博士科研启动基金(WBS200811)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：李成文畅继武朱鸣阳李辉王伟更多>>
- 相关机构：天津市泌尿外科研究所武警医学院附属医院天津医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- shRNA干扰Bmi-1基因表达载体构建及其对膀胱癌5637细胞增殖抑制作用的研究被引量：1
- 2010年
- 目的:构建shRNA体内表达载体pGeneClipTM-shRNA,研究抑制Bmi-1基因表达对膀胱癌5637细胞凋亡的影响。方法:构建靶向Bmi-1的shRNA真核表达质粒pGe-neClipTM-B1、pGeneClipTM-B2以及pGene-ClipTM-B-neg(阴性对照质粒),采用脂质体转染试剂转染膀胱癌5637细胞,采用RT-PCR、蛋白质印迹法技术检测转染前后5637细胞中Bmi-1基因表达的变化;利用MTT法检测表达质粒对5637细胞增殖的影响;并利用流式法和蛋白质印迹法技术检测表达质粒对5637细胞凋亡的作用及影响机制。结果:经酶切、测序鉴定,重组质粒均在1 200 bp左右出现酶切条带,符合设计要求。RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,5637细胞经小RNA干扰后Bmi-1的mRNA和蛋白质表达水平明显降低,P<0.05。与阴性对照组和未转染组相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞增殖明显受到抑制,P<0.05。转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率分别为19.95%和27.27%,与未转染组7.23%和阴性对照组6.78%相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率明显增加,P<0.05。结论:减少膀胱癌5637细胞Bmi-1基因的表达可抑制5637细胞增殖并促进细胞凋亡。
- 李成文孙光畅继武朱鸣阳
- 关键词：膀胱肿瘤RNA干扰
- Bmi-1 shRNA对膀胱癌5637细胞的侵袭和转移抑制及其机制被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨特异性抑制Bmi-1基因表达对膀胱癌5637细胞侵袭和转移的影响。方法:将Bmi-1短发夹RNA(shRNA)真核表达载体、脂质体转染膀胱癌5637细胞。Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观察Bmi-1 shRNA对膀胱癌5637细胞侵袭和转移的影响。RT-PCR方法检测Bmi-1 shRNA对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA表达的影响。蛋白质印迹法检测Bmi-1 shRNA对E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)表达的影响。结果:Transwell侵袭实验结果显示,实验组细胞的穿膜细胞数为78.0±5.8,空质粒组为158.0±6.7,未转染组为153.0±4.6。细胞划痕实验结果显示,实验组细胞迁移能力明显降低,P<0.05。RT-PCR结果显示,与不加转化生长因子-β(TGF-β1)组相比,TGF-β1作用后,未转染组和空质粒组中MMP-2表达明显升高,P<0.05。蛋白质印迹结果显示,与不加TGF-β1组相比,TGF-β1作用后,未转染组和空质粒组中E-cadherin表达明显降低,α-SMA表达明显升高,P<0.05。结论:Bmi-1 shRNA可以抑制膀胱癌5637细胞侵袭和转移,其机制是通过阻断TGF-β1促进肿瘤细胞侵袭和转移作用完成的。
- 李成文畅继武朱鸣阳石理华王伟李辉
- 关键词：原癌基因蛋白质类膀胱肿瘤肿瘤侵润
