国家自然科学基金(39970636)
- 作品数：17 被引量：45H指数：4
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- X线修复交叉互补基因1对氢醌致人支气管上皮细胞DNA损伤的保护作用(英文)
- 2009年
- 目的探索氢醌对人支气管上皮细胞遗传毒性的分子机制,并研究X线修复交叉互补基因1(XRCC1)对氢醌致人支气管上皮细胞DNA损伤是否有保护作用。方法通过RNA干扰敲除XRCC1基因,通过转染重组质粒pEGFP-C1-pU6-dsRNA建立XRCC1缺陷细胞;正常人支气管上皮细胞和转染空载体pEGFP-C1的细胞分别作为正常对照组和载体对照组;3种细胞用不同浓度(10 ～100 μmol.L-1)的氢醌作用4 h,分别进行MTT实验和彗星实验来检测氢醌的毒性。结果 MTT结果显示,不同浓度(10 ～100μmol.L-1)氢醌作用的XRCC1缺陷细胞,490 nm波长处吸光度值低于对照组细胞,提示缺陷细胞的细胞存活率比正常细胞低;彗星实验结果显示,不同浓度的氢醌对XRCC1缺陷细胞DNA损伤比对照组细胞更严重,而2个对照组细胞之间没有明显差异。结论 XRCC1基因在氢醌导致的细胞损伤的修复方面起着重要的作用。
- 方道奎何云张建清胡大林沙焱庄志雄
- 关键词：X线修复交叉互补基因1
- RNA干扰与基因沉默的分子机制研究进展被引量：6
- 2005年
- 胡大林庄志雄何云
- 关键词：RNA干扰基因沉默
- 人DNA聚合酶β基因靶向RNA干扰重组子克隆及序列分析被引量：2
- 2006年
- 目的克隆用于人DNA聚合酶β(DNApolymerasebeta,Polβ)基因靶向RNA干扰的双链RNA(doublestrandRNA,dsRNA)寡核苷酸绿色荧光蛋白C1载体重组子“pEGFPC1pU6dsRNA”,为进一步研究人Polβ基因在环境化学污染物所致的DNA损伤修复中的作用机制作准备。方法依据Genbank中人polβ基因的cDNA序列,运用dsRNAoligonucleotidedesigner设计出用于RNA干扰用的dsRNA寡核苷酸序列,并以化学方法合成之。通过重组DNA技术将合成好的dsRNA克隆到含人pU6启动子的pSIRENRetroQ逆转录病毒载体上,以此重组子转化感受态E.coliDH5α,经氨卞青霉素筛选后进行扩增,并抽提质粒。运用EcoRⅠ和BglⅡ消化并回收“pU6dsRNA”目的片段,再将“pU6dsRNA”亚克隆到pEGFPC1上,获“pEGFPC1pU6dsRNA”重组子,并进行酶切鉴定和序列分析。结果经酶切鉴定发现,“pEGFPC1pU6dsRNA”载体重组子处于预期条带位置,序列分析显示与所设计的目的片段序列完全相符。结论作者克隆了用于人Polβ基因靶向RNA干扰的dsRNA绿色荧光蛋白C1载体重组子“pEGFPC1pU6dsRNA”,为进一步研究Polβ基因功能作好了准备。
- 胡大林庄志雄何云纪卫东唐冬生袁建辉方道奎沙焱杨建平涂晓志胡恭华
- 关键词：DNA聚合酶ΒRNA干扰DSRNA重组子
- hMTH1缺陷细胞株建立及生物学特性研究被引量：2
- 2003年
- 目的 建立hMTH1缺陷细胞株 ,观察该缺陷所引起的生物学效应。方法 用hMTH1基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 (pEGFP C1 T)转染人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,半定量RT PCR鉴定其对hMTH1基因mRNA表达的抑制效果。同时观察转染细胞生长形态 ,绘制生长曲线 ,用流式细胞术观察细胞周期 ,软琼脂培养法鉴定恶性程度。结果 pEGFP C1 T载体在转染细胞内可较稳定表达 ,缺陷细胞株hMTH1mRNA表达水平比HLF细胞下降了 47%。hMTH1缺陷细胞生长形态无明显变化 ,细胞倍增时间为 0 89d ,与HLF细胞 0 93d接近 ,细胞周期各时相未受影响 ,软琼脂培养未见细胞集落。结论 hMTH1缺陷细胞株成功建立 ,该缺陷不足以单独引起可观察的生物学效应。
- 江高峰庄志雄刘起展何云杜柳涛
- 关键词：反义RNA基因转染流式细胞术生物学特性
- 逆病毒载体介导的16HBE pol β基因靶向RNA干扰
- 目的运用载体介导的RNA干扰技术靶向抑制人DNA聚合酶β基因在支气管上皮细胞中的表达,为研究DNA聚合酶β在环境化学污染物所致DNA损伤修复中的功能和机制作准备。方法利用分子克隆技术构建含pU6启动子的人DNA聚合酶β基...
- 胡大林庄志雄伍德娥何云纪卫东袁建辉方道奎沙焱杨建平涂晓志
- 关键词：RNA干扰
- 文献传递
- 矩类迁移比作为单细胞凝胶电泳指标的研究被引量：10
- 2005年
- 目的 研究单细胞凝胶电泳新指标。方法 采用H2 O2 对人外周淋巴细胞急性染毒作为DNA损伤模型,应用新型图像分析系统分析矩迁移比与惯量迁移比等指标。结果 Olive尾矩、矩迁移比和惯量迁移比3个指标与H2 O2剂量之间存在良好的线性剂量 效应关系,而尾长指标则在H2 O2 的高剂量范围(>160 μmol L)内出现饱和平台现象,且显示矩迁移比和惯量迁移比的变异系数较Olive尾矩有较小。结论 矩迁移比和惯量迁移比既有矩类指标的优点,又有比值类指标的优点,值得推广应用。
- 朱志良庄志雄黎建明吴礼康肖惠贞
- 关键词：单细胞凝胶电泳迁移剂量-效应关系OLIVE外周淋巴细胞急性染毒
- DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建被引量：1
- 2002年
- 目的 构建人DNA双链断裂 (DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料。方法 提取人胚肺成纤维细胞 (HLF)总RNA ,逆转录酶 多聚酶链式反应 (RT PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序列 ,经与pGEM T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后 ,将纯化的hKu70基因cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP C1中 ,筛选、克隆、抽提质粒 ,从而构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K。结果 经RT PCR获得 467bp含限制性内切酶位点的DNA片段 ,T载体克隆后经双酶切、测序 ,确定该片段为hKu70基因cDNA ,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,并双酶切 ,测序确证。结论 成功构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为建立该基因低表达细胞株。
- 刘起展庄志雄江高峰何云杜柳涛
- 关键词：DNA双链断裂修复基因真核表达载体反义RNA卫生毒理学
- 单细胞凝胶电泳图像分析系统1.0的设计
- 2006年
- 目的设计单细胞凝胶图像分析系统(IM I),并确定系统的可靠性与准确性。方法分析模拟彗星图像、用户使用情况、DNA损伤模型毒物H2O2的DNA损伤作用、被引用文献情况以及与权威的KS400彗星图像分析系统进行比较。结果IM I分析得出的尾矩准确度98.7%,H2O2引起的DNA损伤存在剂量—反应关系。IM I与KS400分析结果具有高度相关性,尾长相关系数r=0.997 6,P<0.000 1,尾矩相关系数r=0.996 4,P<0.000 1。近4年来,使用IM I作为研究工具发表的文献17篇,其中论著12篇。结论通过作者以及其他科研工作者的几年来的研究,表明IM I是一种可靠的彗星图像分析工具。
- 黎建明朱志良庄志雄籍涛肖惠贞
- 关键词：单细胞凝胶电泳DNA损伤
- XRCC1在MMS致人细胞DNA单链断裂修复中的作用被引量：1
- 2009年
- 【目的】阐明人X线修复交叉互补基因1(XRCC1)在人支气管上皮细胞DNA单链断裂修复(SSBR)中的作用。【方法】以XRCC1蛋白缺陷细胞株为模型,用标准断裂剂甲基磺酸甲酯(MMS)染毒,检测细胞存活、微核形成、彗星实验及细胞周期变化等方法测定细胞遗传毒性。【结果】XRCC1蛋白水平的降低使细胞对DNA损伤剂的杀细胞效应敏感度增加、微核形成增加、DNA单链损伤修复能力降低以及引起明显的细胞周期阻滞。【结论】结果提示XRCC1基因在DNA单链损伤修复及基因组稳定性方面起着重要的作用。
- 方道奎张建清胡大林袁建辉庄志雄
- 人支气管上皮细胞DNA聚合酶β基因RNA干扰后细胞生物学性状分析被引量：1
- 2010年
- 目的探讨人支气管上皮细胞(HBE)DNA聚合酶β(polβ)基因RNA干扰后的生物学性状变化。方法实验设实验组、空载体组、正常对照组、阳性对照组;运用载体介导的RNA干扰技术抑制polβ基因在HBE中的表达,在光学显微镜下观察转染重组子的实验组细胞及正常对照组细胞的形态学特征;绘制细胞生长曲线;分析细胞倍增时间;运用流式细胞技术分析细胞周期;以Hella细胞作阳性对照,采用软琼脂糖恶性程度鉴定实验分析细胞的恶性程度。结果光镜下可见实验组细胞内颗粒物明显增多,体积稍有增大;3组细胞的生长曲线均呈现相似的S型;实验组、空载体组及正常细胞组的倍增时间相近,分别为0.81、0.84和0.79d;3组细胞的G1期(83.9%、81.0%、84.6%)、G2期(4.9%、5.5%、6.2%)和S期(11.2%、13.5%、9.2%)分布相近;实验组细胞未见在双层软琼脂糖中生长出细胞集落,而阳性对照Hella细胞集落明显。结论 polβ基因缺陷对HBE生物学性状的短期影响不明显。
- 胡大林刘移民袁建辉纪卫东方道奎涂晓志杨建平庄志雄
- 关键词：RNA干扰人支气管上皮细胞生物学性状
