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浙江省科技厅科技计划项目(2009F70011)
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4
被引量:8
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创伤弧菌感染树突状细胞的定位及对细胞骨架影响的实验研究
被引量:3
2011年
目的探讨创伤弧菌(Vibriovulnifieus,Vv)感染小鼠树突状细胞株的侵袭过程、定位及其对细胞器的损伤与影响。方法建立Vv1.1758株侵入DC2.4细胞模型,电子显微镜观察不同时间段细菌定位、细胞形态及细胞器的变化过程;荧光显微镜观察细胞骨架-微丝、微管重排情况。结果Vv1.1758株以双位点胞饮方式成内体侵入细胞,定位于DC2.4胞膜内侧1~2μm处,25%、50%、75%感染率时分别为1.27h、1.87h、3.43h,1h形成吞噬体,2h染色质明显活跃,4h染色质聚集,6h细胞损伤明显,内质网、线粒体、溶酶体高度肿胀变形。DC2.4突起状微丝逐渐减少,并向胞膜内侧由点状向线状聚集;伸展微管消失,微管向细胞核膜外侧重排明显。结论DC2.4在受%感染时,Vv定位于DC2.4胞膜内侧,微丝由胞质内向胞膜移动,而微管则由突触及胞膜处向核膜外侧移动,砌感染DC时可触发细胞骨架重排。
王志刚
邵平扬
徐水凌
蔡玉节
崔戈
鲍轶
关键词:
创伤弧菌
树突状细胞
细胞骨架
微丝
微管
创伤弧菌经细胞Toll样受体2、4途径导致树突状细胞急性坏死的研究
被引量:2
2013年
目的探索创伤弧菌(Vv)感染树突状细胞(DC),经Toll样受体(TLR)2、4途径致DC急性坏死的实验研究。方法建立Vv1.1758株与DC2.4混合培养感染模型,用光学显微镜观察细胞感染率,电子显微镜观察Vv定位与细胞结构变化,实时定量反转录PCR测定TLR2、4mRNA表达量,ELISA法检测TNF-α表达量,DNA梯度电泳定性检测细胞凋亡,流式细胞术定量检测细胞凋亡及坏死率。率的比较采用X^2检验,多组间数据比较采用方差分析。结果混合培养0.5、1、2、4、6h时的细胞感染率分别为(7.8±0.8)%、(13.9±1.1)%、(34.6±4.9)%、(77.8±10.2)%和(95.8±13.1)%,混合培养2h后的感染率与培养0.5h相比差异有统计学意义(均P〈0.05)。细菌定位于DC2.4细胞内侧,2h核染色质明显活跃,核内出现凋亡小体;4h胞质内出现空泡,染色质聚集,胞膜毁损严重;6h线粒体高度肿胀变形,细胞坏死。TLR2、4mRNA表达于0.5h已达峰值。TNF-α在1h时开始增高(P〈0.05),2h达峰值。DNA梯度电泳2h呈冲刷状坏死,4-5h出现720bp与900bp凋亡带。2、4、6h时细胞早期凋亡率分别为(3.1±3.8)%、(7.8±4.7)%和(12.7±8.2)%,显著高于对照组的(0.5±0.7)%(均P〈0.05)。细胞坏死率分别为(16.7±12.5)%、(41.6±25.9)%和(75.5±33.6)%,显著高于对照组的(2.3±0.8)%(均P〈0.05)。结论Vv感染DC可通过TLR2、4表达上调,TNF-α增加导致DNA降解,期间以细胞凋亡与坏死同时并存,但以坏死方式降解为主。
王志刚
吴展
徐水凌
崔戈
阮玲娟
关键词:
弧菌
树突细胞
TOLL样受体2
DNA降解
脂肪酸气相色谱技术鉴定创伤弧菌
被引量:3
2012年
目的建立细菌脂肪酸气相色谱分析技术对创伤弧菌(vibriovulnificus,Vv)鉴定的新方法。方法Vv经35cc、24h血平板培养,收集菌落,皂化、甲基化、萃取、洗涤步骤,采用气相色谱法测定Vv细菌脂肪酸的种类与含量结果,并与软件标准图谱进行比对与识别。结果20min内色谱给出Vv脂肪酸特征图,峰位与标准图谱的差异仅为0.21%,99.17%的峰能明确识别,Vv的脂肪酸种类与含量为C16:0(29.66%),C16:1ω7C/C16:1ω5C(28.32%),C16:1ω7C(13.42%),C140(5.41%),C14:03OH/C16:1SO1(4.31%)和C12:0 3OH(4.01%o结论细菌脂肪酸的种类与数量可作为细菌鉴定特征,气相色谱分析技术具有灵敏、精确、快速特点,与经典的细菌生化反应及DNA鉴定相比,具有生物安全、成本低廉等优点,为临床实验室细菌的鉴定开辟了新途径。
王志刚
邵平扬
徐幼平
关键词:
创伤弧菌
脂肪酸
气相色谱法
创伤弧菌诱导树突状细胞凋亡的过程观察
2012年
目的实验观察创伤弧茵(Vibrio vulnifwus,Vv)诱导鼠树突状细胞(dendriticcell,DC)凋亡的过程。方法建立小鼠树突状细胞(DC2.4株)与创伤弧菌(Vvl.1758株)混合培养模型,DAPI荧光染色分析细胞凋亡的形态特征,DNALadder检测凋亡细胞的DNA片段化水平分析,Annex—inVFITC/PI染色分析DC2.4细胞凋亡率,分光光度法测定caspase-3、caspase-8活性,JC-1荧光标记检测线粒体膜电位(A山m)变化。结果Vvl.1758株与DC2.4细胞混合培养4h时DAPI荧光染色出现典型的凋亡特征——染色质浓缩及边缘化;DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡条带;2、4、6h细胞凋亡率分别为(37.8±9.8)%、(54.3±12.7)%和(68.2±14.6)%;1、2、4h线粒体膜电位(△ψm)分别下降了7.1%、16.1%与46.7%;caspase-8活性在1.5h增高,2h达高峰(2.48±0.19)U/μg,而caspase-3活性于3h开始增高,4h达高峰(1.91±0.16)U/μg。结论创伤弧菌诱导树突状细胞可通过线粒体膜电位下降及激活caspase-8启动子两条途径,最终活化效应因子caspase-3,促使细胞凋亡发生。
王志刚
黄佳
徐水凌
蔡玉节
邵平扬
鲍轶
崔戈
关键词:
创伤弧菌
树突状细胞
凋亡
线粒体膜电位
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