国家自然科学基金(81060152)
- 作品数：11 被引量：58H指数：7
- 相关作者：刘芬邵强钱克俭曾振国丁成志更多>>
- 相关机构：南昌大学第一附属医院南昌大学丰城市中医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金江西省卫生厅中医药科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 微小RNA-146a在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中的表达被引量：7
- 2010年
- 目的 观察脂多糖（LPS）诱导对NR8383肺泡巨噬细胞微小RNA-146a（miRNA-146a）表达的影响.方法 将体外培养的肺泡巨噬细胞株NR8383分成LPS刺激组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,培养6 h后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）检测细胞miRNA-146a的表达.结果 LPS刺激组细胞培养上清液中TNF-α含量（ng/L）较PBS对照组明显升高（650.26±40.53比6.23±1.76,P〈0.01）,细胞miRNA-146a表达水平较PBS对照组上调了约（5.33±0.81）倍（P〈0.01）.结论 LPS刺激后,miRNA-146a在NR8383细胞中表达增高,其可能参与了NR8383肺泡巨噬细胞的炎症反应调控.
- 刘芬曾振国丁成志邵强李勇钱克俭
- 关键词：肺泡巨噬细胞炎症反应
- MicroRNA-146a调控肺泡巨噬细胞炎症反应的机制被引量：3
- 2015年
- microRNA是一类大小约22个核苷酸长度的内源性非编码小分子RNA[1],主要通过识别并结合靶基因mRNA的3＇端非编码区,在转录后水平抑制蛋白的翻译或促进靶基因的降解[2-3].有研究发现微小RNA参与肺内炎症反应的调控[4],miR-146a是其中较有代表性的一个.本课题组前期研究发现,用LPS刺激肺泡巨噬细胞,miR-146a的表达水平升高,并且升高程度与TNF-α mRNA呈负相关[5];转染miR-146a能下调LPS诱导肺泡巨噬细胞TNF-α的表达[6],表明miR-146a能抑制LPS诱导肺泡巨噬细胞的炎症反应.本实验拟进一步探讨miR-146a调控肺泡巨噬细胞炎症反应的机制,为体内试验提供理论依据.
- 张建国陈晓娟丁成志邵强曾振国刘芬钱克俭
- 关键词：肺泡巨噬细胞炎症反应LPS诱导非编码区微小RNA
- 微小RNA-146a调控肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1和肿瘤坏死因子受体相关因子6的表达被引量：9
- 2014年
- 目的 观察转染微小RNR-146a（miR-146a）对肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1（IRAK-1）和肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF-6）表达的影响,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控机制奠定基础.方法 将体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383分为miR-146a模拟物（mimic）组和阴性对照组,分别加入50 nmol/L Pre-miR miR-146a前体和Cy3标记的Pre-miR阴性对照进行转染,转染24 h后收集细胞,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞中miR-146a、IRAK-1 mRNA、TRAF-6mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞中IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达.结果 miR-146amimic组miR-146a表达较阴性对照组上调了（24.55±6.14）倍（t=-6.643,P=0.003）.细胞中IRAK-1和TRAF-6的mRNA表达分别为阴性对照组的（1.16±0.10）倍（t=2.701,P=0.054）和（1.19±0.16）倍（t=2.032,P=0.112）.而IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达分别为阴性对照组的73.0％（t=-9.353,P=0.001）和64.1％（t=-6.839,P=0.002）.结论 miR-146a mimic能成功转染肺泡巨噬细胞NR8383; miR-146a过表达后,能有效下调肺泡巨噬细胞中IRAK-1和TRAF-6的表达,其机制可能是在蛋白翻译水平的抑制.
- 黄萍刘芬曾振国黄彩雪邵强夏亮揭克敏钱克俭
- 关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6肺泡巨噬细胞炎症反应
- 白藜芦醇对脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞微小RNA-146a表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞微小RNA-146a（miR-146a）表达的影响。方法将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）按2×106个／孔接种于六孔板，细胞贴壁90min后，分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、终质量浓度LPS（1wg／mL）处理组、自藜芦醇（1ug／mL）预处理30min＋终质量浓度LPS（1wg／mL）处理组、白藜芦醇（10wg／mL）预处理30min＋终质量浓度LPS（1gg／mL）处理组。细胞培养6h后，收集细胞和细胞培养上清液，采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-146a的表达变化，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养上清液中TNF-a蛋白的表达变化。结果与PBS对照组相比，LPS处理组细胞中miR．146a和TNF-a蛋白表达量均明显升高[miR-146a表达倍数（5．92±1．57）倍vs．（1．03±0．58）倍，P〈0．01；TNF-a质量浓度（644．2±36．82）pg／mLvs．（26．15．4-13．43）pg／mL，P〈0．01]。与LPS处理组相比，白藜芦醇预处理组（1wg／mL和10ug／mL）细胞中miR-146a表达量均明显升高[miR-146a表达倍数（8．67±1．18）倍、（11．174-1．40）倍VS．（5．92±1．57）倍，P〈0．01]，TNF-a蛋白质量浓度均显著降低[TNF-d质量浓度（447．7±41．48）pg／mL、（345．0±42．54）pg／mLvs．（644．2．4-36．82）pg／mL，P〈0．01]，且相比于较低质量浓度白藜芦醇组（1ug/mL组），较高质量浓度白藜芦醇组（10ug/mL）更能诱导miR-146a的表达、抑制TNF—a蛋白的分泌（P〈0．01）。结论白藜芦醇可以上调肺泡巨噬细胞内miR-146a的表达水平，推测miR-146a参与了白藜芦醇的抗炎过程。
- 曾振国邵强李勇丁成志卿城刘芬詹以安聂成揭克敏龚洪翰钱克俭
- 关键词：白藜芦醇肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-A
- 转染miR-146a对肺泡巨噬细胞中核因子-κB表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的观察肺泡巨噬细胞转染miR-146a后细胞浆与细胞核内核因子-κB(NF-κB)表达的变化,探讨miR-146a调控肺泡巨噬细胞炎症反应的可能机制。方法将NR8383大鼠肺泡巨噬细胞分成两组:一组为转染组,转染50 nmol/L Pre-miRTMmiR-146a Precursors;另一组为对照组,转染50 nmol CyTM3-labeled PremiRTMNegative Control。两组细胞转染24 h后加入含脂多糖培养基(终浓度1μg/mL),培养6 h后收集细胞,分别提取细胞浆蛋白与细胞核蛋白,采用Western blot方法检测NF-κB p65蛋白的表达。结果转染组miR-146a表达较对照组上调(P<0.01)。转染组细胞浆内NF-κB p65蛋白表达较对照组上调(P<0.05),而细胞核内NF-κB p65蛋白表达较对照组下调(P<0.05)。结论肺泡巨噬细胞转染miR-146a可抑制NF-κB核转位,推测miR-146a通过此机制减轻肺泡巨噬细胞炎症反应。
- 聂成刘芬曾振国詹以安邓文刚卿城邵强丁成志揭克敏钱克俭
- 关键词：肺泡巨噬细胞MIR-146A核因子-ΚB核转位
- 脓毒症患者血浆miR-146a的表达及早期诊断被引量：2
- 2016年
- 目的研究脓毒症患者血浆中miR-146a的表达,评价其对脓毒症早期诊断的价值。方法采集脓毒症患者(脓毒症组,30例)及同期进行体检的健康人员(健康对照组,20例)的血标本。采用实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测血浆miR-146a水平;检测降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)水平,并记录APACHEⅡ评分。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆miR-146a、PCT、CRP对脓毒症的预测价值;分析miR-146a的表达与PCT、CRP及APACHEⅡ评分的相关性。结果脓毒症组miR-146a的表达倍数明显高于健康对照组[(7.03±3.17)比(2.39±1.47),P<0.05],PCT及CRP含量、APACHEⅡ评分亦高于健康对照组(均P<0.05);且miR-146a与PCT、CRP及APACHEⅡ评分呈正相关(r分别为0.767、0.797、0.672)。miR-146a诊断脓毒症的敏感性和特异性分别为86.67%、45.00%,ROC曲线下面积(AUC)为0.898。结论血浆miR-146a对脓毒症的早期诊断指标具有较高的敏感性及特异性。
- 黄彩雪刘芬彭菲菲曾振国江榕邵强钱克俭
- 关键词：脓毒症降钙素原C反应蛋白
- MicroRNA-146a在脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞中表达的动态变化被引量：7
- 2011年
- 目的 观察并分析microRNA-146a（miR-146a）在脂多糖（LPS）刺激肺泡巨噬细胞中不同时间表达的变化,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及机制奠定基础.方法 体外培养的肺泡巨噬细胞系NR8383分成LPS刺激组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,1 μg/mL的LPS刺激3 h,6 h,12 h后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中TNF-α的表达水平,实时荧光定量PCR（Taqman探针法）检测细胞miR-146a的表达情况.运用SPSS13.0统计软件,采取单因素方差分析或t检验进行数据统计分析.结果 ①LPS刺激3 h,6 h,12 h,细胞上清液中TNF-α的表达比对照组明显升高（P＜0.01）;②LPS刺激6 h,12 h细胞中miR-146a表达增高（P＜0.01）,且呈持续增高趋势.结论 LPS刺激后,miR-146a在NR8383肺泡巨噬细胞中的表达上调,且随着刺激时间的延长,miR-146a的表达有增高的趋势,推测其可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应调控.
- 曾振国李勇刘芬丁成志邵强钱克俭
- 关键词：脂多糖肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-Α炎症反应
- 转染微小RNA-146a对肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α 表达的影响被引量：12
- 2013年
- 目的观察转染微小RNA-146a（miR-146a）对大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响，探讨转染miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用。方法体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383，分别以25、50、100nmol／LCy^TM3 标记的Pre-miR^TM阴性对照转染细胞，选择转染效率最高的浓度作为实验浓度。将NR8383细胞分成两组，转染组转染50nmol／LPre-miRTMmiR-146a前体，对照组转染50nmol／LCyr^TM3标记的Pre-miRTM阴性对照，采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测转染后细胞内miR-146a的mRNA表达。用脂多糖（LPs）lmg／L刺激细胞6h后，采用酶联免疫吸附试验（EusA）测定细胞培养上清液内TNF-α蛋白表达，采用RT-qPCR检测细胞内TNF-αmRNA表达。结果以50nmol／LCy^TMm3标记的Pre-miRTM阴性对照转染细胞效率最高，约为80％。与对照组（作为1）相比，转染组细胞内miR-146a的mRNA表达上调了（24．55±6．14）倍（P〈0．01）。LPS刺激后，转染组细胞上清液TNF-α蛋白含量（ng／L）较对照组明显下降（211．5±30．4比616．6±423，P〈0．01），细胞内TNF-αmRNA表达下调了（47±6）％（P〈0．05）。结论转染miR-146a能下调肺泡巨噬细胞炎症因子TNF-α的表达，表明miR-146a能抑制LPS诱导肺泡巨噬细胞的炎症反应。
- 刘芬曾振国聂成丁成志邵强卿城钱克俭
- 关键词：肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-Α
- 脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞中microRNA-146a与TNF-α的相关性研究被引量：8
- 2012年
- 目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和microRNA-146a在脂多糖（LPS）诱导的NR8383肺泡巨噬细胞中的动态表达，分析二者在时间上的变化关系，探讨microRNA-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及其机制。方法体外培养的肺泡巨噬细胞接种于六孔板，贴壁后加入1μg／mL的LPS，刺激0、3、6、12h后离心收集培养上清液和细胞。采用实时荧光定量PCR检测细胞中microRNA-146a和TNF-αmRNA的表达，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测培养上清液中TNF-α蛋白水平的表达。microRNA-146a和TNF-αmRNA的相关性采用双变量Pearson相关性分析。结果（1）培养上清液中的TNF-α蛋白在LPS刺激3h后显著升高[（359．80±57．54）pg／mL，P〈0．01]，于12h达高峰[（729．22±50．40）pg／ml，pg〈0．01]；（2）LPS刺激3h后，细胞中TNF-αmRNA的表达即达到顶峰[（67．48±24．52）倍，P〈0．01]，6h后开始降低[（29．53±4．26）倍，P〈0．05]；（3）LPS刺激6h后，microRNA-146a表达水平显著增高[（5．33±0．81）倍，P〈0．01]，并且持续增高[12h：（8．21±1．19）倍，P〈0．01]；（4）细胞中microRNA-146a的表达水平与TNF-αmRNA的含量呈负相关（r=-0．895，P〈0．01）。结论在LPS诱导的肺泡巨噬细胞中，microRNA-146a的表达水平与TNF-αmRNA的含量呈负相关，推测microRNA-146a可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应调控。
- 曾振国龚洪翰李勇聂贞蕴揭克敏詹以安聂成刘芬丁成志邵强卿城朱白鹭钱克俭
- 关键词：肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-Α实时荧光定量PCR
- 体内转染微小RNA-146a对脓毒症小鼠肺的保护作用被引量：11
- 2015年
- 目的：观察体内转染微小RNA-146a（miR-146a）对脓毒症小鼠肺脏的保护作用。方法选择健康雄性BALB/C小鼠24只，按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组、转染组、转染对照组，每组6只。转染组小鼠经气管内预先滴入转染试剂in vivo-jetPEITM处理的miR-146a模拟物（agomir），转染对照组滴入in vivo-jetPEITM处理的阴性对照物。转染12 h后采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型；假手术组仅开腹游离盲肠，不进行结扎穿刺。各组于术后24 h处死动物，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测肺组织 miR-146a表达，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，测定肺组织湿/干质量（W/D）比值，光镜下观察肺组织病理学改变并进行肺损伤病理评分。结果脓毒症组、转染组、转染对照组小鼠肺组织miR-146a表达量分别上调至假手术组的（3.56±0.43）、（27.64±3.46）、（3.72±0.54）倍（P＜0.05或P＜0.01），且转染组miR-146a表达上调量明显高于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01）；而脓毒症组与转染对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。与假手术组比较，脓毒症组、转染组、转染对照组BALF中TNF-α水平均明显升高（ng/L：511.65±43.47、305.74±34.76、492.27±42.21比50.72±7.23，均P＜0.01），转染组TNF-α水平明显低于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01）。与假手术组比较，脓毒症组、转染组、转染对照组肺W/D比值明显升高（6.11±0.32、5.02±0.29、6.05±0.43比4.18±0.10，均P＜0.01），转染组明显低于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01），且转染组肺损伤病理评分较脓毒症组及转染对照组明显下降（分：6.12±0.75比10.53±1.52、9.73±1.08，均P＜0.01）。结论通过体内转染in vivo-jetPEI^TM荷载的miR-146a agomir可以上调脓毒症小鼠肺组织miR-146a表�
- 张建国丁成志邵强刘芬曾振国聂成钱克俭
- 关键词：体内转染脓毒症急性肺损伤
