吉林省科技发展计划基金(20080931)
- 作品数：7 被引量：33H指数：4
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- 检测外周血MUC1蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用被引量：8
- 2010年
- 目的为提高外周血MUC1蛋白检测的敏感度,建立了抗MUC1多克隆抗体的夹心ELISA试剂盒,并对其进行了初步测试。方法首先成功构建-表达并纯化了MUC1-GST和MUC1-MBP融和蛋白;通过免疫家兔和大鼠,获得抗MUC1血清,经饱和硫酸铵沉淀、Protein A/G纯化及抗GST和MBP抗体吸收的进一步纯化获得纯的家兔抗人及大鼠抗人MUC1多克隆抗体;通过凝血酶溶解MUC1-GST获得MUC1标准品。经不同的筛选确立了以家兔抗人MUC1抗体作为包被抗体、大鼠抗MUC1抗体作为检测抗体的双抗体夹心试剂盒,敏感度可达到0.2 ng/ml。结果对32例乳腺癌患者和20例健康受试者外周血血清中MUC1蛋白水平的检测结果显示,乳腺癌患者的阳性检出率达到53.1%(17例/32例),而健康对照组检出率为0。结论本研究建立的抗MUC1多克隆抗体双夹心试剂盒有望应用于临床诊断。
- 马吉春柳忠辉方芳窦蕊赵小霞张庆勇陈文博台桂香
- 关键词：MUC1双抗体夹心ELISA腺癌诊断
- 黏蛋白1多肽对T淋巴瘤Jurkat细胞生长的抑制及其机制被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨黏蛋白1(mucin 1,MUC1)多肽对人T淋巴瘤Jurkat细胞生长的抑制作用及其机制。方法:将MUC1多肽与Jurkat细胞共同培养,锥虫蓝染色法观察MUC1多肽对该细胞生长的影响;流式细胞术检测Jurkat细胞生长周期及其细胞表面MUC1的表达;Annexin V/PI双标记法检测Jurkat细胞的凋亡;应用抗体封闭实验检测MUC1多肽在Jurkat细胞表面作用的位点。结果:10、20、40μg/ml MUC1多肽作用使Jurkat细胞生长抑制分别达(32±4)%、(37±2)%、(46±5)%,未见凋亡细胞。流式细胞术检测结果表明MUC1多肽可诱导Jurkat细胞周期阻滞在G0/G1期,在Jurkat细胞表面有MUC1蛋白的表达。采用5μg/ml和25μg/ml抗MUC1抗体封闭Jurkat细胞表面MUC1表位后,MUC1多肽对细胞生长的抑制效应几乎全部消失。结论:MUC1多肽能明显抑制Jurkat细胞生长,其机制与该多肽通过和Jurkat细胞表面MUC1蛋白相互作用导致细胞周期阻滞在G0/G1期有关。
- 马吉春赵小霞高航方芳周静宋献美柳忠辉台桂香
- 关键词：JURKAT细胞细胞周期
- 重组鼠Muc1-MBP融合蛋白疫苗体内抗肿瘤作用
- 2009年
- 目的:研究重组鼠Muc1-MBP蛋白的体内抗肿瘤作用.方法:采用皮下注射法将不同剂量Muc1-MBP蛋白免疫小鼠,2wk/次,共免疫3次.在第3次免疫后4d,给予C57BL/6小鼠尾静脉注射LLC1细胞,或给予5GyX射线照射的ICR小鼠背部皮下注射MCF-7细胞.注射3wk后剥离并测量肿瘤大小;肿瘤组织行常规HE染色.免疫组织化学染色分析肿瘤周围浸润的淋巴细胞亚群.结果:LLC1细胞尾静脉接种后21d,肺肿瘤结节对照组,Muc1-MBP0.15g/L组小鼠分别为54和39个(100%),Muc1-MBP0.3g/L组小鼠共计17个(60%),提示Muc1-MBP0.3g/L组可显著抑制肺癌的生长(P<0.05),Muc1-MBP0.15g/L组作用较弱.皮下接种MCF-7细胞后21d,对照组,Muc1-MBP0.15g/L组小鼠100%(6/6)可见乳腺癌瘤体形成,平均体积分别为(142.8±70.2)和(96.1±53.4)mm3,Muc1-MBP0.3g/L组瘤体形成66.7%(4/6),平均体积为(54.5±46.7)mm3.表明Muc1-MBP0.3g/L组免疫后可显著抑制人乳腺癌移植瘤生长(P<0.05),Muc1-MBP0.15g/L组作用较弱.免疫组化结果显示Muc1-MBP免疫组肿瘤周围有大量CD4+和CD8+T的细胞浸润到肿瘤周围.结论:Muc1-MBP诱导免疫能够明显抑制LLC1,MCF-7细胞的生长,为临床应用研究奠定了基础.
- 方芳宋献美马吉春张庆勇窦蕊陈文博柳忠辉台桂香
- 关键词：MUC1肿瘤疫苗
- 大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)诱导小鼠Th1细胞的活化作用被引量：9
- 2009年
- 目的:探讨MBP对小鼠T细胞的调节作用。方法:采用淋巴细胞分层液分离小鼠脾脏淋巴细胞,在体外用MBP刺激淋巴细胞,通过MTT法测定淋巴细胞增殖反应;ELISA检测脾细胞培养上清中细胞因子的分泌水平;MBP免疫小鼠后,ELSPOT检测MBP刺激脾淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞频数;免疫组化检测MBP与T细胞的结合作用。结果:MBP以剂量依赖关系促进小鼠淋巴细胞的增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,轻微抑制IL-4的分泌;ELSPOT检测细胞分泌IFN-γ结果显示,MBP可诱导特异性Th1活化,也可刺激非特异性Th1活化;免疫组化结果显示,抗MBP抗体可与经MBP刺激的淋巴细胞发生反应,阳性细胞占总淋巴细胞的37.7%,当MBP采用1∶2 000抗MBP抗体中和后,再与淋巴细胞反应,结果未见阳性细胞。结论:MBP可作用于淋巴细胞诱导非特异性Th1活化,也可通过免疫诱导大量特异性Th1活化;MBP可作为新的免疫增强剂开发利用。
- 赵小霞马吉春方芳周静宋献美柳忠辉台桂香
- 关键词：麦芽糖结合蛋白TH1细胞细胞免疫应答
- 利用小鼠皮下人乳腺癌移植瘤模型观察MUC1-MBP抗乳腺癌作用被引量：4
- 2010年
- 目的建立小鼠皮下人乳腺癌移植瘤模型,探讨MUC1-MBP蛋白疫苗的抗人乳腺癌作用。方法首先通过筛选最佳条件建立小鼠皮下人乳腺癌移植瘤动物模型,HE染色和免疫组化鉴定。利用已经建立的乳腺癌动物模型,通过肿瘤预防实验和治疗实验,观察MUC1-MBP抗人乳腺癌作用。结果通过5 Gy X射线照射,皮下注射MCF-7人乳腺癌细胞3×10~6个/只,FTY720灌胃4～6 d,成功建立小鼠皮下人乳腺癌移植瘤动物模型。在预防乳腺癌生长实验中,PBS对照组、MBP组和MUC1-MBP组小鼠成瘤率分别为100%、83%和67%,肿瘤平均体积分别为(91.9±56.3)mm^3、(22.3±21.5)mm^3和(17.2±18.0)mm^3。与对照组相比,MUC1-MBP组显著减小(P<0.001),MBP组明显减小(P<0.05),提示MUC1-MBP能明显预防乳腺癌生长,MBP对乳腺癌生长也有一定的预防作用。在治疗乳腺癌生长实验中,PBS对照组、MBP组和MUC1-MBP组小鼠肿瘤生长抑制率分别为0、17%和17%,肿瘤平均体积分别为:(101.7±73.6)mm^3、(56.9±56.7)mm^3和(32.6±32.3)mm^3,与对照组相比,MUC1-MBP组明显减小(P<0.05),差异显著,提示MUC1-MBP对乳腺癌具有治疗作用。MBP组无显著差异(P>0.05),无统计学意义,提示MUC1-MBP对乳腺癌具有治疗作用。肿瘤组织HE染色结果发现,MUC1-MBP和MBP免疫组小鼠肿瘤组织周围及癌细胞间淋巴细胞浸润较PBS组明显增多。结论成功建立ICR小鼠皮下人乳腺癌移植瘤模型,该模型为肿瘤疫苗活性研究提供良好的研究工具。利用该模型发现MUC1-MBP免疫明显抑制小鼠皮下人乳腺癌的生长,MBP免疫也具有一定的抗乳腺癌生长作用,其能明显增强MUC1的免疫原性。
- 宋献美方芳马吉春赵小霞周静台桂香
- 关键词：人乳腺癌肿瘤疫苗
- 肿瘤免疫治疗的研究进展和发展趋势被引量：10
- 2009年
- 随着免疫学技术的进步,大量肿瘤抗原不断被发现。DC摄取肿瘤抗原诱导免疫激活还是抑制,取决于肿瘤细胞释放危险信号(GM-CSF、单核趋化蛋白1、MCP1及热休克蛋白等)还是抑制性信号(TGF-β、IDO和iNOS等)。在危险信号的调节下,激活Th1细胞免疫应答清除肿瘤;而在抑制性信号的作用下,激活Th2应答,不能有效清除肿瘤。肿瘤免疫治疗方面的进展主要表现在抗体疗法、T细胞疗法及肿瘤疫苗。目前至少有7种抗体与化疗药物合用的临床效果已经被证实;尽管抗不同种癌症的抗体种类在逐渐增加,但还需进一步探讨用于抗体治疗的新靶点、开发新抗体及扩大抗体应用的抗肿瘤范围。而T细胞疗法治疗效果不十分理想。大多数肿瘤疫苗处于Ⅰ期和Ⅱ临床试验,但为数不多的Ⅲ期临床试验结果不理想,尚需进一步完善。抗体在免疫监视中的重要作用被逐渐认识,肿瘤免疫预防最终可能成为现实。
- 台桂香
- 关键词：肿瘤抗原抗体肿瘤疫苗免疫治疗免疫预防
- 黏蛋白1多肽通过small MUC1蛋白抑制肿瘤细胞生长
- 2009年
- 目的:探讨黏蛋白1(mucin1,MUC1)串联重复序列多肽(简称黏蛋白1多肽,MUC1多肽)对肿瘤细胞生长抑制的作用机制。方法:MUC1多肽与多种肿瘤细胞Jurkat、Raji、U937、MCF-7、SMMC7721及活化的T细胞、小鼠巨噬细胞RAW264.7共同培养,观察MUC1多肽对上述细胞生长的影响;建立BABL/c小鼠Jurkat细胞皮下移植瘤动物模型,应用MUC1多肽进行治疗;采用GST免疫沉降实验鉴定与MUC1多肽结合的肿瘤细胞表面蛋白。结果:MUC1多肽对Jurkat、Raji、U937、MCF-7和SMMC7721细胞的生长均有抑制作用,对活化的T细胞和小鼠RAW264.7细胞生长无明显抑制作用。MUC1多肽对BABL/c小鼠皮下Jurkat细胞移植瘤的生长均有明显抑制作用(P<0.05)。GST免疫沉降实验显示,Jurkat和MCF-7细胞裂解上清中与MUC1多肽结合的蛋白可与两种抗MUC1串联重复序列抗体(GP1.4和HMPV)及抗胞内段抗体(Ab5)发生反应,相对分子质量大约115000,提示可能是MUC1新的同种型,命名为smallMUC1(sMUC1)。结论:MUC1多肽可通过与肿瘤细胞表面smallMUC1蛋白的相互作用向细胞传导生长抑制信号。
- 马吉春台桂香赵小霞方芳张庆勇窦蕊陈文博柳忠辉
- 关键词：SMALLMUC1肿瘤细胞
