“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A11)
- 作品数：38 被引量：184H指数：8
- 相关作者：岳华汤承杨发龙李明义张兆敏更多>>
- 相关机构：西南民族大学中国动物卫生与流行病学中心青岛农业大学更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国家科技基础条件平台建设计划引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 应用SMART cDNA合成技术富集鸡脾脏微量RNA
- 2009年
- 以鸡脾脏中提取的20ng微量RNA为起始样本,应用SMART cDNA合成技术合成cDNA第一链及扩增第二链,并在原有基础上做了适当的优化和改进。同时与传统cDNA合成方法进行了比较。最终,从20ng总RNA中成功扩增出双链cDNA6.03μg,而采用传统方法只合成出0.03μg cDNA,且前者cDNA的质量和纯度明显高于后者。结果表明,通过SMART cDNA合成技术,可使鸡脾脏微量RNA得到有效地富集。
- 兰道亮岳华汤承
- 关键词：SMART脾脏
- 乳酸乳球菌抗氧化的研究进展被引量：4
- 2009年
- 乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)主要是通过发酵产能的,但是有研究发现,在添加氯化高铁血红素后乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)能形成一条呼吸链,在乳酸乳球菌(L.lactis)IL1403中发现了能够编码呼吸链蛋白的基因,同样的现象在粪链球菌中(Strepto coccus feacalis)也有发现。当氧出现在电子传递链中,质子的排出和质子运动势(PMF)的产生都会加倍。相比较其他的兼性或者专性厌氧菌,乳酸乳球菌(L.lactis)的呼吸作用可以促进代谢能量的产生,由于这种呼吸作用,乳酸乳球菌(L.lactis)有更好的生长得率和显著的存活率,这表明在发酵条件下产生的代谢能量不足,从而会限制乳酸乳球菌(L.lactis)的生长。氧在呼吸链中扮演了重要的有益角色,而不是起毒害作用。
- 付良刘飞霍贵成
- 关键词：乳酸乳球菌血红素存活率
- 鸭瘟强毒株和疫苗株对雏鸭IFN-γ基因表达的影响被引量：1
- 2011年
- 本试验旨在探讨不同毒力的鸭瘟病毒(DPV)感染对雏鸭INF-γmRNA表达水平的影响,为DPV的感染与免疫机制提供理论依据。应用实时荧光定量PCR技术,对接种了鸭瘟强毒株和疫苗株的雏鸭肝脏及外周血淋巴细胞(PBL)中IFN-γmRNA的表达水平及鸭瘟病毒(DPV)的荷载量进行动态定量监测。结果表明:①感染鸭瘟强毒后,IFN-γmRNA在肝脏中的表达没有明显规律,PBL中IFN-γmRNA表达水平很高,在此期间(1～12h),病毒DNA量很少。IFN-γmRNA表达量在6h后大幅下降,直到144h都非常低,而病毒的载量逐渐增大,至144h时达到峰值。②接种弱毒疫苗后,肝脏中IFN-γmRNA表达水平较高且稳定,至12h达到顶峰,约比对照高出8倍。PBL中IFN-γmRNA表达量较低且不稳定。弱毒DNA荷载量稳定上升,但载量约比强毒低两个数量级。病毒DNA在PBL检测不到。IFN-γ在抵抗鸭瘟强毒中发挥了重要作用;IFN-γ在肝脏中高水平的表达可能是鸭瘟疫苗的免疫机制之一。
- 谢秀兰杨发龙李阳友马小明岳华
- 关键词：IFN-Γ鸭瘟病毒强毒弱毒
- 三重PCR检测鱼类致病性嗜水气单胞菌被引量：36
- 2008年
- 【目的】建立一种能够快速准确地检测致病性嗜水气单胞菌的PCR方法。【方法】根据嗜水气单胞菌的16S rRNA、气溶素基因(aer)和丝氨酸蛋白酶基因(ahp)的保守序列设计了3对引物,然后进行了PCR反应条件的优化、特异性和敏感性的检测并与普通的细菌分离鉴定进行了临床样本和人工攻毒样本检出率的比较。【结果】该方法特异性好,只对致病性嗜水气单胞菌呈阳性扩增;敏感性高,最低可检测100fg的细菌DNA模版。对临床疑似黄鳝(Monopterus albus)样本的检出率为81.8%,高于细菌分离的40.9%;对人工攻毒鲫鱼(Carassius auratus)样本的检出率为87.5%,高于细菌分离的67.5%。【结论】本方法的成功建立,实现在同一反应管中同时对16SrRNA、aer和ahp的检测,避免了只针对aer或ahp单个毒力基因的PCR检测方法可能存在的漏检和误检,为致病性嗜水气单胞菌的诊断、大规模检疫、流行病学调查等提供了一种快速、准确而有效的检测方法。
- 王远微汤承于学辉王英岳华
- 关键词：嗜水气单胞菌AERAHPRRNA三重PCR
- 西南地区鸭疫里默氏菌血清型调查和三价灭活油乳剂疫苗的研制被引量：2
- 2010年
- 本文对2006～2009年从四川、重庆、云南等主要养鸭区分离鉴定的261株鸭疫里默氏菌(RA)的血清型进行鉴定,结果显示血清Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型RA占总分离株的68.20%。筛选出免疫原性好的Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型RA分离株各1株,制备三价灭活油乳剂疫苗,安全性和效力检验结果显示该三价苗安全,接种后无不良反应,3日龄雏鸭首免后14～31d对Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型的攻毒保护率均在83.33%以上。
- 田令岳华汤承
- 关键词：鸭疫里默氏菌血清型
- H1亚型猪流感病毒的分离鉴定
- 2009年
- 从山东、浙江、湖南、广西等地区各猪场采集30份疑似猪流感病猪的病料,通过鸡胚培养、血凝及血凝抑制试验、电镜观察、RT-PCR和测序分析进行了分离鉴定。结果从山东和湖南两地分离到4株有血凝活性的病毒,其中山东的2株病毒与新城疫病毒阳性血清的血凝抑制试验为阳性,通过电镜观察湖南的2株病毒具有猪流感病毒的特征,且与抗H1亚型猪流感病毒阳性血清的血凝抑制试验为阳性;根据H1亚型猪流感病毒HA基因设计引物,利用RT-PCR扩增出543bp片段,经序列分析证实该病毒为H1亚型猪流感病毒。
- 吕翠马小明尹燕博单虎
- 关键词：猪流感病毒血凝及血凝抑制试验电镜观察反转录-聚合酶链式反应
- 鸭瘟病毒疫苗株与强毒株诱导雏鸭IFN-α mRNA在肝脏中表达的动态定量研究被引量：3
- 2008年
- 本研究旨在探讨不同毒力的鸭瘟病毒(DPV)感染对机体IFN-αmRNA表达水平的影响,为DPV的感染与免疫机制提供理论依据。采用Real-time PCR对DPV弱毒株及强毒株接种雏鸭肝脏中的IFN-α mRNA表达水平及病毒荷载量进行动态定量检测,结果显示,弱毒株能引起IFN-αmRNA在肝脏中快速、持续高水平表达;与空白对照相比,在接种后3h上升4倍,9h达到峰值(18.5倍),12h～144h保持在7.8～12.6倍之间,显著抑制了弱毒株的增殖,病毒荷载量较低,表现出感染的自限性;而强毒株只能引起IFN-α mRNA在肝脏中短时间、低水平表达,在感染后72h才达到峰值,为空白对照的4.1倍,持续至132h,以后迅速下降,至144h(濒死时)仅为2.0倍,致使强毒株在肝脏中快速增殖,病毒荷载量与鸭瘟的发病过程密切相关。这些结果提示鸭瘟弱毒株能诱导肝细胞高水平表达IFN-αmRNA,有助于机体建立有效的免疫保护,而强毒株可能通过某种机制抑制IFN-α的表达,利于其建立感染。本研究结果为进一步阐明鸭瘟病毒感染与免疫的分子机制提供了有价值的实验数据。
- 杨发龙谢秀兰汤承景波岳华
- 关键词：鸭瘟病毒Α干扰素MRNA
- RT-PCR技术检测猪流感病毒被引量：4
- 2008年
- 根据猪流感病毒(SIV)的M基因的序列,设计合成了1对引物,建立了检测猪流感的RT-PCR方法。应用该方法对H1、H3、H9亚型的猪流感病毒进行基因扩增,均获得了分子量为460bp的特异性目的片段,而对PRRSV、PCV2、PRV、CSFV进行同条件检测,结果均为阴性;SIV扩增产物测序结果与SIV其他毒株序列同源性达99%-100%。敏感性试验表明,该方法可检测到103 EID50的SIV;可直接从猪流感病毒感染小鼠的组织样品中检测到病毒。
- 吕翠马小明尹燕博温建新单虎
- 关键词：猪流感病毒RT-PCR
- 猪流感病毒研究进展被引量：7
- 2008年
- 猪流感是由猪流感病毒引起的一种呼吸道传染病。此病在世界各地都有发生,危害严重,经济损失巨大,并对人类的健康构成威胁。猪流感病毒属于正黏病毒科A型流感病毒属,病毒粒子呈多形态。该病毒对热、消毒剂敏感,对干燥和低温的抵抗力强。其分子特性为多节段的RNA病毒,由8个片段组成,分别编码10种蛋白质。猪流感病毒能够在多种动物的细胞和鸡胚增殖。病毒具有血凝活性,但不同毒株的抗原性无明显的区分。由于病毒受到抗体的压力很大,因此病毒的变异频繁,其机理涉及分子水平的抗原漂移和抗原转变。文章对病毒的理化性质、生物学特性、分子特性、病毒的蛋白和基因变异等方面的研究情况进行了综述。
- 吕翠马小明尹燕博单虎
- 关键词：猪流感病毒生物学特性病毒蛋白基因重组
- 免疫鸡群新城疫强毒感染及其与HI抗体的相关性研究被引量：6
- 2009年
- 为调查新城疫强毒(vNDV)在免疫鸡群中的感染情况及其与抗ND抗体效价的相关性,用自行建立的检测vNDV的荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)对采自川、渝两地36个免疫鸡群的360份肛门棉拭子进行检测,同时采血测定其血凝抑制抗体效价。结果共检出5个vNDV阳性鸡群,每个阳性鸡群检出1例阳性样本,经病毒分离鉴定证实为NDV;36个受检鸡群HI抗体平均效价在4.5～10.1,标准偏差(SD)在0.70～3.19,变异系数在9.5%～44.3%。当SD大于2.0时,vNDV感染鸡群阳性率为50%(5/10),当CV大于32%时,vNDV感染鸡群阳性率为62.5%(5/8);vNDV感染个体HI抗体效价分别为210、29、28、26、23;阳性样本RT-PCR产物经测序分析证实为vNDVF基因序列,发育进化分析显示,2株vNDV属基因Ⅶ型,3株属基因Ⅸ型。研究结果表明,RRT-PCR适合vNDV感染及传播的监测和分子流行病学调查;免疫鸡群是否感染vNDV可能与个体HI抗体水平高低无关,而与群体HI抗体离散度有关,SD和CV值有助于判定鸡群感染vNDV的风险。
- 汤承岳华刘小银杨泽林张兆敏张斌俞宁
- 关键词：新城疫病毒强毒分子流行病学血凝抑制抗体
