国家自然科学基金(30900555)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：刘安玲郑航梁博陈可和邹镇洪更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医科大学南方医院广西壮族自治区人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Rheb和Rheb＇D60K突变基因重组慢病毒载体的构建、鉴定及其对肝癌细胞凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 目的构建携带Rheb和Rheb'D60K突变基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在MCF-7细胞中的表达效果,观察其对肝癌细胞凋亡的影响。方法 PCR法扩增Rheb和Rheb'D60K突变基因,构建重组质粒LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K,脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染HEK-293 FT细胞,包装产生慢病毒颗粒。将病毒感染MCF-7细胞后Western blotting检测Rheb及PS6蛋白的表达;将病毒感染SK-HEP-1细胞饥饿处理后观察其凋亡情况。结果 PCR及测序表明成功构建了LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K重组慢病毒载体。Western blotting结果显示慢病毒LV31-Rheb-WT感染的MCF-7细胞内Rheb下游的PS6蛋白表达多于慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的MCF-7细胞。显微镜下慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的SK-HEP-1细胞饥饿后凋亡数目多于慢病毒LV31-Rheb-WT感染的SK-HEP-1细胞。结论本研究成功构建了Rheb和Rheb'D60K突变基因重组慢病毒载体,初步观察到该突变基因重组慢病毒载体可诱导肝癌细胞凋亡,为进一步研究Rheb基因在肝癌发生发展中的作用,进而开展肝癌的临床靶向治疗研究奠定了基础。
- 陈可和梁博邹镇洪韩泽龙潘金飞刘安玲
- 关键词：RHEB慢病毒载体MCF-7细胞株
- Flt-1和MVD在乳腺癌组织中的表达及意义
- 2011年
- 目的研究血管内皮生长因子受体1(Flt-1)和微血管密度(M VD)在乳腺癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学染色SP法检测56例乳腺癌组织和32例癌旁正常组织中Flt-1和M VD的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征间的联系。结果 Flt-1在乳腺癌中的阳性表达率和M VD值分别为75.0%和(44.76±10.17),显著高于癌旁正常组织的12.5%和(10.29±2.38)(P<0.05),且与乳腺癌的临床分期及淋巴结的转移有关,与病理类型、组织分型及ER、PR无关。乳腺癌组织中Flt-1与M VD的表达呈正相关(r=0.72,P<0.01)。结论 Flt-1在乳腺癌组织中高表达,尤其在伴有淋巴转移的癌组织中表达增高。Flt-1的高表达与M VD值的升高可作为乳腺癌的生长、转移以及预后的重要判定指标。
- 余海浪马文丽周珏宇刘安玲郑文岭
- 关键词：FLT-1MVD乳腺癌免疫组织化学
- FKBP38的原核表达、抗体制备及其应用
- 2010年
- 目的构建人FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物,制备兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价,为研究FKBP38的功能奠定基础。方法以人FKBP38 cDNA为模板,根据人FKBP38全长cDNA系列,设计PCR引物分别扩增N-末端(1-207aa)及C-末端(209-387aa),将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-6P1中,经BamH I/Sal I双酶切鉴定。GST-FKBP38-N及GST-FKBP38-C融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达。利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。使用纯化的抗FKBP38多抗以Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测FKBP38的表达与细胞内的定位。结果成功构建FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体,表达并纯化了GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白,制备并纯化了FKBP38特异性抗体。该抗体用于Western免疫印迹检测FKBP38在不同细胞株中的表达,特异性强、效价高;用于免疫荧光检测FKBP38在细胞内主要定位于线粒体上;用于免疫组织化学检测FKBP38在乳腺组织细胞呈现胞浆阳性。结论 FKBP38特异性抗体制备成功,该抗体可用于FKBP38的免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测,为深入研究FKBP38的功能奠定基础。
- 刘安玲赵莉Ma Dong-zhu贾春宏李明温芝华叶永斌
- 关键词：多克隆抗体免疫荧光免疫组织化学
- SCH66336对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制被引量：3
- 2010年
- 目的探讨法尼基转移酶抑制剂(FTIs)SCH66336对胃癌SGC-7901与MGC-803细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期胃癌SGC-7901与MGC-803细胞,分为实验组和对照组,实验组加入SCH66336使终浓度分别为0.1、0.3、1.0、3.0μM,对照组加入含等体积DMSO的培养基,每组设3个复孔。MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期与细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中核糖体蛋白S6的磷酸化(S235/236)、细胞周期素D1(cyclin D1)与活化的Caspase-3表达情况。结果与对照组比较,SCH66336作用后SGC-7901与MGC-803细胞抑制率及凋亡率明显升高,呈G0/G1细胞周期阻滞,cyclin D1与S6磷酸化表达明显降低、活化的Caspase-3表达升高(P<0.05),且呈时间及剂量依赖性。结论 SCH66336对SGC-7901与MGC-803胃癌细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能为抑制S6的活化、下调cyclin D1表达、激活Caspase-3依赖的凋亡通路。
- 刘安玲郑航
- 关键词：法尼基转移酶抑制剂细胞增殖
