国家自然科学基金(30572365)
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
- 相关作者：李军罗平丁国富周红和生琦更多>>
- 相关机构：第三军医大学第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用被引量：5
- 2007年
- 目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,培养体系中预先加入不同浓度AS2h后,观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果:AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由100%降低至50%(P<0.05)。预先加入的AS能明显抑制热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论:AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。
- 张蓉李斌张乐之李军丁国富和生琦罗平周红
- 关键词：青蒿琥酯小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-6
- CpG ODN107增强人脑胶质瘤细胞放射敏感性的研究被引量：9
- 2007年
- 目的:探讨CpG ODN107增加人脑胶质瘤细胞CHG-5放射敏感性的作用及可能机制。方法:用不同浓度CpG ODN107处理CHG-5细胞,然后经β射线照射,MTT法检测细胞的增殖情况,体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力,ELISA法检测细胞TNF-α的分泌水平。结果:CpG ODN107抑制CHG-5细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN107(10μg/ml)联合β射线照射,抑制CHG-5细胞的增殖作用最强。CpG ODN107(10μg/ml)同样能抑制CHG-5细胞增殖和迁移,并且增加了TNF-α的分泌,在联合β射线照射后作用更加显著。结论:CpG ODN107对CHG-5有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN107增强肿瘤细胞TNF-α的分泌有关。
- 颜伟丁国富李斌董燕李军和生琦罗平周红庞学利
- 关键词：CPCCHG-5
- 人TLR9真核表达载体在HEK293T细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建人Toll样受体9(TLR9)全长序列与绿色荧光蛋白GFP的重组质粒,观察融合蛋白在HEK293T细胞内表达并检测其应答CpG DNA的能力。方法PCR法扩增TLR9全长,限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切绿色荧光真核表达质粒pcDNA3/GFP和TLR9全长,构建重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP,脂质体转染人胚肾293T细胞(HEK293T),荧光显微镜下观察绿色荧光融合蛋白在细胞内的表达与分布;将重组质粒与NF-κB荧光素酶报告质粒pGL2-luc共转染HEK293T细胞,CpG DNA(10mg/L)刺激后,化学发光法检测细胞内荧光素酶活性。结果成功构建pcDNA3-TLR9/GFP质粒,经酶切及测序分析证实载体构建正确;转染细胞后,在荧光显微镜下观察到TLR9/GFP融合蛋白大量表达;重组质粒与pGL2-luc共转染细胞,应用荧光报告系统检测显示,CpG DNA刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组(P<0.01)。结论重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP在HEK293T细胞中表达的TLR9/GFP绿色荧光融合蛋白,能够识别CpG DNA并诱导增加胞内NF-κB转录活性。
- 丁国富吴翀蒋为薇李军罗平周红
- 关键词：TOLL样受体9克隆真核表达核转录因子-ΚB荧光素酶
- CpG ODN107增强人脑胶质瘤细胞放射敏感性的研究被引量：8
- 2007年
- 目的探讨CpG ODN107增加人脑胶质瘤细胞(CHG-5)放射敏感性的作用及可能机制。方法用不同浓度CpG ODN107处理CHG-5细胞,然后经放射线照射,MTT法检测细胞的增殖情况,体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力,ELISA法检测细胞TNF-α的分泌水平。结果CpG ODN107抑制CHG-5细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN107(10μg/mL)联合放射线照射,抑制CHG-5细胞的增殖作用最强(0.52±0.76)。CpG ODN107(10μg/mL)同样能抑制CHG-5细胞增殖和迁移,并且增加了TNF-α的分泌,在联合照射后作用更加显著(193±0.58)pg/mL。结论CpG ODN107对CHG-5有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN107增强肿瘤细胞TNF-α的分泌有关。
- 颜伟丁国富李斌董燕李军和生琦罗平周红庞学利
- 关键词：CPG人脑胶质瘤细胞
- CpG ODN核心序列改变对其生物学活性的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:观察含CpG基序寡核苷酸(CpG ODN)核心序列改变后对其细胞内化和免疫活性的影响。方法:人工合成6-FAM标记的CpG ODN,将其核心序列CpG二核苷酸的胞嘧啶(C)甲基化(mCpG ODN)、胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)顺序颠倒(GpC ODN),在RAW264.7细胞培养体系中加入不同的ODN后,应用流式细胞术和激光共聚焦显微镜观察ODN的细胞内化与定位,ELISA法检测ODN对细胞释放TNF-α的影响。结果:CpG ODN核心序列的改变不影响其在细胞内的聚集,激光共聚焦术检测发现6-FAM ODN被内化进入RAW264.7细胞,绿色荧光小体呈散点状分布于细胞中;胞嘧啶甲基化后,mCpG ODN促细胞释放TNF-α的作用显著降低(P<0.01),仅保留部分刺激活性,但是GpC ODN几乎丧失了促细胞释放TNF-α的作用。结论:CG序列对CpG ODN的生物活性至关重要,胞嘧啶C甲基化不影响CpG ODN在细胞内的定位,但能部分抑制CpG ODN的免疫活性。
- 丁国富李斌吴翀罗平李军周红
- 关键词：CPG寡核苷酸甲基化
