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一种快速筛选人目的基因反义片段的简单有效方法: 2008年; 本文选取人elp3基因三个不同的区段(基因全序列、5′端非HAT区、3′端HAT区)构建了反义质粒pRS313a1644、pRS314a1107、pRS314a450,通过与人elp3基因共转化酵母后的功能互补和基因表达检测,筛选出可显著抑制人Elp3表达的5′端非HAT区1107bp有效反义片段。该片段在随后的HeLa细胞转染实验中被检测出可显著抑制Elp3的mRNA水平,表明利用该方法可避开繁琐的细胞培养和转染步骤,快速筛选到人类兴趣基因的有效反义片段。; 李芬马继先白雪陈百宝; 关键词：ELP3

延蛋白复合体的生物学功能: 2007年; 延蛋白(elongator)是具有组蛋白乙酰转移酶活性的六亚基复合体,目前已在几种真核生物中发现其同源物,延蛋白在真核生物中高度保守。已有的研究结果表明,延蛋白与基因转录延伸、胞外分泌以及tRNA修饰等生物学功能相关。新近发现延蛋白还有一个Fe4S4活性中心,预示延蛋白还有一些其他的未知功能。; 刘洪梅李芬张卫林; 关键词：生物学功能

多克隆抗体兔免疫血清取血新方法被引量：7: 2008年; 兔耳动脉采血获得多克隆抗体免疫血清是一种较实用的方法。利用这种改进的取血方法,在25℃左右,可从免疫后的兔一次性采得100ml左右的血量。该法对动物损伤小,操作简便,可在短期内连续采到较大量的高质量兔血,且血清质量较好,采血后兔仍正常存活。因而非常适合于免疫血清取血,也可用于其它的兔采血实验。; 田树娟李芬武玉光; 关键词：多克隆抗体采血

抗人Elp3的N末端抗体制备及在染色质免疫沉淀中的应用被引量：3: 2009年; 人Elp3(human elongator protein 3,hElp3)具有组蛋白乙酰转移酶活性,是与延伸中的RNA聚合酶Ⅱ结合的elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白的乙酰化修饰与基因的转录延伸.Elp3及其复合物功能异常与人类多种疾病相关.为运用染色质免疫沉淀等手段深入研究Elp3功能,PCR法克隆pYES2-hElp3质粒中编码hElp3的N端亲水区段(1～69氨基酸残基),构建原核表达载体pMXB10-hElp3-210,经IPTG诱导和几丁质柱纯化后,免疫兔制备多克隆抗体.ELISA检测显示,该抗体有较高的效价(不低于1∶2 500).免疫印迹实验结果表明,该抗体可与纯化的及HeLa细胞中的hElp3蛋白特异性结合.运用该抗体对转入elp3Δ菌株的人Elp3的染色质免疫沉淀实验结果表明,人Elp3可参与酵母SSA3基因的转录调控,这可能是人Elp3能够部分补偿酵母SSA3基因延迟表达缺陷的原因.; 李芬田树娟许森武玉光孔艳张帅王艳芳; 关键词：原核表达多克隆抗体

双元载体提供组蛋白H3/H4拷贝1的elp3Δ菌株的构建被引量：1: 2008年; 人Elongator是在转录中有功能的组蛋白乙酰转移酶(HAT)复合物,为研究其催化亚基Elp3功能,构建了酵母组蛋白H3/H4拷贝1的双元表达载体pRS316CFT,通过PCR介导的基因敲除,获酵母基因组H3/H4缺失由双元载体提供单拷贝H3/H4的elp3Δ菌株.敏感性实验表明该载体提供H3/H4可维持酵母正常生长.本工作为构建H3/H4乙酰化位点突变菌株,用功能互补在体内研究人Elp3 HAT活性功能奠定了基础.; 李芬田树娟; 关键词：双元表达载体基因敲除

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河南省教育厅自然科学基金(2007180030)