国家林业局948项目(2011-Z46)
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
- 相关作者：张霄王耘刘媛刘贤金贺江更多>>
- 相关机构：南京农业大学江苏省农业科学院图尔库大学更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划江苏省农业科技自主创新基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学理学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 抗拟除虫菊酯类农药广谱性单克隆抗体的研制及鉴定被引量：6
- 2014年
- 制备了抗拟除虫菊酯类农药(Pyrethroids)的广谱性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性;以间苯氧基苯甲酸(PBA)为半抗原,用活性酯法将其与牛血清蛋白(BSA)偶联制得人工抗原PBA-BSA免疫Balb/c小鼠,5次免疫后选择效价最高、对PBA识别能力最强的小鼠取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG1500作用下融合,经间接ELISA筛选及有限稀释法进行亚克隆,分离阳性细胞株,腹水诱导法大量制备单克隆抗体,并用Protein G亲和柱纯化,间接ELISA法测定抗体效价、亚型、亲和力常数及对拟除虫菊酯类农药的作用;UV结果显示,PBA-BSA成功偶联,获得1株稳定分泌抗拟除虫菊酯类农药单克隆抗体的杂交瘤细胞株4H11,其培养腹水抗体效价为1∶6.5×106,其抗体亚类为IgG1,对PBA的亲和力常数为2.5×10 L/mol,对PBA的IC50为208.9μg/L,检出限为21μg/L,对高效氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氰戊菊酯和氯氰菊酯的IC50分别为1.01,2.15,3.16和3.67μg/L。
- 文孟棠刘媛闫帅张霄王恒刘贤金
- 关键词：拟除虫菊酯类农药单克隆抗体酶联免疫吸附法
- 代谢木糖产乙醇的微生物研究进展(英文)
- 2011年
- 木糖作为纤维质原料水解液中第二大含量的糖,可达植物纤维质原料水解液的30%。能否充分利用木糖将是决定纤维质原料生产乙醇经济可行的关键因素。综述木糖发酵生产乙醇的背景、木糖发酵生产乙醇的自然微生物种类、木糖代谢途径及其机理以及近年来构建基因工程菌发酵木糖生产乙醇的研究进展,并对木糖发酵在乙醇工业上的一些问题进行了科学的探讨。
- 叶凯陆亮涂振东再吐尼古丽.库尔班
- 关键词：木糖乙醇发酵
- 时间分辨荧光免疫法测定土壤中Cry1Ac毒素被引量：2
- 2012年
- 为了建立快速监测土壤中Cry1Ac毒素的方法,本试验利用Cry1Ac多克隆抗体和铕标记的羊抗兔IgG,采用时间分辨荧光免疫分析技术(Time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)法快速检测5种典型土壤(黑土、黄壤、红壤、紫色土、潮土)中Cry1Ac毒素的回收率。结果表明,该方法最低检出限为0.3μg/L,线性检测范围为0.3～500.0μg/L,批内和批间变异系数均小于10.00%。5种土壤中Cry1Ac毒素的平均添加回收率为75.03%,其中有机质含量最高的黑土的添加回收率最低,且随着不同土壤中有机质含量的降低,添加回收率逐渐升高。间接时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)法与酶联免疫吸附(ELISA)法的测定结果高度相关,相关系数为0.996 7。因此,本试验建立的TRFIA方法可为土壤中Cry1Ac残留检测提供一个新的平台。
- 王耘刘贤进刘媛张存政张霄徐重新
- 关键词：土壤时间分辨荧光免疫分析
- 基于分子信标的有机磷农药适配体活性位点分析及改造被引量：8
- 2012年
- 设计了一个长度为20个核苷酸的分子信标,建立了有机磷农药和分子信标竞争结合适配体鉴定其活性的方法,对前期筛选的两条适配体进行了活性位点分析和改造。结果表明,分子信标设计合理,性能稳定,其发夹结构在室温下既可成功闭合也可成功打开,最佳的活性鉴定条件为分子信标与适配体添加比例1.25∶1,孵育时间50 min,孵育温度为室温。活性位点分析表明Loop2-4是4种有机磷农药共有的活性位点,Loop2-3及SS4-54适配体5'端和3'端残余的核苷酸是甲拌磷重要的活性位点,Loop2-2和Loop4-2是丙溴磷和水胺硫磷共有的活性位点,Loop4-3是丙溴磷和氧化乐果共有的活性位点,Loop2-1和Loop4-1是水胺硫磷重要的活性位点。通过基因拼接改造的SS24-PJ-35适配体对丙溴磷和水胺硫磷的结合活性明显提高。
- 王丽张存政刘媛屠康桑宏庆刘贤进
- 关键词：分子信标适配体有机磷农药
- 几种生物特征识别技术在食品有害小分子物质快速检测中的应用被引量：1
- 2013年
- 食物中有毒有害小分子的检测方法一直是食品安全的研究热点。仪器法检测成本高、耗时长。为了促进开发新型的快速检测技术,该文介绍了单链抗体、核酸适体和抗运载蛋白为代表的3种生物特征识别材料,比较了各检测体系的特异性、灵敏度、稳定性及实用性,并在其应用研究进展的基础上,对今后的研究方向进行了展望,以期推进食品安全快速检测技术的发展。
- 王耘刘贤进刘媛张存政谢雅晶白红武
- 关键词：小分子
- 基于磁珠和时间分辨荧光免疫分析的微囊藻毒素LR单链抗体筛选与鉴定被引量：8
- 2012年
- 【目的】从鼠源合成噬菌体抗体库中,快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体。【方法】采用磁珠筛选和负筛选方法,设计两轮微囊藻毒素LR单链抗体的筛选方案。用噬菌体产出投入比和多克隆噬菌体免疫分析,对每轮筛选后微囊藻毒素LR特异性噬菌体的富集效果进行鉴定。再将第2轮筛选获得的次级库提取单链抗体基因,转入可溶性表达载体;诱导表达后,采用时间分辨荧光免疫法,对单个噬菌体克隆鉴定并测序。【结果】两轮筛选的噬菌体产出投入比分别为4.8×10-8和2.88×10-6。第2轮筛选后的次级库,经多克隆噬菌体免疫分析得到的荧光信噪比,比原始抗体库提高了22.8倍。最终鉴定得到5株不同的阳性噬菌体克隆,其中最佳的克隆对微囊藻毒素LR的检测灵敏度(IC10)为13 ng.mL-1,抑制中浓度(IC50)为435 ng.mL-1,线性范围在31—5 952 ng.mL-1。【结论】本研究筛选到的单链抗体,有潜力应用于微囊藻毒素LR的免疫学检测或免疫亲和柱的制备,同时也探索了一种高效的微囊藻毒素LR单链抗体的库筛选、鉴定方法。
- 刘媛Huovinen Tuomas刘贤金梁颖张存政谢雅晶贺江王耘张霄
- 关键词：微囊藻毒素LR单链抗体磁珠
