北京市重点实验室开放基金(KF2004-04)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：张春叶李焕荣路苹沈红于同泉更多>>
- 相关机构：北京农学院北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：北京市重点实验室开放基金北京市教委科技计划面上项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪呼吸道冠状病毒及实验室诊断方法研究进展被引量：3
- 2007年
- 从猪呼吸道冠状病毒(porcine respiratory coronavirus,PRCV)基因组特点、结构蛋白、病毒变异与演化、实验室诊断等方面论述PRCV的研究进展,对进一步地了解该病毒的特性,制定合理的预防和检疫措施,防止该病传入中国奠定基础。
- 李焕荣张春叶林祥梅路苹于同泉
- 关键词：猪呼吸道冠状病毒结构蛋白病毒变异
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆及原核表达载体的构建被引量：1
- 2008年
- 参考GenBank上公布的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点序列,应用Prim-er6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增B、C抗原位点目的片段,将扩增产物连接于peasy-T克隆载体上,构建克隆载体,用EcoRⅠ和XhoⅠ对表达载体PET-32a(+)和重组质粒进行酶切,将酶切产物亚克隆至PET-32a(+)多克隆位点上,连接、转化至BL21(DE3),构建B、C位点的原核表达载体,并对阳性重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。所扩增的目的片段的大小为357 bp,与原核表达载体连接后,经核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,说明成功地构建了TGEV S基因B、C抗原位点的原核表达载体。TGEV S基因B、C抗原位点原核表达载体的成功构建,为TGEV诊断方法的建立提供良好的技术基础。
- 张春叶沈红李焕荣路苹
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒原核表达载体
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点的克隆及原核表达载体的构建
- 2008年
- 研究目的对猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点进行克隆和原核表达载体的构建。方法参考GenBank上公布的TGEVS基因A抗原位点序列,应用Primer6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增A抗原位点目的片段,将扩增产物连接于paesy-T克隆载体上构建克隆载体,用EcoRI和XholI对表达载体PET-32a(+)和重组质粒进行酶切,将酶切产物亚克隆至PET-32a(+)多克隆位点上,连接、转化至BL21(DE3),构建A位点的原核表达载体,并对阳性重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。结果所扩增的目的片段的大小为534bp,与原核表达载体连接后,经核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其它猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,说明成功地构建了TGEVS基因A抗原位点的原核表达载体。结论TGEVS基因A抗原位点原核表达载体的成功构建,填补了中国国内单独针对此位点进行研究的空白,也为TGEV诊断方法的建立提供良好的技术基础。
- 张春叶沈红张莉李焕荣路苹
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒克隆
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点序列的克隆与原核表达被引量：2
- 2007年
- 将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因A抗原位点目的片段克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导,进行SDS-PAGE和Western-blotting分析,确定目的蛋白的原核表达情况和免疫特异性。结果显示,目的片段的大小为534bp,序列分析表明,该基因与其他TGEV相应基因具有很高的同源性;Western-blotting检测可见分子质量约43 ku的融合蛋白条带,表明,该蛋白具有良好的反应原性。
- 张春叶张莉沈红李焕荣吴国娟于同泉路苹
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒克隆原核表达
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间片段的克隆与原核表达被引量：3
- 2008年
- 将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间的目的片段经克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达其融合蛋白。结果显示,目的片段的大小为357bp,序列分析表明,S基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性;Western-blotting检测表明,分子质量约34ku的融合蛋白具有良好的反应原性。
- 张春叶孙英健沈红李焕荣吴国娟于同泉
- 关键词：传染性胃肠炎病毒S基因原核表达
