国际科技合作与交流专项项目(2006DFB31410) 作品数:9 被引量:22 H指数:3 相关作者: 蔡剑平 郑君德 宋晓宁 林静 戴大鹏 更多>> 相关机构: 北京医院 广州医学院第一附属医院 中国医学科学院北京协和医学院 更多>> 发文基金: 国际科技合作与交流专项项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在快速老化小鼠SAMP8海马中表达的增龄性变化研究 被引量:1 2009年 目的观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-7,8-dihydroguanine,8-oxo-dG)在快速老化小鼠SAMP8海马不同区域的表达,探讨其变化与SAMP8增龄的关系。方法选用1、4、8、12月龄快速老化小鼠SAMP8(每组各6只),对照组为同龄抗快速老化小鼠SAMR1(每组各6只),用免疫组化法检测海马不同区域内8-oxo-dG的表达水平。结果8-oxo-dG在海马不同区域均有表达,且主要在海马神经细胞胞核内表达。对照组SAMR1小鼠海马各区域8-oxo-dG的吸光度定量结果显示各月龄组间无统计学差异(P>0.05);1、4月龄组SAMP8小鼠海马各区域8-oxo-dG的吸光度定量结果与同龄匹配的SAMR1小鼠间无统计学差异(P>0.05);8、12月龄组SAMP8小鼠海马各区域8-oxo-dG的吸光度定量结果分别显著高于1月龄和4月龄组(P<0.05),也分别显著高于同龄SAMP1对照组(P<0.05)。结论8-oxo-dG在SAMP8快速老化小鼠海马中的水平随增龄而显著增高。 郑君德 宋晓宁 林静 蔡剑平关键词:SAMP8 阿尔茨海默病 氧化应激与老年性痴呆发病的相关性研究 被引量:14 2008年 氧化应激作为老年性痴呆的发病机制之一越来越受到学术界关注。活性氧可氧化DNA、RNA和蛋白质导致基因突变、转录错误、转录效率降低、翻译错误,以及影响蛋白质正常功能的发挥。该文就氧化应激对DNA、RNA和蛋白质的氧化损伤与老年性痴呆发病的相关性进行综述。 郑君德 宋晓宁 林静 蔡剑平关键词:老年性痴呆 DNA RNA 蛋白质 氧化应激 MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响 被引量:2 2011年 目的建立敲减MTH1基因的HeLa细胞稳定细胞株,研究MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响。方法设计并合成针对MTH1基因的3条siRNA,分别转染HeLa细胞,选择干扰效果最为理想的靶序列连接入反转录病毒载体Retro-Q,在293T细胞内包装病毒颗粒,将病毒转染HeLa细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性克隆株,用western b lot技术检测克隆株的MTH1的表达量以确定干扰效果最理想的稳定细胞株,用API5000型质谱仪检测稳定细胞株RNA中的8-oxoG与G的含量以评价RNA的氧化程度。结果本研究设计的3条siRNA中有2条干扰效率可达90%以上,所建立的敲减MTH1基因HeLa细胞稳定细胞株的干扰效果达80%以上,质谱检测结果表明MTH1基因低表达的稳定细胞株每106个G中含有14.9个8-oxoG,而对照细胞中则仅含9.7个8-oxoG。结论 MTH1基因的低表达可引起HeLa细胞中RNA氧化程度明显升高。 戴大鹏 干伟 张立群 聂犇 徐仁爱 蔡剑平关键词:RNA干扰 MTH2蛋白与8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在阿尔茨海默病患者海马组织中的表达变化 被引量:1 2009年 目的:观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)及8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxodG)在阿尔茨海默病(AD)患者海马组织标本中的表达变化,探讨在AD患者海马中二者表达的相关性。方法:选用临床及病理均诊断为AD的尸检海马组织石蜡切片作为实验组,年龄匹配且临床及病理诊断均排除AD的尸检海马组织石蜡切片作为对照组,每组各3例,用免疫组化的方法分别检测人脑海马中8-oxo-dG的含量及MTH2蛋白的表达。结果:免疫组化定量结果显示,在人脑海马组织CA1及CA3区,AD患者8-oxo-dG的表达显著高于年龄匹配对照组,而AD患者MTH2的表达显著低于年龄匹配的对照组。结论:在人脑海马组织中,DNA氧化产物8-oxo-dG含量在AD患者比年龄匹配对照组有显著提高,抗氧化修复蛋白MTH2的表达量却显著降低,提示人脑海马组织中MTH2蛋白表达量的减少及8-oxo-dG含量的增加与AD的发病过程相关。 宋晓宁 郑君德 刘东戈 黑爱莲 蔡剑平关键词:阿尔茨海默病 快速老化小鼠SAMP8海马组织中基因表达谱的研究 被引量:1 2010年 目的观察快速老化小鼠P8(SAMP8)与同龄正常老化小鼠R1(SAMR1)海马组织中基因表达谱的差异。方法选用1、4、6、8、12月龄的SAMP8小鼠,用SAMR1作为对照组,每组各9只,快速处死后取海马组织提取总RNA,用纯化后的总RNA合成cDNA并标记荧光染料,与32k小鼠寡核苷酸微阵列芯片杂交,用共聚焦扫描仪LuxScanTM10KA及LuxScan3.0软件进行图像采集与数据处理,用SAM软件分析差异表达的基因,用MAS系统对差异基因进行通路(pathway)分析。结果正常老化小鼠SAMR1各月龄间表达谱差异无显著性,快速老化小鼠SAMP8各月龄间差异显著,两种品系小鼠的比较结果显示1月龄、12月龄基因表达差异最为显著,6月龄无显著差异。Pathway分析结果显示MAPK信号通路的基因表达差异最为显著。结论SAMP8小鼠与SAMR1小鼠海马的基因表达存在明显的差异,以MAPK信号通路的基因表达差异最为显著。 戴大鹏 宋晓宁 郑君德 蔡剑平关键词:快速老化小鼠 基因芯片 MTH2蛋白在快速老化P8小鼠海马中表达的增龄性变化 被引量:6 2008年 目的观察8氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)在快速老化P8小鼠(SAMP8)海马中的表达,探讨其与SAMP8增龄性变化的关系。方法该实验选用1、4、8、12月龄的sAMP8及同龄的抗快速老化R1小鼠(SAMR1)作为实验对象,每组8只,用免疫组化和免疫印迹法分别检测海马中MTH2蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,MTH2主要在SAMP8神经元胞浆内表达;海马不同区域均有表达,尤以CA1和CA3区表达最多。定量结果显示,SAMR1海马各区域MTH2的表达随增龄无显著性改变;而在SAMP8MTH2的表达随月龄增加而下降,8月龄海马CA1区的吸光度值(A值)为0.0473、CA3区为0.0510,显著低于4月龄海马CA1区的0.0619、CA3区的0.0680;12月龄海马CA1区的A值为0.0369、CA3区为0.0465,显著低于8月龄;8月和12月龄A值SAMP8分别显著低于同龄的SAMR1(P〈0.05)。免疫印迹结果显示,4~12月龄SAMP8海马内MTH2表达的灰度值(greylevel)分别为0.529、0.313、0.032,显著低于同龄SAMR1(P〈0.05)。结论MTH2蛋白的表达量在SAMP8随增龄而下降,8月龄和12月龄SAMP8的MTH2蛋白表达量与同龄对照组比较差异有统计学意义,提示MTH2蛋白表达量的减少与SAMP8的快速老化相关。 郑君德 宋晓宁 蔡剑平关键词:衰老 阿尔茨海默病 8-oxo-G在快速老化小鼠SAMP8海马中表达的增龄性变化研究 被引量:2 2008年 目的观察8-氧鸟嘌呤核苷(8-oxo-G)在SAMP8品系快速老化小鼠海马不同区域的表达,以探讨其与SAMP8小鼠增龄性变化的关系。方法选用1、4、8、12月龄的快速老化小鼠SAMP8以及同龄抗快速老化小鼠SAMR1(对照组),每组各6只,采用免疫组化方法检测小鼠海马不同区域8-oxo-G的表达。结果8-oxo-G主要在SAM小鼠海马神经元胞浆内表达。对照组SAMR1 1月龄小鼠海马CA1和CA3区8-oxo-G表达显著高于其他月龄组(P<0.05),4、8、12月龄小鼠间其表达差异无统计学意义(P>0.05);SAMP8 12月龄小鼠海马8-oxo-G的表达显著高于1、4、8月龄组(P<0.05);SAMP8和SAMR1小鼠之间比较,1、4月龄间差异无统计学意义(P>0.05),8、12月龄间差异有统计学意义(P<0.05)。结论SAMP8小鼠海马8-oxo-G的表达除1月龄外随月龄增加而增加,提示8-oxo-G的表达增加与SAMP8小鼠的快速老化相关,有可能为增龄,甚至AD的生物学标志。 宋晓宁 郑君德 林静 蔡剑平关键词:SAMP8 阿尔茨海默病 淀粉样前体蛋白在快速老化痴呆小鼠P8海马中表达的免疫组化学研究 被引量:4 2007年 目的:观察淀粉样前体蛋白(APP)在快速老化痴呆小鼠P8(SAMP8)海马中的表达,探讨其与SAMP8小鼠增龄性变化的关系。方法:选用1、4、8、12月龄的SAMP8,用同龄正常老化小鼠R1(SAMR1)作为对照组,每组各8只,用免疫组化方法检测海马区APP的表达。结果:APP主要在SAM鼠海马神经元胞浆内表达,海马不同区域均有表达。定量结果显示对照组SAMR1小鼠海马各区域APP的表达随月龄增加无显著性改变(P>0.05);而SAMP8小鼠APP的表达则随月龄增加而增加,8月龄和12月龄SAMP8小鼠CA1区的表达量显著高于1月龄组(P<0.05),也分别显著高于同月龄对照组(P<0.05),CA3区APP的改变稍晚于CA1区,与同品系1月龄小鼠及同龄对照组比较,12月龄时显示有显著性增加(P<0.05)。结论:SAMP8小鼠海马APP的表达随月龄增加而增加,提示APP表达量的增加与SAMP8小鼠的快速老化相关。 郑君德 宋晓宁 蔡剑平关键词:淀粉样前体蛋白 氧化应激 阿尔茨海默病 一种快速构建单靶或双靶基因位点RNAi质粒载体的方法 被引量:1 2009年 目的开发一种快速构建RNA干扰(RNAi)质粒载体的方法。方法以pBluescriptⅡ质粒载体为母体,逆向导入人U6和H1启动子序列,仅用两条互补的寡核苷酸链,可快速构建单靶基因位点RNAi质粒载体;利用RNAi表达框两侧的MunⅠ及EcoRⅠ酶切位点,将多个干扰表达框串联,可快速构建多靶基因位点RNAi质粒载体;根据以上原则,构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因和萤火虫荧光素酶(LUC)基因的单靶点及双靶点RNAi质粒载体,以检测其干扰效果。结果构建的RNAi质粒载体可产生较理想的干扰效果,单靶点RNAi载体的干扰效率可达90%,双靶点RNAi载体的干扰效率可达87.5%。结论该方法可快速构建单靶点及双靶点的RNAi质粒载体,可在同一细胞内同时对多个靶基因实施有效的RNA干扰。 戴大鹏 蔡剑平关键词:RNA干扰