“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A05)
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
- 相关作者：陈化兰姜永萍王国俊李雁冰熊杰更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所新疆农业大学更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达H7亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒的构建及其免疫效力评估
- 本研究将我国H7亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)的HA基因克隆到质粒pSY538上,把含有禽痘病毒启动子P11的LacZ基因亚克隆到质粒pSY538-HA7的SmaⅠ位点,然后切下...
- 李俊辉王艳丽姜永萍左青山冉多良陈化兰
- 关键词：禽流感H7亚型HA基因重组禽痘病毒
- 文献传递
- Clade 2.2 H5N1亚型禽流感重组灭活疫苗株的构建及其对小鼠免疫效力的评价被引量：1
- 2010年
- 为研制安全、有效的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)重组灭活疫苗,本研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV为内部基因供体,以Clade2.2H5N1亚型AIV A/Bar-headed goose/Qinghai/3/2005(BHGQH/05)为表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因供体,通过反向遗传操作,在符合人类疫苗生产标准的Vero细胞中救获低致病性的疫苗毒株,将制备的灭活全病毒疫苗单次和加强免疫BALB/c小鼠,检测疫苗的免疫保护效果。实验结果表明,单次和加强免疫组小鼠均能对同源和异源病毒的攻击提供100%完全保护;加强免疫能够显著提高HI和NT抗体的水平,用BHGQH/05做抗原检测加强免疫不加佐剂组的HI和NT抗体滴度分别高达1173.3和1280。本研究为下一步在灵长类动物模型上的免疫评价以及进一步的临床试验奠定了坚实的基础。
- 裴磊王国俊熊杰李雁冰姜永萍陈化兰
- 关键词：H5N1禽流感反向遗传操作BALB/C小鼠
- H5亚型禽流感病毒A/Duck/Anhui/1/2006(Clade 2.3)密码子优化HA基因DNA疫苗的免疫保护效力研究被引量：9
- 2010年
- 为了进一步评价基于HA基因的DNA疫苗的开发应用前景,本研究将表达H5亚型禽流感水禽群代表株A/Duck/Anhui/1/2006(H5N1)[DKAH/1/06(H5N1)]HA基因的DNA疫苗pCAGGoAHHA的免疫保护效力进行了评估,以5μg、10μg、20μg、50μg和100μg剂量免疫3周龄SPF鸡,首次免疫后3周再加强免疫一次,加强免疫后2周用106EID50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Duck/Fujian/31/2007(H5N1)[DKFJ/31/07(H5N1)]鼻腔途径进行攻毒,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3d、5d、7d天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测攻毒鸡排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体、NT抗体的动态变化。结果,20μg、50μg、100μg组的pCAGGoAHHA均可对免疫鸡产生100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而5μg和10μg剂量组则可对免疫鸡分别形成25%和75%的保护。结果表明,H5亚型禽流感水禽群DNA疫苗质粒pCAGGoAHHA具有良好的免疫保护性,有望成为预防H5亚型HPAIV的技术储备候选疫苗。
- 王国俊熊杰李俊平曾显营田国彬李雁冰施建忠姜永萍陈化兰
- 关键词：禽流感H5亚型DNA疫苗保护效力
- 以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒转移载体的构建及鉴定被引量：7
- 2009年
- 为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AflⅡ两个酶切位点,用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-gfp-gpt-HA9,将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、westernblot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。
- 王艳丽李俊辉姜永萍夏俊裴磊冉多良陈化兰
- 关键词：重组禽痘病毒绿色荧光蛋白HA基因
- 以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒通用转移载体的构建及鉴定
- 禽痘病毒作为活载体已经得到广泛的应用,转移栽体的构建是重组禽痘病毒构建的重要环节。本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt两个报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启...
- 王艳丽李俊辉姜永萍夏俊裴磊冉多良陈化兰
- 关键词：重组禽痘病毒HA基因
- 文献传递
- A型流感病毒核蛋白结构和功能的研究进展被引量：3
- 2009年
- A型流感病毒为重要的传染性病原。流感病毒核蛋白是病毒转录装置中的结构成分,在病毒生活周期中执行多种重要功能,文章简要综述了核蛋白在流感病毒结构和功能方面的研究进展,以便为促进疫苗的设计和抗病毒治疗药物的研制提供借鉴。
- 杜金玲刘春国刘明李洪涛张新涛石薇琳
- 关键词：流感病毒核蛋白
- 抗H5N1亚型高致病性禽流感猴源噬菌体scFv的构建和表达
- 2010年
- 为探索治疗禽流感的方法,本实验从免疫H5N1亚型禽流感疫苗的猕猴淋巴细胞中提取总mRNA并扩增重链和轻链可变区(VH、Vλ和Vκ),用重叠延伸PCR方法构建VH-Linker-Vλ和VH-Linker-Vκ形式的单链抗体(scFv),采用噬菌体展示技术构建了噬菌体抗体库,从2.2×106的噬菌体库中淘选得到具有较高亲和力的H6株scFv,并通过ELISA、SDS-PAGE、western blot、间接免疫荧光(IFA)和竞争抑制ELISA对其进行鉴定,证实所获得的scFv为32ku,并且能与病毒发生特异性结合。IgBlast序列分析发现,所得到的scFv基因Vλ与人免疫球蛋白胚系基因同源性达91.5%,而VH同源性为75%。本研究所得到的猴源抗体可变区为人源化抗体的构建以及禽流感的治疗奠定了基础。
- 陈樱邓国华陈化兰
- 关键词：重叠延伸PCR噬菌体抗体库间接免疫荧光
