国家自然科学基金(30000144)
- 作品数：20 被引量：102H指数：6
- 相关作者：赵卫杨佩英秦鄂德胡志君于曼更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 扩增我国登革2型病毒全长cDNA分子的技术方法融合PCR方法被引量：14
- 2001年
- 目的 :建立扩增登革 2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法 ,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径。方法 :根据我国登革 2型病毒D2 4 3株序列设计引物 ,首先采用长链RT PCR技术扩增病毒基因组 5′及 3′半分子 ,然后以半分子采用融合PCR法将两个半分子构建成全长cDNA分子。为进一步证实所构建全长cDNA分子的特异性 ,再以融合PCR产物为模板扩增 5′非编码区序列 ,与pGEM T载体连接 ,在 377A型自动测序仪进行序列分析。结果 :通过对逆转录反应及PCR扩增条件的优化 ,建立了制备大片段cDNA及构建全长cDNA分子的融合PCR方法。扩增的我国登革 2型病毒的 5′及 3′半分子的长度均为 5kb左右 ,采用融合PCR方法制备的全长cDNA长约 11kb ,与预期大小一致 ,非编码区测序结果表明扩增产物为D2 4 3所特有。结论
- 范宝昌赵卫胡志君于曼陈水平杨佩英秦鄂德
- 关键词：登革热病毒全长CDNA融合PCR
- 登革2型病毒乳鼠神经毒力相关位点的研究
- 2002年
- pDVWS501为含有登革2型病毒全长cDNA的质粒,可利用感染性转录体技术恢复为有活力的病毒MON501.将MON501注射乳鼠脑内可引发脑炎症状,其E蛋白的62,203位分别为Glu,Asn.采用OL-PCR方法把pDVWS501 E62位氨基酸突变为Lys,得到质粒TB62;E203位氨基酸突变为Asp,得到质粒TB203.将pDVWS501,TB62和TB203酶切后体外转录得到全长登革2型病毒转录体,应用电穿孔技术转染BHK-21细胞,7天后收毒.RT-PCR证实有登革2型病毒存在,接种C6/36细胞,3～5 d可使其产生典型病变.测定突变区域的序列,结果表明得到了恢复病毒MON501和E62,E203位点突变的重组病毒HFT62,HFT203.3株病毒均在其基因组5’端加“G”,3’端则与登革2型病毒野生株相同.分别将3株病毒稀释至105～102TCID50,经脑内途径注射1日龄乳鼠,发现与MON501相比,HFT62,HFT203在同一稀释度发病乳鼠的个数减少,发病时间延长且差异显著,表明E62,E203可能是登革2型病毒乳鼠神经毒力相关位点.
- 赵卫范宝昌胡志君陈水平王鹏程苑锡同李晓萸于曼秦鄂德杨佩英
- 关键词：乳鼠神经毒力登革2型病毒点突变登革热
- 新分离登革2型病毒福建株基因组全序列的测定被引量：9
- 2001年
- 目的 对新近分离的导致 1999年福建省登革热流行的登革 2型病毒FJ 10株进行基因组全序列测定及系统发生树分析。方法 利用RT PCR和 5′、3′RACE法扩增FJ 10株cDNA ,并进行克隆测序。利用DNASTAR软件的Clustal方法绘制系统发生树。结果 FJ 10株基因组全长 10 72 3个核苷酸 ,有 1个单一开放读码框架 (ORF ,第 97～ 10 2 6 9nt) ,编码 3391个氨基酸 ,5′和 3′非编码区长度分别为 96和 45 4个核苷酸。通过与标准株NGC株和我国其他地区分离株DEN2 0 4、43、44株比较 ,核苷酸同源性分别为 94.0 %、92 .8%、93.9%和 93.9% ,氨基酸同源性分别为 97.9%、97.2 %、97.7%和97.9%。以 47株登革 2型病毒E/NS1连接区 2 40个核苷酸序列进行系统发生树分析 ,福建株与印度尼西亚和斯里兰卡分离株亲缘关系较近 ,同属于第Ⅳ基因型。结论 FJ 10株基因组全序列一级结构与其他登革 2型病毒类似 ,其基因型不同于我国其他地区分离株DEN2 0 4、43和 44株。
- 耿丽卿秦鄂德赵卫胡志君苑锡同于曼李晓萸杨佩英
- 关键词：登革病毒全序列测定系统发生树基因型
- 我国两株登革2型病毒5′和3′端非编码区序列测定及二级结构分析被引量：5
- 2001年
- 为测定我国两株临床症状、乳鼠神经毒力不同的登革 2型病毒流行株 5′和 3′端非编码区序列 (untranslated region,UTR) ,分析二级结构差异与毒力变化的关系 ,分别从 D2 - 0 4、D2 - 44株感染的 C6/ 36细胞及鼠脑中提取总 RNA.以该 RNA为模板 ,利用 RACE法 ,分别扩增了 D2 - 0 4、D2 -44株的 5′和 3′末端 c DNA片段 .将其分别与 p GEM- T载体连接得到重组质粒 ,测定上述 c DNA插入片段的序列 .用 RNAdraw软件预测 D2 - 0 4、D2 - 44株 5′和 3′端非编码区的二级结构 .D2 - 0 4、D2 -44株 5′端和 3′端非编码区分别有 96和 454个核苷酸 .其中 5′非编码区 59位 C(D2 - 0 4 )→T(D2 -44 ) ,使 D2 - 44二级结构稳定性下降 ;3′端非编码区有 1 5个核苷酸不同 ,其中 T(355)→ A,T(32 6)→ G引起了所在位置二级结构自由能变化 ,且分别位于两个保守序列区 (conserved sequence,CS)CS1、CS2 A.这些位点变化可能与毒力有关 .
- 赵卫宋海峰杨敬胡志君杨佩英秦鄂德于曼
- 关键词：登革2型病毒
- 我国登革2、3、4型病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性研究被引量：4
- 2003年
- 目的 研究我国登革 2、3、4型病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性 ,为构建登革病毒的感染性克隆、深入阐明病毒的致病机理奠定基础。方法 以我国登革 2、3、4型病毒基因组全长cDNA为模板 ,用SP6RNA聚合酶系统制备体外RNA转录体 ,经电穿孔转染细胞 ,观察其致细胞病变效应。从病变细胞培养上清中提取总RNA ,用病毒特异引物进行RT PCR扩增 ,以证实细胞病变为转录体RNA的恢复病毒所致。结果 我国登革 2、3、4型病毒全长cDNA的体外RNA转录体均可使细胞产生病变 ,从细胞培养上清中可扩增出登革病毒特异的片段。结论 构建的我国登革 2、3、4型病毒全长cDNA的体外RNA转录体具有感染性 ,可在蚊传代细胞内恢复为登革病毒颗粒。
- 范宝昌赵卫陈水平于曼胡志君姜涛邓永强杨佩英秦鄂德
- 关键词：全长CDNA感染性登革病毒
- 登革热对军事行动的影响及美军的对策
- 2003年
- 赵卫秦鄂德张文炳
- 关键词：登革热军事医学登革病毒美军疫苗
- 登革2型病毒全长cDNA克隆定点诱变的OL-PCR方法被引量：3
- 2001年
- 目的 对带有登革 2型病毒 (DEN 2 )全长cDNA的质粒pDVWS5 0 1上E6 2、E2 0 3位点进行定点诱变。方法 设计 4对点诱变引物 ,运用OL PCR(overlapPCR)法 ,扩增出分别在E6 2或E2 0 3位带有点突变的 2条DNA片段 ,克隆至T载体 ,获T TB6 2、T TB2 0 3两个克隆。将T TB6 2用ClaⅠ和SphⅠ分别酶切 ,T TB2 0 3用SphⅠ +NheⅠ酶切后 ,用T4连接酶分别连接至pDVWS5 0 1,获重组质粒TB6 2和TB2 0 3。对TB6 2和TB2 0 3进行序列测定。结果 成功得到分别在E6 2、E2 0 3位带有点突变的TB6 2、TB2 0 3克隆。结论 OL
- 赵卫胡志君杨佩英秦鄂德于曼陈水平王鹏程耿丽卿范宝昌
- 关键词：登革2型病毒CDNA克隆定点诱变登革热病毒
- 我国两株登革2型病毒基因组的全序列分析被引量：9
- 2002年
- 本研究对我国两株登革２型病毒Ｄ２－４３株、Ｄ２－０４株的基因组进 行 了全序列测定，在此基础上对这两株引起不同临床症状及鼠神经毒力的登革病毒的基因组序 列进行了比较分析，结果表明Ｄ２－４３株与Ｄ２－０４株基因组全长约为１０ ７２３ｎｔ，核苷酸序列的同源性为９５．１％，氨基酸序列的同源性为９７．６％， 不存在特别的高变区。这两株序列中共有８３个核苷酸的变化导致了氨基酸的变化，其中２１个 差异氨基酸可引起所在位点电荷或极性的变化，位于登革病毒粒子表面的Ｅ糖蛋白第１２６位氨 基酸由Ｇｌｕ （Ｄ２－０４株）→Ｌｙｓ（Ｄ２－４３株）的变化对其抗原性有影响，可能引起了病毒对鼠神 经 毒力的改变。对结构糖蛋白Ｅ基因的聚类分析表明Ｄ２－４３株与新几内亚株、台湾８７株及菲律 宾 ８３株亲缘关系较近，Ｄ２－０４株与牙买加株及巴西９０年分离株的亲缘关系较近，表明我国存 在不同起源的登革２型病毒感染。
- 胡志君杨敬赵卫杨佩英范宝昌秦鄂德于曼
- 关键词：登革病毒基因组全序列分析
- 登革2型型内嵌合病毒HFT04/501乳鼠神经毒力特征的研究
- 2002年
- 赵卫范宝昌胡志君陈水平王鹏程苑锡同李晓萸于曼秦鄂德杨佩英
- 关键词：电穿孔法体外转录
- 纳米技术在生物医学中的应用被引量：5
- 2002年
- 纳米技术是21世纪最具前途的科研领域之一,它在生物医学研究中已得到广泛应用,由此产生了纳米生物学和纳米医学两个新的交叉学科。本文就目前纳米生物学和纳米医学中的重要研究进展作一综述。
- 赵卫曹虹万成松张文炳
- 关键词：纳米生物学生物医学
