国家自然科学基金(30672510)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：杜军蔡绍晖陈宏远方瑞衣艳梅更多>>
- 相关机构：中山大学暨南大学广东药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 成纤维细胞激活蛋白α与肿瘤的靶向治疗被引量：8
- 2008年
- 成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)是肿瘤相关成纤维细胞特异性表达的一种表面抗原,具有二肽基肽酶和胶原酶活性,在肿瘤的生长、浸润、转移中发挥重要作用。故以FAPα作为肿瘤基质标志物的病理诊断、肿瘤基因治疗或免疫治疗将成为可能。就近年来对FAPα结构特点、活性作用及在肿瘤诊治中的研究进展进行综述。
- 方瑞杜军陈宏远蔡绍晖
- 关键词：肿瘤相关成纤维细胞肽链内切酶靶向治疗
- 小鼠成纤维细胞激活蛋白α二肽基肽酶核心序列原核表达与纯化及复性被引量：4
- 2009年
- 目的:构建小鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)二肽基肽酶催化核心序列(FAPαc)的高效原核表达载体,进行该序列的原核表达、纯化和复性,为下一步高效抗体制作和以FAPα为靶标的抗肿瘤疫苗研发提供实验基础。方法:用PCR技术,从质粒pSecTag2/Hy-groB-FAPα中扩增出编码FAPα二肽基肽酶催化核心区域的基因片段,与原核表达载体pET28α(+)连接,在BL21(DE3)工程菌中实现重组蛋白His6-FAPαc的表达,并进行纯化和复性。结果:成功构建了小鼠来源的FAPα二肽基肽酶催化核心区域的原核表达质粒,通过对转化该质粒后的感受态细菌进行菌液PCR鉴定以及对该质粒进行BamHI和XhoI双酶切鉴定,鉴定结果与预期结果完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAPαc的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,表达产量占菌体总蛋白>70%;纯化了该融合蛋白,纯化后的蛋白纯度通过灰度分析>99%;对该融合蛋白进行了复性,复性后该融合蛋白由不溶的包涵体状态变为可溶的水溶状态。结论:成功表达、纯化和复性了FAPα二肽酶催化核心区域FAPαc,为深入开展FAPα的研究奠定基础。
- 江冠民刘鹏李小青王震衣艳梅杜军
- 关键词：复性
- IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测
- 2009年
- 旨在构建缺失N端前36个氨基酸的IκBα突变体真核表达载体,并对其表达及生物学活性进行检测。从人源子宫颈癌细胞HeLa中提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得IκBα缺失突变体的cDNA,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1/myc-HisA中,构建重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN。通过PCR方法、NcoⅠ酶切以及核酸测序分析对其进行鉴定;采用WesternBlot检测IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中的表达。将pcDNA3.1-IκBαΔN和pNF-κB-Luc共转染HeLa细胞,经TNF-α诱导后,利用萤光素酶报告系统来检测重组载体对NF-αB的抑制活性。结果表明,经PCR方法、NcoⅠ酶切鉴定及核酸测序分析后,证实成功构建了重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN;IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中高效表达,并对NF-κB有显著的抑制活性(P<0.01)。因此,真核表达载体pcDNA3.1-IκBαΔN构建成功,为一步研究NF-κB信号传导通路及其相关疾病提供有效的分子工具。
- 黄思超杜军邱胜红徐俊傅刘鹏马锦珊蔡绍晖
- 关键词：IΚBΑ缺失突变体NF-ΚB
