国家自然科学基金(U1203381)
- 作品数：14 被引量：42H指数：4
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- 不同直径卵泡对绵羊卵母细胞体外发育能力的影响被引量：1
- 2014年
- 以屠宰场绵羊卵巢为材料,采用抽吸法收集小卵泡、中卵泡、大卵泡卵母细胞,研究不同卵泡直径对卵母细胞回收效果、比例分布以及对卵母细胞直径、谷胱甘肽(GSH)含量和体外发育能力的影响。结果表明,3种卵泡卵母细胞比例分布差异极显著(P<0.01);3种卵泡卵母细胞的回收率无显著差异(P>0.05),但中、大卵泡卵母细胞可用率极显著高于小卵泡卵母细胞(P<0.01);小卵泡卵母细胞的直径极显著小于中、大卵泡卵母细胞(P<0.01);中、大卵泡卵母细胞成熟培养24 h后GSH含量显著高于小卵泡卵母细胞(P<0.05);经孤雌激活体外培养后,中、大卵泡卵母细胞的成熟率分别极显著(P<0.01)、显著(P<0.05)高于小卵泡卵母细胞,中、大卵泡卵母细胞囊胚率极显著高于小卵泡卵母细胞(P<0.01);中卵泡卵母细胞囊胚细胞总数显著高于小卵泡卵母细胞(P<0.05),但与大卵泡卵母细胞差异不显著(P>0.05)。因此,直径≥2 mm的卵泡的卵母细胞适合体外培养和体外胚胎的生产。
- 张利汪立芹蒋香菊林嘉鹏吴阳升杨楠古丽米热刘莉黄俊成
- 关键词：绵羊卵母细胞孤雌激活
- 绵羊卵巢颗粒细胞miRNA的鉴定和功能研究
- 卵泡是哺乳动物卵母细胞发生发育过程中的核心功能单位。颗粒细胞是组成卵泡的重要细胞之一，在卵泡的形成和发育过程中，颗粒细胞与卵母细胞之间的相互作用，会影响卵泡的发育、成熟以及闭锁等生物学过程。利用外源激素处理4-10周龄绵...
- 林嘉鹏
- 关键词：绵羊MIRNA颗粒细胞卵泡发育分子调控
- 绵羊小卵泡与中卵泡转录组差异特征分析被引量：7
- 2016年
- 卵泡的选择和发育过程涉及到卵泡内多种基因表达的变化和调控。绵羊卵泡的选择和发育过程与卵泡直径变化密切相关。以绵羊健康小卵泡（1-2 mm）和中卵泡（3-4 mm）为材料,进行RNA测序,分析小卵泡发育至中卵泡过程转录组水平变化特征。在分子功能上显著变化的基因主要涉及酶活性的调节和离子结合;在细胞组分上显著变化的基因主要涉及细胞外基质和质膜蛋白;在生物学过程上显著变化的基因主要涉及细胞增殖的正调控、细胞通讯、免疫和刺激反应等过程。KEGG分析差异基因富集的通路主要是补体和凝血级联反应,吞噬小体,细胞因子-细胞因子受体相互作用,TGF-β信号通路和轴突导向等。从小卵泡到中卵泡表达上调的有脂代谢相关基因（APOA1、APOD、APOE）,胰岛素样生长因子路径基因（IGFBP1、IGFBP7）,肿瘤生长因子beta途径基因（INHBA）,核心蛋白多糖基因（DCN）,血管发生基因（MGP）,跨膜4超家族成员1基因（TM4SF1）,胞外基质重建基因（MMP1、MMP13）,五聚素3基因（PTX3）,金属蛋白酶组织抑制剂1基因（TIMP1）。从小卵泡到中卵泡表达下调的主要有转录因子C-FOS、EGR1、FOSB和线粒体编码的脱氢酶家族基因MT-ND1、MT-ND5、MT-ND6等。这些基因的表达变化表明绵羊卵泡的选择过程可能涉及到IGF和TGFb通路的抑制,脂代谢、血管生成的增强以及细胞增殖能力下降等生物过程。
- 吴阳升林嘉鹏汪立芹陈莹黄俊成
- 关键词：绵羊转录组
- 羔羊卵巢AMH的免疫组织化学分析被引量：4
- 2014年
- 为探讨AMH在羔羊和成年羊卵巢中时间和空间表达变化,揭示卵泡生长发育调控的机制。收集1月龄羔羊和正常成年羊卵巢,采用HE染色观察卵巢的组织学特征,免疫组化法检测绵羊卵巢AMH蛋白表达分布,RT-PCR技术分析卵巢卵丘细胞中AMH基因的表达变化。结果显示,卵巢HE染色后,对外源激素处理有反应的卵巢存在大量的大直径卵泡,且无中等卵泡和小卵泡,也没有黄体化和排卵;对外源激素没有反应的卵巢仅存在原始卵泡和少量的初级卵泡,无有腔卵泡。免疫组化结果显示,AMH存在于生长期的腔前卵泡和小的有腔卵泡,以及卵丘细胞,大多原始卵泡无AMH的表达,而在原始卵泡向初级卵泡转变,外层的颗粒细胞由扁平向柱状转变时AMH有表达,颗粒细胞存在表达AMH和不表达AMH 2种类型。RT-PCR结果显示,羔羊卵丘细胞的表达量高于成年羊。AMH可能参与卵泡发育的启动、向促性腺激素依赖期的转变等过程的调控,其功能作用还有待于深入研究。
- 蒋香菊吴阳升张利古丽米热.阿不都热依木林嘉鹏汪立芹杨楠唐淑红黄俊成
- 关键词：AMH羔羊卵巢颗粒细胞
- 谷胱甘肽(GSH)对绵羊细管冻精质量的影响被引量：8
- 2015年
- 研究了在绵羊冻精稀释液中添加不同浓度(0、1、2、2.5、3 mmol/L)的谷胱甘肽(GSH)对细管冻精质量及体外受精的影响。结果显示:在绵羊精子的冷冻稀释液中添加1 mmol/L GSH具有最好的效果,可以显著地增加冷冻解冻精子的活力以及精子质膜、顶体膜和DNA的完整性,还可以在一定程度上提高体外受精的卵裂率及囊胚率。
- 唐淑红林嘉鹏吴阳升汪立芹黄俊成
- 关键词：绵羊谷胱甘肽精液冷冻
- Mg2Al-Cl-LDH载体转染细胞的研究
- 2013年
- 为探讨Mg2Al-Cl-LDH颗粒作为基因转染载体的可能性以及最优的转染体系和转染时间,为后续的基因治疗、创面修复、转基因技术等试验打下基础,自制Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒,与增强型荧光蛋白质基因eGFP结合后,转染入细胞,观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白质,计算转染率。结果表明Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒直径在100 nm左右,结构为六边形。200μg/ml的纳米颗粒浓度下细胞活性为87%,达到500μg/ml时细胞活性快速降至44%;DNA与LDH的质量比为4/50时转染率达到11.17%,质量比为10/50时,转染效率为3.93%;DNA与LDH作用时间在15 min时转染率为6.93%,30 min时反而下降至4.8%;转染细胞培养24 h时转染率达到17.4%,72 h后下降至3.7%。纳米颗粒的分子较小,比较容易被细胞膜胞吞,并且Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒能有效地与eGFP质粒相结合;在DNA与LDH质量比4/50的情况下,结合能力最高;最佳结合时间为15 min;转染时间在48 h时效果最好。HEK 293T细胞对Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒的最优耐受浓度为200μg/ml;同样条件下C2C12细胞的转染效率比HEK 293T细胞的转染效率高。
- 刘莉林嘉鹏吴阳升汪立芹田永芝黄俊成
- 关键词：基因转染
- 绵羊卵丘细胞直径与卵母细胞质量的相关性被引量：1
- 2014年
- 利用RT-PCR方法,检测不同直径绵羊卵泡卵丘细胞中FSHR、EGFR、GHR、b FGF、CYP19A、AMH基因的mRNA表达规律及卵母细胞孤雌激活后胚胎发育的影响,结果表明,大、中、小卵泡卵丘细胞中都有FSHR、EGFR、GHR、b FGF、CYP19A、AMH的mRNA表达,不同直径卵泡卵丘细胞呈现递增趋势,大卵泡卵丘细胞与中小卵泡的卵丘细胞相对表达量差异显著（P〈0.05）;AMH在直径〉5.0 mm的卵泡卵丘细胞中有所下降。不同大小卵泡卵母细胞经体外培养,结果表明,各卵泡卵母细胞直径组间成熟率不显著,随卵泡直径的增大卵裂率增加,1.0-2.0 mm组与2.1-5.0 mm组卵裂率都显著低于〉5 mm组（P〈0.05）,相互间无差异（P〉0.05）;囊胚率也呈现逐渐增加的趋势,卵泡大于5.0 mm卵母细胞组极显著高于1.0-2.0 mm组（P〈0.01）,2.1-5.0 mm组（P〈0.05）。证实卵丘细胞在绵羊卵母细胞成熟和受精及随后的胚胎发育过程中起重要作用,卵泡直径对卵母细胞发育能力产生影响。
- 古丽米热.阿布都热依木吴阳升林嘉鹏汪立芹张利蒋香菊杨楠唐淑红黄俊成
- 关键词：绵羊卵丘细胞卵母细胞RT-PCR
- BCB染色液对绵羊不同直径卵泡卵母细胞的筛选作用被引量：1
- 2014年
- 为探讨亮甲酚蓝（BCB）染色液对绵羊不同直径卵泡卵母细胞的筛选作用，对筛选后的卯母细胞进行孤雌激活，统计不同组间成熟率、卵裂率及囊胚率的差异。将卵泡直径分为〈2mm、2～5mm、〉5mm共3组，经26μmol／L的BCB染色90min后，结果显示：（1）直径〉5mm卵泡中的卵母细胞阳性率极显著高于5mm以下卵泡组（P〈0．01）；（2）卵泡直径〉5mm中BCB＋组卵母细胞孤雌激活后的体外培养效率显著高于其余2组；（3）不同试验组卵母细胞孤雌激活后获得的囊胚总细胞数在BCB＋组卵母细胞中，直径2～5mm组与〉5mm组间没有显著差异（P〉0．05），但极显著高于直径〈2mm组（P〈0．01）；BcB-卵母细胞在各组间没有显著差异（P〉0．05）；未经染色的卵母细胞中，直径2～5mm组与〉5mm组间没有显著差异（P〉0．05），但显著高于直径〈2mm组（P〈0．05）；此外，〈2mm的卵母细胞，BCB＋组极显著高于对照组和BCB一组（P〈0．01），在直径2～5mm组和〉5mm组，BCB＋组、对照组和BCB-组均差异极显著（P〈0．01）。以上结果说明，直径〉2mm以上卵泡的卵母细胞用BCB染色液筛选后更适合体外培养。
- 张利汪立芹蒋香菊林嘉鹏吴阳升杨楠古丽米热黄俊成
- 关键词：BCB绵羊卵母细胞孤雌激活
- IGF-Ι对绵羊冷冻精液质量的影响被引量：1
- 2015年
- 【目的】探讨冻精稀释液中添加类胰岛素生长因子-I(IGF-Ι)对绵羊冷冻精液质量的影响,明确最佳的IGF-Ι添加浓度,为提高绵羊冻精受精率和加速其品种改良奠定基础。【方法】以特克赛尔年轻种公羊的精液为试验材料,在冻精稀释液中添加不同浓度(0、50、100、150和250 ng/m L)的IGF-Ι,通过SYBR-14/PI双染法、低渗肿胀试验和吖啶橙(AO)染色法检测解冻精液在孵育0、1和2 h后的顶体完整性、质膜完整性和DNA完整性,并通过体外培养验证其体外受精效果。【结果】Ⅱ组(IGF-Ι添加浓度100 ng/m L)的冷冻精液解冻孵育0、1和2 h后,其精子顶体完整性呈逐渐下降趋势,但整体效果优于其他试验组;在精子质膜完整性和DNA完整性方面,也表现为Ⅱ组高于其他试验组,且孵育时间越短(1 h内),效果差异越明显,均显著高于对照组(P<0.05)。体外受精试验结果显示,5个试验组间的卵裂率和囊胚发育率均不存在显著差异(P>0.05),但以Ⅱ组的体外受精效果略优于其他试验组。【结论】绵羊冻精稀释液中添加IGF-I可有效增强精子活力,改善冻精存活率,维持顶体、质膜和DNA完整性,但要求绵羊冷冻精液须在解冻后1 h内完成相关操作。
- 林嘉鹏唐淑红吴阳升汪立芹黄俊成
- 关键词：绵羊冷冻精液稀释液DNA完整性
- 无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用
- 2014年
- 目的:本文采用N2B27无血清无饲养层的完全已知成份的培养体系,通过机械分离法分离不同阶段的绵羊囊胚,观察不同阶段囊胚对分离绵羊类胚胎干细胞的影响。方法:本实验采用N2B27无血清无饲养层成份完全已知的培养体系,利用机械分离法对不同阶段的绵羊囊胚进行分离,观察其绵羊类胚胎干细胞的原代集落形成率,以及AKP染色,多潜能性候选基因Oct-4和Sox-2免疫荧光检测。结果:分离早期阶段绵羊囊胚获得的绵羊类胚胎干细胞的形成率显著低于扩张(孵化)阶段囊胚(19.6%(11/56)vs 36.9%(31/84))(P<0.05),同时早期和扩张(孵化)阶段绵羊囊胚的AKP染色和多潜能性候选基因Oct-4、Sox-2的表达呈阳性。结论:N2B27无血清无饲养层培养体系是一种有效分离绵羊类胚胎干细胞的培养基,同时分离绵羊扩张(孵化)阶段的囊胚可以显著的提高原代类胚胎干细胞的建系率,为提高绵羊类胚胎干细胞的建系奠定了基础。
- 陈博赵云程林嘉鹏孙晓岩陈雪梅黄俊成
- 关键词：胚胎干细胞囊胚绵羊胚胎
