国家自然科学基金(31101574)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：张昌伟杨玉霞李淑顺李倩中王静静更多>>
- 相关机构：南京农业大学江苏省农业科学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒RdRp基因hpRNAi表达载体的构建被引量：2
- 2013年
- 为了构建建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)复制酶RdRp基因hpRNAi的表达载体,根据GenBank中CymMV和ORSV RdRp基因的保守序列设计引物,以蝴蝶兰温室生产中两种病毒的分离物为模板,成功扩增了两种病毒的RdRp基因片段。扩增的这两种病毒的RdRp基因与数据库中病毒序列同源性均在98%以上。利用融合PCR将两种病毒片段串联在一起,然后通过Gateway技术的BP反应和LR反应将融合产物插入到基因沉默表达载体pHellsgate12中,成功构建了可同时抗建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的发夹结构RNA干扰载体,为兰花多抗基因工程育种奠定了基础。
- 杨玉霞言燕华韦武青马志虎李倩中李淑顺张昌伟
- 关键词：建兰花叶病毒齿兰环斑病毒抗病毒病RNA干扰
- 建兰花叶病毒南京分离物基因组测定与侵染性克隆构建
- 2013年
- 以建兰花叶病毒(CyMV)南京分离物侵染本氏烟的叶片为材料,利用RT-PCR扩增CyMV基因组cDNA,并进行测序,得到全长序列(GenBank登录号:JQ860108),然后插入到pCass4-Rz载体中,构建CyMV侵染性克隆载体。序列分析表明,与已报道的石斛兰、蝴蝶兰、香草兰分离物序列同源性高达96%以上,并且具有相同的基因组结构;不同国家和地区的序列进化树分析表明,其与我国台湾地区的病毒分离物亲缘关系最近。侵染性克隆通过农杆菌侵染接种本氏烟,与CyMV分离物具有相同的症状,并可利用RT-PCR检测到其外壳蛋白基因,表明成功构建了具有生物活性的CyMV侵染性克隆。
- 张昌伟王静静言燕华韦武青马志虎侯喜林
- 关键词：建兰花叶病毒侵染性克隆
- 蝴蝶兰全长cDNA文库构建及F3′H基因克隆被引量：12
- 2013年
- 以红色蝴蝶兰为材料,利用SMARTer技术构建蝴蝶兰全长cDNA文库,分析从文库中获得的EST序列,获得蝴蝶兰类黄酮3′羟化酶基因(PhF3′H)的全长,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR方法,研究PhF3′H基因在红色蝴蝶兰和黄色蝴蝶兰花瓣中的表达情况。结果表明:(1)从构建的蝴蝶兰文库中随机挑选24个单克隆进行测序,结果显示均含有插入片段,重组率为100.0%,其中扩增片段长度在750bp以上的克隆有22个,占91.7%。(2)获得的PhF3′H基因编码的氨基酸序列与大丽花(Dahlia pinnata,ADB_77826.1)、毛油点草(Tricyrtis hirta,BAH_22519.1)等多种观赏植物F3′H编码的氨基酸序列均具有较高的一致性。(3)实时荧光定量PCR检测结果显示,PhF3′H在红色蝴蝶兰中的表达量大约是黄色蝴蝶兰的19倍,说明该基因对蝴蝶兰花青素苷的积累有重要影响。该研究结果为蝴蝶兰新基因的挖掘及花色育种奠定了理论基础。
- 杨玉霞孙菲菲张昌伟
- 关键词：CDNA文库RT-PCR
