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结核分支杆菌KatG基因表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达: 2000年; 目的　克隆与结核分支杆菌耐异烟肼密切相关的KatG基因 ,实现其在大肠杆菌中的表达并对其酶活性进行初步检测。方法　构建含KatG基因的表达质粒 pET2 4b KatG ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)菌株 ,获得稳定的高表达菌株后对表达产物进行过氧化氢酶活性的初步检测。结果　限制性内切酶分析结果显示所构建的 pET2 4b KatG表达质粒已成功克隆了KatG基因。含pET2 4b KatG表达质粒的大肠杆菌在导丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)诱导下表达 ,对表达产物进行SDS PAGE ,发现KatG表达产物相对分子质量约为 80× 1 0 3 ,表达产物约占总蛋白量的 1 7.7%。表达产物检测具有过氧化氢酶活性。结论　克隆并在工程菌中表达了异烟肼耐药密切相关的KatG基因 ,表达产物具备过氧化氢酶活性。可藉此方法研究结核分支杆菌的耐药机制。; 张文宏翁心华金陈一平陈澍邬祥惠; 关键词：结核分支杆菌 KATG基因基因表达质粒

结核分支杆菌katG蛋白的高表达与纯化被引量：4: 2000年; 目的　表达与纯化结核分支杆菌katG 蛋白,为深入研究异烟肼耐药机制奠定基础。方法　将含有katG 基因的pET24bkatG 表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) 菌株,在异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG) 诱导下表达,分别对不同诱导时间的表达产物进行SDSPAGE 以及考马斯亮蓝染色。获得稳定的高表达菌株后采用Xpress TM蛋白纯化系统对超声破菌液进行纯化。最后对纯化产物进行过氧化氢酶活性的初步检测。结果　对诱导后的重组大肠杆菌菌液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE) 以及考马斯亮蓝染色后发现相对分子质量约为80 000 。表达蛋白量约占总蛋白量的17.7% 。对重组katG基因表达产物进行纯化的结果发现,以350 m mol/L咪唑洗脱时的纯化效果最理想,蛋白纯度可达90 % 以上。对表达产物进行过氧化氢酶活性初步检测证明,重组的katG 基因产物具有过氧化氢酶活性。结论　通过pET24bkatG 表达质粒转化大肠杆菌可获得基因重组的katG 高表达菌株,表达产物具有一定酶活性。; 张文宏翁心华季朝能毛裕民陈一平陈澍邬祥惠; 关键词：结核分支杆菌基因表达异烟肼

上海地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型特点分析被引量：1: 2007年; 目的探讨上海市乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布及与HBV感染患者的临床意义。方法选择2005年2月至2006年2月上海华山医院门诊及住院患者中HBVDNA阳性(荧光定量PCR法)的HBV感染者45例,采用S基因序列分析法检测HBV基因型,并分析相应的前-C/C基因序列特点。根据患者的HBV标志物和HBVDNA水平判断不同基因型与疾病的相关性。结果45例HBV感染者中基因型B共15例,C型30例,无A、D、E、F、G、H基因型。15例HBV/B均为Ba亚型,其中2例的前-C/C基因与HBV/C在nt1975～nt2293之间发生重组。HBV/C的HBeAg阳性率显著高于HBV/B(分别为83.3%,33.3%;P<0.05),抗-HBe阳性率则显著低(分别为53.3%,73.3%;P=0.02)。2种基因型的HBVDNA水平无显著差异。结论本次抽样检查结果中HBV基因型为B型和C型,以C型为主,未发现A、D、E、F、G、H型。HBV/C型与B型相比有较高的HBeAg阳性率和较低的抗-HBe阳性率。; 王金蕾刘刚金嘉琳孟成艳张文宏; 关键词：肝炎病毒基因型

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