国家自然科学基金(50178021)
- 作品数：10 被引量：103H指数：6
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- 相关机构：哈尔滨工业大学哈尔滨理工大学东北林业大学更多>>
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- 相关领域：生物学环境科学与工程农业科学更多>>
- T-DNA在丝状真菌中的插入突变及其应用前景被引量：2
- 2005年
- 利用根癌农杆菌介导的转化系统已经在酵母菌和多个属种的丝状真菌成功建立起相应的T-DNA 插入突变体系,使之有可能成为真菌生理学、生物化学以及发育生物学相关理论研究的潜在工具.综述了丝状真菌质粒DNA转化和T-DNA转化的差别、T-DNA插入突变的主要特点和优点、T-DNA转化丝状真菌的方法以及T-DNA已转化的丝状真菌种类,并对T-DNA插入突变在丝状真菌中的应用前景进行了分析.
- 高兴喜杨谦宋关玲金红星
- 关键词：插入突变丝状真菌
- 黄绿木霉纤维素酶提纯及其性质研究被引量：4
- 2006年
- 通过(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100分子筛层析和DEAE Sephadex A-50离子交换层析等步骤,分离纯化出木霉T2纤维素酶系中达到电泳纯的3种内切葡聚糖酶(EGⅠ、EGⅡ、EGⅢ)和2种β-葡萄糖苷酶(BGⅠ、BGⅡ).通过SDS-PAGE和IEF电泳测得5个酶组分的相对分子质量分别为62.3 ku、71.9 ku、52.6 ku、85.3 ku和78.3 ku,等电点分别为5.4、4.8、5.0、5.6和5.8.此酶系均为糖蛋白,含糖量分别为17.7%、11.7%、15.6%、17.8%、19.3%.5个酶组分均属酸性纤维素酶,最适pH都是5.0;3种内切葡聚糖酶的最适温度皆为60℃,2种β-葡萄糖苷酶的最适温度都是55℃.Mn2+、Fe2+、Zn2+对5种纤维素酶都有一定的激活作用,尤其是Mn2+对内切葡聚糖酶的激活作用极为显著;Mg2+、Cu2+、脲对5种纤维素酶都具有不同程度的抑制作用.酶学动力学分析表明5种纤维素酶组分的Km值分别为0.093、0.083 8、0.079 0、0.085 1和0.077 8 mg/mL,Kcat值为101.7、119.6、11.4、111.4和162.1 s-1.内切葡聚糖酶对底物CMC-Na亲和力的大小与酶的催化效率之间并无相关性,BG对底物水杨苷亲和力的大小与酶的催化效率之间有一定的相关性.β-葡萄糖苷酶有较高的底物专一性,只对水杨苷有活力;内切葡聚糖酶在对羧甲基纤维素钠有活力的同时,对滤纸和秸秆粉也有微弱的活力.
- 宋金柱杨谦陈中祥张晶
- 关键词：纤维素酶提纯
- 绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ基因的克隆与表达被引量：19
- 2004年
- 采用RTPCR方法克隆到绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)的cDNA序列,测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,转化子用2%的βD半乳糖进行诱导,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测.结果表明,EGⅠ的cDNA基因开放阅读框长度为1377bp,编码459个氨基酸,推测蛋白质分子量为48.1kD.刚果红染色显示,转化子可产生明显的水解圈;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅠ并分泌到胞外.发酵液中的酶活在培养60h达到最高0.06UmL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为5.4.
- 刘北东杨谦周麒宋金柱陈佃福刘恒赵敏
- 两株产纤维素酶细菌的分离和筛选被引量：5
- 2007年
- 从林区土壤中分离能够分解纤维素的细菌菌株共15株,采用刚果红染色的初筛平板获取透明圈较明显的菌株8株。在此基础上,进行液体培养并测定酶活,得到2株酶活较高的菌株,分别编号为X18和X10-1-2。这两株菌均为G(+)、形态杆状、可产芽孢、好氧,初步鉴定为芽孢杆菌属的两个不同种。
- 燕红杨谦王希国
- 关键词：纤维素酶细菌
- 蜡样芽孢杆菌对稻草的降解作用被引量：10
- 2008年
- 为了研究一株蜡样芽孢杆菌(Bacillussp.X10-1-2)对稻草的降解作用,测定了发酵过程中发酵液的纤维素酶和半纤维素酶活、可溶性总糖和还原糖浓度以及底物残渣重、残渣结晶度、傅立叶红外光谱和表面结构的变化.发现在发酵过程中蜡样芽孢杆菌菌体产酶的过程也就是木质纤维素的降解糖化过程.上清液中的纤维素酶活和半纤维素酶活分别在发酵进行到第8 h和20 h时达到最高峰.总糖含量于4 h达到最高值,然后下降到一定程度后保持恒定.还原糖含量随发酵进行不断下降,达到一定值后保持恒定.该菌株对稻草长达5 d的降解过程中结晶度变化十分显著,第3 d时达到最高峰,而后又迅速下降.此菌株对稻草中各组分都有一定降解,其中纤维素、半纤维素和木质素的降解率分别为3.35%、0.91%和2.81%.该菌株主要降解稻草的薄壁细胞,使薄壁细胞发生严重皱缩.这预示,该菌株在造纸工业具有良好的应用前景.
- 燕红杨谦
- 关键词：蜡样芽孢杆菌稻草纤维素酶降解
- 绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅲ基因的克隆与表达被引量：25
- 2004年
- 为研究构建可降解纤维类固体废弃物的工程菌 ,采用RT PCR方法克隆到绿色木霉 (Trichodermaviride)AS3 371 1的葡聚糖内切酶Ⅲ (EGⅢ )的cDNA基因 ,测序后构建到酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)诱导型表达载体pYES2上 ,用正交实验对超声波辅助酵母转化系统进行了优化 .转化获得的EGⅢ转化子用 2 %的 β D 半乳糖诱导 ,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测 .结果表明 ,EGⅢ的cDNA基因开放阅读框长度为 1 2 5 4bp ,编码 4 1 8个氨基酸 ,推测蛋白质分子量为 4 4 1× 1 0 3 .正交实验中较优组合为第 5组 (超声波处理 6 0s,温育 4 0min ,单链DNA 1 5 0 μg ,热激 5min) ;刚果红染色显示 ,转化子可产生明显的水解圈 ;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅢ并分泌到胞外 ,发酵液中的酶活在培养 6 0h达到最高 0 0 4 1U/mL ;最适酶解温度为 5 0℃ ;最适 pH值为 5 8.
- 刘北东杨谦周麒宋金柱陈佃福刘恒
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母
- 影响根癌农杆菌介导的木霉菌遗传转化因素分析被引量：24
- 2005年
- 采用根癌农杆菌介导的转化方法,以木霉菌分生孢子为受体材料,对影响转化效率的主要因素进行了分析。结果表明,农杆菌菌株类型、初始菌液量、分生孢子浓度、共培养时间以及乙酰丁香酮的诱导等因素对转化效率都具有重要的影响。通过对这些因素的分析,基本得出了根癌农杆菌转化系统对木霉菌遗传转化的特点和规律,为将该转化系统用于其它丝状真菌的遗传转化提供了重要参考。
- 高兴喜杨谦郭兆奎宋金柱
- 关键词：根癌农杆菌木霉菌
- Cloning a Small Endoglucanase （EGⅤ） Gene from Trichoderma viride
- ＜正＞The genomic and cDNA clones encoding the endo-β-1,4-glucanase （EG V）Gene were isolated from Trichodrema vir...
- LIU Bei-Dong YANG Qian~(**)ZHOU Qi Department of Life Science and Engineering
- 关键词：CELLULASE
- 文献传递
- 球毛壳菌原生质体形成与再生研究被引量：3
- 2002年
- 采用酶解法制备球毛壳原生质体 .确定酶解条件为 :菌龄 2 .5d ,渗稳剂为S/C .采用 5、15、15mg/mL的Novozym 2 34、蜗牛酶 ,溶壁酶混合酶液 ,30℃下酶解 1.5h .再生率可达 2 9.11% .研究了渗稳剂对原生质体制备与再生的影响 ,并对球毛壳原生质体的释放和再生过程进行了观察 .结果表明 :山梨醇可促进原生质体的释放和再生 ;Ca2 + 对原生质体的再生有促进作用 ;葡萄糖对再生菌株生长的促进作用优于山梨醇 .
- 李梅辛平杨谦
- 关键词：球毛壳菌原生质体植物病原菌
- 一株地衣芽孢杆菌对稻草降解作用的研究被引量：19
- 2007年
- 通过测定发酵过程中发酵液的纤维素酶活、半纤维素酶活、可溶性总糖和还原糖浓度以及底物残渣重、残渣结晶度、傅立叶红外光谱和表面结构的变化来研究地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)对稻草的降解作用.研究发现,在发酵过程中地衣芽孢杆菌菌体产酶过程也就是木质纤维素的降解糖化过程.上清液中的纤维素酶活和半纤维素酶活分别在发酵进行到第12 h和48 h时达到最高峰.总糖含量于第4 h达到最高值,然后下降到一定程度后保持恒定.还原糖含量随发酵进行不断下降,达到一定值后保持恒定.该菌株对稻草长达5 d的降解过程中结晶度未发生明显变化.底物残渣傅立叶红外光谱分析表明,此菌株对稻草中各组分都有一定降解.稻草中纤维素、半纤维素和木质素的降解率分别为14.91%、6.61%和1.42%.利用扫描电镜对底物残渣表面结构进行观察,可看到该菌株主要降解稻草的薄壁细胞,使其发生严重皱缩.
- 燕红杨谦潘忠诚
- 关键词：地衣芽孢杆菌稻草纤维素酶降解
