北京市自然科学基金(5102013)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：刘保清张海燕李卫红尤红王萍更多>>
- 相关机构：首都医科大学首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
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- 人胚胎肝脏细胞表型特征分析及肝脏前体细胞的克隆化培养
- 2010年
- 目的 研究体外胚胎期人肝脏细胞（FLCs）的表型特征并利用克隆培养法获得肝脏前体细胞.方法 用免疫荧光染色和流式细胞仪测定FLCs的抗原表达;采用克隆化培养法结合不同生长因子组合的培养基对FLCs进行单细胞克隆筛选,用克隆环分离各单克隆细胞,扩大培养后应用逆转录聚合酶链反应法测定不同克隆mRNA的表达.用SPSS12.0软件单因素方差分析不同培养基配方克隆形成率.结果 原代分离培养的FLCs呈非典型的上皮细胞形态、大小不均一,其肝脏前体细胞标志物甲胎蛋白、白蛋白、细胞角蛋白8和细胞角蛋白19的阳性率分别为28.1%、84.7%、55.1%和9.1%;造血干细胞标志物CD34和CD45的阳性率为0.04%和0.09%;间质细胞标志物CD105和CD166的阳性率分别为71.8%和75.3%.采用克隆化培养法获得的细胞克隆形态有一定差异,多数克隆由长梭形细胞组成,部分由形状不规则、胞体较铺展的细胞组成,少数克隆具有类上皮细胞形态.对可连续传代5次的19个细胞克隆进行RT-PCR分析结果显示,表皮细胞黏附分子、甲胎蛋白、白蛋白和细胞角蛋白19的阳性率分别为52.6%,21.1%,52.6%和84.2%.结论 原代培养的FLCs是混杂有多种类型细胞的异质性群体,克隆培养法可以获得肝脏前体细胞克隆.
- 王萍李卫红刘保清路欣尤红贾继东张海燕
- 关键词：干细胞克隆细胞体外研究细胞培养
- 致瘤素M对甲胎蛋白阳性人胚肝前体细胞体外分化的影响
- 2010年
- 目的探讨致瘤素M(OSM)对甲胎蛋白阳性人胚肝前体细胞(APHPs)体外诱导分化的作用。方法相差显微镜观察APHPs的形态学;间接免疫荧光染色法、过碘酸希夫氏糖原染色法和透射电子显微镜技术检测APHPs中白蛋白(ALB)表达、糖原合成以及超微结构。结果 OSM作用3 d后,部分APHPs呈聚集生长,7 d后,APHPs形成"类组织样小结",具有较强的白蛋白表达和糖原合成能力,细胞内富含大量的线粒体、内质网及囊泡样结构,相邻细胞间存在明显的间隙,面向细胞间隙面的细胞表面形成大量的微绒毛结构。结论 OSM诱导APHPs形成的"类组织样小结"具有部分成熟肝实质细胞的功能。
- 刘保清李卫红张伟涛路欣安威张海燕
- 关键词：肝前体细胞甲胎蛋白
- 利用甲胎蛋白启动子活力筛选人胚胎肝脏前体细胞被引量：1
- 2011年
- 目的利用甲胎蛋白启动子活力筛选人胚肝脏前体细胞克隆。方法经聚合酶链反应(PCR)扩增及酶切后连接,将甲胎蛋白启动子片段构建于pGL3载体中并测序鉴定,将其与pRL-TK质粒共转染到HepG2、A549和HeLa细胞中,通过相对荧光素酶活力分析甲胎蛋白启动子活力的特异性。采用克隆化培养法获得人胚胎肝脏细胞克隆,检测各克隆的甲胎蛋白启动子活力,并应用间接免疫荧光染色方法检测甲胎蛋白表达情况。结果经PCR、酶切分析及DNA序列测定证实pGL3-AFP质粒克隆成功。将其与pRL-TK质粒共转染到表达甲胎蛋白的HepG2细胞和不表达甲胎蛋白的A549、HeLa细胞中,仅在表达甲胎蛋白的HepG2细胞中检测到了较高的甲胎蛋白启动子活力,胚胎肝脏细胞中也检测到了甲胎蛋白启动子活力,表明其中含有表达甲胎蛋白的细胞。利用克隆培养法获得5个胚胎肝脏细胞克隆,将其分别共转染pGL3-AFP和pRL-TK质粒,发现其中1个克隆的甲胎蛋白启动子活力与HepG2细胞接近,且免疫荧光染色结果显示,该克隆细胞甲胎蛋白阳性率为(99.1±0.6)%,表明此克隆为肝脏前体细胞克隆。结论利用甲胎蛋白启动子活力结合克隆培养法可以获得肝脏前体细胞克隆。
- 王萍刘保清李卫红董凌月尤红贾继东安威张海燕
- 关键词：细胞克隆甲胎蛋白启动子免疫荧光
