云南省自然科学基金(2004C0029Q)
- 作品数：3 被引量：19H指数：1
- 相关作者：彭梅孙茂盛张光明谢天宏李鸿钧更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组抗菌肽基因克隆及其在Pichia pastoris中的表达及鉴定被引量：1
- 2008年
- 根据毕赤酵母对遗传密码的偏爱性,在不改动氨基酸序列的前提下,用化学法合成抗菌肽麻蝇素A的基因片段,合成片段拼接后,与α因子重组,重组基因再构建到表达载体pPIC9K上,得到受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,经限制性酶切鉴定及核苷酸序列分析,阳性重组子转化pastoris GS115宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达.表达产物经PAGE凝胶电泳分析、纯化及抗菌活性检测,结果表明,重组抗菌肽基因在酵母中获得高效表达,表达产物经α因子信号肽分泌到胞外,具有较强的抗菌活性。
- 彭梅孙茂盛
- 关键词：基因克隆PICHIAPASTORIS
- 重组抗菌肽基因克隆及其Pichia pastoris表达工程菌的构建
- 2007年
- 根据毕赤酵母对遗传密码的偏爱性,在不改动氨基酸序列的前提下,用化学法合成抗菌肽麻蝇素A的基因片段,合成片段拼接后,与α因子重组,重组基因再构建到表达载体pPIC9K上,得到受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,经鉴定分析,阳性重组子转化pastoris GS115宿主菌,经过表型筛选,成功获得了高效分泌表达麻蝇素A的重组毕赤酵母工程菌.
- 彭梅尹娜谢天宏葛长勇张光明李鸿钧孙茂盛
- 关键词：基因克隆PICHIAPASTORIS
- 抗菌肽Cecropin D在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定被引量：18
- 2008年
- 目的在毕赤酵母GS115中表达抗菌肽Cecropin D,并检测其抗菌活性。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性,人工合成6条寡聚核苷酸片段,经磷酸化、退火、连接并克隆入酵母表达载体pPIC9K。重组表达质粒pPIC9K-D转化至毕赤酵母菌GS115,经G418筛选,阳性高拷贝克隆用0.5%的甲醇诱导表达,表达产物经CM-Sepharose层析柱纯化,Tricine-SDS-PAGE分析,琼脂糖扩散法和比浊法测定其抗菌活性。结果经Tricine-SDS-PAGE检测,在相对分子质量3900左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后的目的蛋白纯度达90%以上,获得的抗菌肽Cecropin D对一些革兰阳性菌和革兰阴性菌均有抑菌活性。结论抗菌肽Cecropin D成功地在毕赤酵母中分泌表达,为以后深入研究抗菌肽奠定了基础。
- 尹娜李鸿钧彭梅谢天宏张光明施锐孙茂盛
- 关键词：抗菌肽CECROPIN毕赤酵母分泌表达
