国家自然科学基金(81060066)
- 作品数：8 被引量：9H指数：1
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- 高血糖与足细胞损伤的研究进展被引量：1
- 2011年
- 足细胞（Podocyte）是肾小球脏层上皮细胞,贴覆于肾小球基膜（GBM）表面。它是终末期分化和特异化的细胞,胞体伸出许多伪足覆盖于肾小球基底膜（Glomerular Basement Membrane,GBM）,称为足突（Foot Process,FP）。
- 郑亚莉保莉
- 关键词：肾小球血糖足细胞损伤
- p35在胰岛β细胞中的表达及作用
- 2012年
- 目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)及其激活剂p35在胰岛β细胞中的表达及作用。方法分别离体培养小鼠胰岛β细胞株、Min6细胞、神经细胞及HEK293细胞,使用RT-PCR、免疫印迹和免疫沉淀等方法检测p35的表达及CDK5活性,并以小鼠胰岛β细胞株、Min6为研究体系,分为正常组(p35组)及p35+Ros组(CDK5活性抑制组),分别检测p35表达、CDK5活性及其对胰岛素分泌的影响。结果①体外培养的胰岛β细胞中,p35在mRNA和蛋白水平均有表达;②p35在胰岛β细胞通过形成CDK5/p35复合物激活CDK5的活性;③过度表达的p35可以使CDK5的活性增加3～4倍,明显抑制胰岛素分泌;④在p35组加入CDK5抑制剂Roscovi-tine(Ros),可抑制p35/CDK5的活性,增加胰岛素的分泌,说明CDK5的活性可抑制胰岛素分泌。结论结果证实p35在胰岛β细胞有表达,并通过激活CDK5的活性、调节胰岛素的分泌,可能在糖尿病胰岛β细胞的损伤机制中起重要作用。
- 保莉郑亚莉曹丽韩学卫罗红艳王慧李博李燕萍杜婧
- 关键词：P35CDK5激酶活性胰岛Β细胞胰岛素
- TFP5保护高糖诱发的胰岛β细胞损伤
- 2014年
- 目的探讨TFP5对高糖诱发的周期素依赖性蛋白激酶-5(Cdk5)过度活性的抑制作用及其对胰岛β细胞的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞株Min6,将TFP5转染到Min6细胞,空病毒载体为对照,比较转染率,并测定Cdk5激酶活性。将细胞分为低糖组(5 mmol·L-1)、高糖组(25mmol·L-1)和高糖+TFP5组,观察3组细胞中Cdk5激酶活性,并通过检测细胞凋亡标记Bax/Bcl-2评估细胞存活情况。结果 TFP5可有效转导进入Min6细胞内;高糖可诱导Cdk5过度活性,TFP5抑制高糖诱导的Cdk5过度活性;高糖刺激下Min 6细胞的Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2升高,细胞凋亡增加,而加入TFP5后可以减低Bax/Bcl-2的比值,减少细胞的凋亡。结论 TFP5可抑制高糖诱发的Cdk5激酶的过度活性、减少高糖刺激下胰岛细胞凋亡,具有潜在的以Cdk5为靶点治疗2型糖尿病的前景。
- 张霞张彬郑亚莉李博郭江涛曹旭芹
- 关键词：周期素依赖性蛋白激酶5葡萄糖胰岛素细胞凋亡
- TFP5对高糖诱发的细胞周期素依赖性激酶过度激活及胰岛β细胞凋亡的影响
- 2014年
- 目的：探讨TFP5对高糖诱发的细胞周期素依赖性激酶5（Cdk5）活性的抑制作用及其对胰岛β细胞的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞株Min6。将TFP5转染Min6细胞，分别用免疫印迹和免疫荧光观察其表达。实验分3组：低糖（5mmol/L）组，高糖（25mmol/L）＋空病毒载体（EV）组和高糖（25mmol/L）＋TFP5组，分别用同位素标记法测定3组细胞内Cdk5激酶活性；用酶联免疫吸附法测定3组细胞胰岛素分泌水平；用免疫印迹法测定胰岛β细胞凋亡。结果（1）表明TFP5来源和它的分子序列；（2）TFP5在Min6细胞内表达良好；（3）在高糖＋TFP5组Cdk5的活性明显低于高糖＋EV组（ P＜0.01），而且在高糖＋TFP5组胰岛素分泌明显高于高糖＋EV组（P＜0.01）；（4）在高糖组Min6细胞的Bax表达增加，Bcl-2表达减少，Bax/Bcl-2比值升高，细胞凋亡增加（P＜0.01，vs 低糖组），而加入TFP5后，Bax表达减少，Bcl-2表达增加，Bax/Bcl-2的比值减低（P＜0.01，vs 高糖组），细胞的凋亡减少。结论 TFP5可抑制高糖诱发的Cdk5激酶的过度活性、减少高糖刺激下胰岛细胞凋亡，从而恢复胰岛素分泌，具有潜在的以Cdk5为靶点治疗2型糖尿病的前景。
- 张霞付海霞郑亚莉
- 关键词：葡萄糖胰岛素细胞凋亡
- 以Cdk5为靶点探讨Cdk5活性抑制肽CIP在神经细胞和胰岛β细胞的作用机制被引量：1
- 2013年
- 目的探讨周期性依赖性蛋白激酶5(Cdk5)的活性抑制肽(CIP)在老年退行性疾病中的治疗作用及其机制。方法体外培养大鼠E18胚胎大脑皮质神经元细胞(以下简称神经细胞)和Min6小鼠胰岛细胞(以下简称胰岛细胞)。应用基因克隆CIP质粒,转入腺病毒,转染细胞。(1)根据是否导入CIP基因分为空载体组(EV组)和CIP转染组。(2)应用双氧水(H2O2)刺激神经细胞;应用不同浓度的葡萄糖(5mmol/L和25mmol/L)刺激胰岛细胞,分为对照组、H2O2组(或高糖组)、H2O2+CIP组(或高糖+CIP组)。用免疫印迹和免疫荧光检测基因的表达和细胞凋亡情况;同位素标记测定酶的活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定胰岛素的分泌水平。结果 H2O2刺激神经细胞1h后,可诱发p25表达,引起Cdk5过度活性,导致Tau蛋白过度磷酸化从而诱发细胞凋亡增多。CIP转染组较H2O2组Cdk5的活性降低(P<0.01);Tau蛋白以及凋亡相关蛋白的表达水平也降低(P均<0.01);高糖刺激神经细胞4h,诱发p35表达增多,使Cdk5活性增高而抑制胰岛素的表达和分泌。CIP转染组较高糖组Cdk5的活性降低(P<0.01);胰岛素的表达量和胰岛素的分泌水平亦明显增高(P<0.01)。结论 (1)在神经细胞中,CIP可以降低由于p25导致的Cdk5的过度活性,减少Tau蛋白的过度磷酸化,从而保护神经细胞,减少凋亡;(2)在胰岛细胞中,CIP通过抑制高糖引起的Cdk5过度激活状态,增加胰岛素的分泌。这可能是CIP在老年退行性疾病中起到保护性作用的机制之一。因此,CIP可能成为一个非常有前景的治疗老年退行性疾病(如老年痴呆和糖尿病)的新药物。
- 郑亚莉陆晓华保莉罗红艳曹丽李博
- NGF通过调节Sirt1蛋白对足细胞凋亡的保护作用
- 2020年
- 目的探讨神经生长因子(NGF)通过调节Sirt1蛋白表达对足细胞凋亡保护的作用机制,为临床治疗提供新的生物靶点。方法培养离体分化成熟的肾小球足细胞,转染空白RNA(con siRNA)或siNGF质粒,通过免疫印迹法测定Sirt1和凋亡表达蛋白Cleaved Caspase3的蛋白量,并观察给予不同浓度NGF刺激后上述蛋白的变化水平,观察NGF与Sirt1的相互关系及对足细胞的作用。结果分化良好的足细胞给予不同浓度的NGF刺激后,可见随着NGF浓度增加组蛋白去乙酰酶Sirt1的蛋白表达也增加;使用ViaFectTM转染试剂盒给足细胞转染(con siRNA)和siNGF,通过免疫印迹验证沉默NGF的表达,结果显示在siNGF沉默NGF表达组Sirt1蛋白表达降低,足细胞凋亡发生增多。而同时对siNGF组的细胞给予NGF刺激,与siNGF组比较,Cleaved Caspase3的蛋白表达减少,足细胞凋亡发生缓解。结论NGF通过增加Sirt1的表达对足细胞发挥保护作用,NGF/SIRT1轴可能成为一个新的干预足细胞损害的治疗靶点。
- 鄂静马丹娜马丹娜曹丽曹丽李博
- 关键词：神经生长因子足细胞
- 单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷制作大鼠肾病模型的研究和评价被引量：6
- 2011年
- 目的研究单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷(PAN)制作大鼠肾病模型的方法,临床病理过程及效果评价。方法成年雄性SD大鼠,体重200-250g。PAN 15mg/100g浓度溶解在0.9%氯化钠溶液中,从大鼠尾静脉注射(PAN组);对照组为等量生理盐水注射,测定不同时间点的血压、尿蛋白排泄量、观察尿蛋白、血清胆固醇和甘油三酯及血肌酐的变化及肾组织的病理改变。结果尿蛋白定量在PAN注射第8d达峰值,同时血浆蛋白明显降低,血胆固醇和甘油三酯明显增高;尿蛋白在第4周降至正常,然后又逐渐增高在14和20周时尿蛋白在PAN组显著高于对照组;肾小球硬化指数(GSI)在PAN组4、14和20周分别是6.21%、25.35%、30.49%,明显高于对照组。同时伴有收缩压在PAN组明显高于对照组,在注射后20周,PAN组血肌酐明显高于对照组。结论单次尾静脉注射PAN可成功地诱导肾病综合征(急性期)和慢性肾炎FSGS(慢性期)的肾病模型,成功率高,方法较简单,用药量少,克服传统方法用药剂量过小,造模失败或需重复注射使剂量过大而致动物死亡等缺点,是研究人类相关肾脏疾病的良好动物模型。
- 保莉罗红艳郑亚莉
- 关键词：嘌呤霉素氨基核苷尾静脉注射FSGS大鼠模型
- 糖尿病治疗前沿:细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)将成为治疗糖尿病的新靶点被引量：1
- 2012年
- 2型糖尿病（Diabetes Mellitus，T2DM）目前是全球性的威胁人民健康的公害之一，其并发症有心、脑、肾及眼底病变，尤其是糖尿病肾病，最终将走向慢性肾功能衰竭。不仅严重危害人类健康和降低生活质量，并对社会造成巨大的经济压力。对这类疾病的治疗已成为刻不容缓的世界问题。
- 郑亚莉
- 关键词：糖尿病胰岛素
