国家自然科学基金(39970828)
- 作品数：5 被引量：22H指数：2
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- 相关机构：山东省医学科学院中国科学技术大学更多>>
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- 脐血造血细胞的体外扩增及分化特性被引量：1
- 2000年
- 目的：了解造血生长因子的不同组合对人脐血ＣＤ３４＋细胞的扩增效应及分化特性。方法：采用人脐血单个核细胞（ＭＮＣ）经ｒｈＩＬ－１，ｒｈＩＬ－３，ｒｈＩＬ－６，ｒｈＧ－ＣＳＦ，ｒｈＧＭ－ＣＳＦ和ｒｈＳＣＦ的不同组合进行体外扩增培养，动态观察了不同细胞因子组合对有核细胞总数的扩增数量，应用流式细胞技术（ＦＡＣＳ）动态分析了造血细胞的表面标志，并对液态扩增后造血细胞的粒－巨噬集落形成率（ＣＦＵ－ＧＭ）进行了动态观察。结果：经上述６种细胞因子培养２０ｄ，有核细胞总数增殖４４倍，液态扩增培养８ｄ后，ＣＦＵ－ＧＭ比原代ＭＮＣ增加１４．７４倍，扩增１８ｄ后，ＣＦＵ－ＧＭ明显减少，仅为原代ＭＮＣ的６．４２倍，且集落小于前者。扩增培养至６～８ｄ时，ＣＤ３４＋细胞总数是原代 ＭＮＣ的１２７．７９～１９６．４０倍，１８ｄ时下降至１０１．５１倍。结论：外源性造血生长因子可使脐血ＣＤ３４＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ产生明显的扩增效应。
- 张建华田志刚张彩王郡甫孙汭
- 关键词：造血生长因子脐血造血细胞体外扩增分化
- 非经典HLA Ⅰ类分子(HLA-G和HLA-E)在人肿瘤细胞系的表达及IFN-γ的调节作用被引量：17
- 2001年
- 目的：探讨非经典HLA Ⅰ类分子在人肿瘤细胞系的表达及IFN－γ的调节作用。方法：用RT－PCR法检测12种肿瘤细胞系和人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织标本HLA－G和HLA－E mRNA的表达。结果：人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织均有HLA－G和HLA－E mRNA的表达；12株肿瘤细胞中仅人T细胞淋巴瘤Karpas存在HLA－G3的mRNA表达，经IFN－γ处理后，Karpas出现HLA－G1／G5和HLA－G2／G4的表达，宫颈癌Hela细胞、黑色素瘤M21细胞和膀胱癌T24细胞出现HLA－G3 mRNA的表达；12株肿瘤细胞中有9株表达HLA－E mRNA。结论：肿瘤存在HLA－G和HLA－E mRNA的表达，IFN－γ可促进HLA－G mRNA的表达。肿瘤细胞HLA－G和HLA－E的表达可能是肿瘤逃避免疫系统监视的机制之一。
- 张彩田志刚魏海明冯进波许晓群张建华孙汭
- 关键词：HLA-GHLA-EIFN-Γ肿瘤
- T淋巴细胞对人骨髓造血细胞体外扩增的负调节作用被引量：2
- 2001年
- 采用抗CD3或抗CD8单克隆抗体的补体细胞毒方法体外清除人骨髓MNC(单个核细胞 )中的T淋巴细胞和用流式细胞技术 (FACS)分析细胞表面标志 ,观察人骨髓T淋巴细胞对造血细胞增殖的负调节效应。将MNC加入含多种造血生长因子的培养基进行液态扩增并检测其CD34+细胞绝对数、粒 巨噬集落 (CFU GM )和多向祖细胞集落 (CFU GEMM )形成能力。结果表明 ,抗CD3,抗CD8或抗CD3+抗CD8单抗清除T淋巴细胞的骨髓MNC ,其细胞总数经造血生长因子刺激培养 2 0天分别扩增了 75 .8,79.6和 77.4倍 ,明显高于对照组 (6 7.0倍 )。体外培养 6天时CD8清除组CD34+ 细胞的扩增最高可提高 17.82 %。上述 3个清除组的CFU GM产率分别为 173.6 7± 18.90 ,16 5 .33± 2 6 .5 8和 170 .33± 2 1.5 0 ,对照组 79.6 7± 8.33。这 3个清除组与对照组比较差异显著 (P <0 .0 5 )。上述 3个清除组的CFU GEMM产率分别为 4 31.33± 34.5 6 ,370 .33± 4 2 .10和 386 .6 7± 10 .0 2 ,对照组为 177.6 7± 2 6 .86。这 3个清除组与对照组比较P值分别为 <0 .0 0 2 ,<0 .0 5和 <0 .0 0 5。此研究结果提示骨髓中T淋巴细胞可以抑制造血细胞的体外扩增、CFU GM和CFU GEMM产率 ,其作用机制有待进一步探讨。
- 田志刚张建华王郡甫张彩孙汭
- 关键词：T淋巴细胞骨髓造血细胞细胞扩增
- 人次级淋巴组织趋化因子的基因克隆及原核表达被引量：3
- 2002年
- 目的 :获得人次级淋巴组织趋化因子 (SL C)基因 ,并通过大肠杆菌实现人 SL C的非融合表达。 方法 :提取淋巴结组织总 RNA,RT- PCR法扩增人 SL C成熟肽基因 ,克隆到 p MD18- T载体中 ,DNA测序。用限制性内切酶切下目的基因 ,与相应酶切的表达载体 p BV 2 2 0连接、筛选、鉴定。 4 2℃热诱导表达目的蛋白 ,SDS- PAGE和 Western印迹法鉴定重组蛋白 ,分子筛初步纯化目的蛋白。 结果 :表达蛋白占菌体 15 %以上 ,免疫印迹证实为特异性蛋白 ,分子筛纯化后纯度达 90 %以上。 结论 :成功获得人 SL
- 董忠军赵跃然游力高春义魏海明田志刚
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子基因克隆原核表达大肠杆菌基因表达
- T淋巴细胞清除促进脐血造血细胞的体外扩增被引量：2
- 2001年
- 采用抗CD3或抗CD8单克隆抗体的补体细胞毒方法清除脐血单个核细胞 (MNC )中T淋巴细胞 ,CD34免疫亲和柱纯化MNC中CD34 +细胞 ,流式细胞技术 (FACS )分析细胞表面标志。将CD34 +细胞中加入含多种造血生长因子的培养基进行体外液态扩增 ,并观察粒 巨噬集落 (CFU GM )和多向祖细胞集落 (CFU GEMM )形成能力。结果CD3+或CD8+细胞清除组和MNC经CD34免疫亲和柱纯化后 ,CD34 +细胞分别为 5 9 5 2 %、 5 6 70 %和 5 0 72 % ,比未纯化组 (1 0 7% )纯度大幅度提高。抗CD3单抗清除 +CD34纯化组和单纯CD34纯化组经造血生长因子刺激培养第 14天 ,细胞总数分别扩增 110 40倍和 87 0 0倍。抗CD3单抗清除 +CD34纯化组、抗CD8单抗清除 +CD34纯化组和单纯CD34纯化组的CFU GM产率分别为 2 86 5 0± 12 0 2、2 88 5 0± 17 68和 2 19 5 0± 5 3 0 3,前者虽高于后者 ,但差异无显著性。CFU GEMM产率分别为 376 67± 43 2 4、 438 33± 36 73和 311 0 0± 40 11,抗CD3单抗清除 +CD34纯化组无显著差异 ,抗CD8单抗清除 +CD34纯化组显示出显著性作用 (P <0 0 5 )。
- 田志刚张建华王郡甫张彩孙汭
- 关键词：T淋巴细胞脐血造血干细胞体外扩增
