌细胞生长活力(P<0.05);细胞周期分析表明丹参酮IIA处理的肾癌细胞阻滞在S期;免疫印迹结果证明丹参酮IIA处理肾癌细胞,cyclin A,p53及其下游基因p21显著上调;激光共聚焦结果表明在丹参酮IIA作用下,NPM蛋白定位从核仁移位到核浆。结论丹参酮IIA作用786-O细胞导致细胞周期S阻滞,其机制可能与NPM移位促使其相互作用靶蛋白p53和p21蛋白水平上调有关。
- 肖建勇谭宇蕙张广献
- 关键词：肾癌P53细胞周期
- 丹参素钠对小鼠黑色素瘤细胞B16细胞间缝隙连接的影响被引量：1
- 2013年
- 【目的】研究丹参素钠(salvianic acid A sodium,SAAS)对小鼠黑色素瘤细胞株B16细胞间缝隙连接(GJIC)的影响及其机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SAAS对B16细胞生长的影响,荧光显微镜观察及流式细胞仪荧光示踪法结合分析缝隙连接(GJ)功能变化,并与阳性对照药全反式维甲酸(ATRA)比较,采用western blot法分析缝隙连接蛋白Cx32和Cx43的表达。【结果】以0～8μmol/L SAAS处理B16细胞48 h不影响其生存;用0、1、2、4、8μmol/L SAAS处理细胞48 h后,荧光显微镜下观察,SAAS能明显提高B16细胞Calcein传递,流式细胞术分析对照组和试验组的绿色荧光细胞(G4)与双阴性受体细胞(G3)比值(G4/G3)分别是0.10±0.01、0.16±0.02、0.20±0.01、0.21±0.02和0.25±0.02,各试验组G4/G3值显著高于对照组(P<0.01);western blot分析结果显示:用0、1、2、4、8μmol/L SAAS处理细胞48 h能显著提高Cx32、Cx43的表达。【结论】体外较低浓度SAAS能够促进B16细胞细胞间缝隙连接功能,但在一定药物浓度作用后,不能再提高其功能。SAAS促进GJ机制可能是通过上调Cx32、Cx43蛋白表达途径。
- 丘鹏翔张广献吴映雅肖建勇杜标炎卢文彪谭宇蕙
- 关键词：丹参素钠药理学B16细胞病理学蛋白表达
- 胸腺嘧啶核苷双阻断法诱导SGC-7901细胞周期同步化研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨胸腺嘧啶核苷(TdR)双阻断法对人胃癌细胞SGC-7901细胞周期的影响。方法:取对数生长期的SGC-7901细胞,加入2mmol/L、4mmol/L和8mmol/L TdR孵育15h,去除TdR孵育10h,再次加入不同浓度的TdR孵育15h后收集各组细胞,流式细胞术分析细胞周期各时相细胞百分比。经不同浓度TdR双阻断法诱导SGC-7901细胞后,再去除TdR孵育12h,收集各组细胞分析细胞周期各时相细胞百分比。结果:SGC-7901细胞经2mmol/L、4mmol/L和8mmol/L TdR双阻断法诱导,收获G0/G1期的细胞数分别为77.3%、77.5%和77.0%。再次去除TdR培养12h后,各期细胞百分比又可恢复正常范围。结论:2mmol/L TdR双阻断法诱导SGC-7901细胞即可在短时间内获得大量的G0/G1期细胞,是一种理想的获得大量处于"基态"的细胞的方法。
- 朱丽红毕伟陆大祥谭宇蕙李杰芬
- 关键词：SGC-7901细胞细胞周期
- 构建重组质粒pEGFP-N1-ND CyclinB1及在胃癌细胞SGC-7901中的表达
- 2010年
- 目的:构建真核表达载体pEGFP-N1-ND CyclinB1,并观察其在人胃癌细胞SGC-7901中的表达及对SGC-7901活性的影响。方法:通过RT-PCR法扩增不可降解CyclinB1(NDCyclinB1),将其插入到pEGFP-N1载体的XhoⅠ和BamHⅠ酶切位点,构建真核表达载体pEGFP-N1-ND CyclinB1,并以PCR、双酶切、测序鉴定。通过脂质体法转染胃癌细胞SGC-7901,进行荧光检测、Western blotting分析和流式细胞仪分析。结果:PCR、酶切及测序证明重组质粒pEGFP-N1-ND CyclinB1构建成功。转染胃癌细胞SGC-7901 24 h后,荧光显微镜下观察到绿色荧光。West-ern blotting检测到CyclinB1的表达明显增加。流式细胞仪检测重组质粒细胞组凋亡指数高于对照组,差异有显著性。结论:成功构建pEGFP-N1-ND CyclinB1荧光真核表达载体,并可在SGC-7901细胞中有效表达。
- 朱丽红毕伟陆大祥谭宇蕙杜标炎李杰芬
- 关键词：细胞周期蛋白绿色荧光蛋白细胞周期
