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国家自然科学基金(39960065)

作品数:6 被引量:27H指数:3
相关作者:费小雯邓晓东黄俊生郑学勤胡新文更多>>
相关机构:中国热带农业科学院中山大学四川大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:生物学农业科学化学工程更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 4篇生物学
  • 3篇农业科学
  • 1篇化学工程

主题

  • 3篇杆菌
  • 2篇基因
  • 2篇基因表达
  • 2篇AFP
  • 2篇大肠杆菌
  • 2篇S-
  • 2篇PROMOT...
  • 2篇HEVEIN
  • 1篇点突变
  • 1篇定点突变
  • 1篇遗传密码
  • 1篇遗传密码子
  • 1篇杀菌剂
  • 1篇生物杀菌剂
  • 1篇启动子
  • 1篇启动子区域
  • 1篇转基因
  • 1篇橡胶树
  • 1篇密码子
  • 1篇抗真菌蛋白

机构

  • 4篇中国热带农业...
  • 3篇中山大学
  • 2篇四川大学
  • 1篇热带作物生物...

作者

  • 3篇邓晓东
  • 3篇费小雯
  • 2篇刘柱
  • 2篇杨志荣
  • 2篇朱建清
  • 2篇胡新文
  • 2篇郑学勤
  • 2篇黄俊生
  • 1篇胡新文

传媒

  • 1篇Acta B...
  • 1篇高技术通讯
  • 1篇作物学报
  • 1篇园艺学报
  • 1篇西南农业学报
  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2008
  • 1篇2003
  • 3篇2002
  • 1篇2001
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响
2003年
为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm。序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成。突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA)。重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株。IPTG诱导后,二者均得到了表达。软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3%,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8%;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量。
朱建清刘柱胡新文杨志荣
关键词:定点突变遗传密码子
萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达被引量:3
2002年
根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs AFP2 基因序列 ,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 ,人工合成引物 ,利用PCR重叠延伸法 ,使编码序列区的部分核苷酸突变 ,采用嵌套PCR ,迅速克隆到目的基因片段Rs AFPm ,连接到 pGEM Teasy载体上 ,转化大肠杆菌XL1菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 2 40bp ,有一个阅读框 ,编码 2 9个氨基酸的信号肽和 5 1个氨基酸的抗真菌蛋白 ,与突变前的Rs AFP2 基因相比 ,在编码区第 3号氨基酸Lys相差一个碱基 (TTG→TTA) ,第 5号氨基酸Gln相差一个碱基 (CAG→CAA) ,第 6号稀有密码Arg相差两个碱基 (CAG→CGA) ,但二者编码产生相同。重新合成引物 ,将切除信号肽的Rs AFP2 基因和Rs AFPm基因分别克隆到pET 2 1b(+ )质粒载体上 ,导入大肠杆菌BL2 1菌株。Tricine SDS PAGE电泳显示工程菌中存在 6KD左右的目的蛋白带 ;软件分析显示 ,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前 pETAFPo表达产物的2倍 ;抑菌结果表明 ,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于 pETAFP2 表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs AFPm基因与Rs AFP2 基因相比 ,已有效的提高表达量。
刘柱胡新文朱建清杨志荣
关键词:大肠杆菌基因表达
萝卜抗真菌蛋白基因Rs-AFPs在大肠杆菌中的表达及其转化番茄的研究被引量:15
2001年
通过基因工程手段将萝卜抗真菌蛋白基因Rs AFP1( 2 ) 插入大肠杆菌表达载体pTrxFus中并诱导表达 ,其融合表达产物约 2 2kD ,约占总可溶蛋白的 0 .4 5 % (0 .5 % )。抑菌活性试验表明 :重组Rs AFP1( 2 ) 有抑菌活性 ,其中Rs AFP2 较Rs AFP1抑菌活性强。构建了Rs AFP2 基因的植物表达载体pBIAFP2 。利用农杆菌介导法将pBIAFP2 导入番茄中 ,并诱导出完整的植株 32株。对其中 2 8株进行PCR和PCR SouthernBlot检测 ,其中 17株呈阳性。对经PCR SouthernBlot检测呈阳性的植株进行SouthernBlot检测 ,6株呈阳性。
邓晓东费小雯胡新文
关键词:大肠杆菌转基因番茄基因表达生物杀菌剂
In vitro Transient Expression System of Latex C-serum was used for Analysis of Hevein Promoter in Response to Abscisic Acid in Hevea brasiliensis被引量:1
2008年
Hevein has been found to be an essential element in coagulation of rubber particles in latex of rubber trees. In a previous study, we cloned a 1 241-bp fragment of a 5' upstream region of the hevein gene by genome walking. This fragment was analyzed by a 5' end nested deletion method in the present study, fused with a uidA (gus) gene to produce a series of tested constructs, which were transferred into C-serum of latex and the Gus activities were detected. Results showed that the fragment from -749 to -292 was sufficient for expression of gus gene in latex, and the fragment from -292 to -168 was crucial in response to abscisic acid inducement. In a transient transgenic test of rubber leaf with particle bombardment, construct Hev749 conferred gus-specific expression in veins, in which the latex tubes mainly distributed. This implies that the fragment from -749 to -292 was laticiferous-specific.
Xiao-Wen FeiXiao-Dong Deng
Isolation and Analysis of Rubber Hevein Gene and Its Promoter Sequence被引量:4
2002年
Hevein, a lectin_like protein, is a major factor of lutoids in the latex of rubber trees ( Hevea brasiliensis Muell._Arg.). This factor is involved in coagulation of the latex and has the ability to bind chitin. The hevein gene with a length of 680 bp was cloned by the method of RT_PCR. Its promoter region with 1 306 bp of this gene was also isolated by genome walking, and its sequence included the typical TATA and CAAT boxes as well as the homologous sequence of abscisic acid (ABA) response elements. Expression of the hevein gene in the latex and leaves was detected by Northern blot. After treatment of the trees with ethylene and ABA, the results showed that the hevein gene was expressed principally in latex, and the expression could be induced by ethylene and ABA.
邓晓东费小雯黄俊生郑学勤
关键词:HEVEINPROMOTER
橡胶树延伸因子cDNA及其5′端启动子区域序列的分离与分析被引量:7
2002年
橡胶延伸因子 REF(Rubber Elongation Factor)是橡胶生物合成中最重要的酶之一 ,是胶乳中主要的蛋白质。作者利用已发表的 REF c DNA序列设计并合成引物。通过提取胶乳总 RNA用 RT法合成 c DNA后 ,通过 PCR技术扩增并克隆了 REF c DNA序列。序列测定结果表明 ,所克隆的 REF c DNA编码区序列全长 4 14个碱基 ,编码 138个氨基酸 ,3′端非编码区长 112 bp。与 Goyvaerts E等人发表的序列比较 :REF c DNA编码区序列同源率为 10 0 % ,3′端非编码区有 2 bp的差异 ,同源率为 98%。在此基础上 ,通过步移法分离 5′端启动子区域 2 6 0 bp的序列 ,其中 ,含典型的TATA盒和 CAAT盒。为证实该基因为乳管特异表达 ,我们通过 Northern blot对橡胶延伸因子基因在胶乳和叶片中的表达做分析。初步结果表明 ,橡胶延伸因子基因主要在胶乳中表达。
邓晓东费小雯黄俊生郑学勤
关键词:橡胶树CDNA
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