国家自然科学基金(30670879)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- GSNO在糖尿病和非糖尿病小鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用
- 2011年
- 目的:探讨NO供体S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)在糖尿病(DM)小鼠和非DM小鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤中的作用。方法:120只雄性昆明小鼠随机分为6组,每组20只。即假手术组(Sham)组、DM+sham组、MI/R+媒介物(Vehicle)组、DM+MI/R+Vehicle组、MI/R+GSNO组及DM+MI/R+GSNO组,使小鼠心肌缺血30 min、再灌前10 min,腹腔注入100μmol/L的GSNO溶液或等体积的生理盐水(NS)。再灌3 h后,用ELISA法检测NOx、硝基酪氨酸(N-Tyr)的含量及caspase-3的活性。使用试剂盒检测超氧阴离子(O2-)的含量。用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡,再灌注24 h,用TTC法检测心肌梗死的面积。结果:①与sham组的O2-含量[(2.02±0.21)RLU/(mg.s)]相比,DM+sham组O2-的含量[(2.76±0.21)RLU/(mg.s)]明显增加(P<0.05)。②与MI/R+媒介物组相比,MI/R+GSNO组的梗死面积明显减少[(50.4±3.32)%vs.(37.0±4.37)%,P<0.05]、心肌细胞凋亡明显减少[(60.0±5.47)%vs.(44.2±2.28)%,P<0.05],caspase-3的活性明显降低[(47.6±4.47)nmol/(h.mg蛋白)]vs.(34.6±1.80)nmol/(h.mg蛋白),P<0.05],N-Tyr的含量明显减少[(0.91±0.16)μg/mg蛋白]vs.(0.54±0.083)μg/mg蛋白,P<0.05],NOx的含量明显增加[(1.14±0.063)μmol/g蛋白vs.(1.84±0.045)μmol/g蛋白,P<0.01]。③与DM+MI/R+媒介物组相比,DM+MI/R+GSNO组的梗死面积显著增加[(64.2±2.35)%vs.(85.6±2.80)%,P<0.01],心肌细胞的凋亡显著增加[(78.0±2.47)%vs.(87.6±1.93)%,P<0.05],caspase-3的活性显著增加[(62.17±3.24)nmol/(h.mg蛋白)vs.(77±2.09)nmol/(h.mg蛋白),P<0.01],N-Tyr的含量明显增加[(1.47±0.16)μg/mg蛋白vs.(2.06±0.18)μg/mg蛋白,P<0.05],NOx的含量显著增加[(1.51±0.11)μmol/g蛋白vs.(2.24±0.18)μmol/g蛋白,P<0.05]。结论:GSNO可以减轻非DM小鼠MI/R损伤,但可加重DM小鼠MI/R损伤,其机制可能与DM心肌组织中氧化应激水平增加有关。
- 夏陈海贺媛王汝涛靳温刘毅陶凌王海昌
- 关键词：糖尿病S-亚硝基谷胱甘肽小鼠
- 无标签人源性脂联素球状结构的表达、纯化与活性检测
- 2013年
- 目的:利用基因工程方法构建无标签人源性脂联素球状结构(gAd)基因的原核表达载体,并对重组蛋白进行诱导表达、纯化及鉴定。方法:从正常人脂肪组织里提取总RNA,反转录合成cDNA,经PCR扩增、酶切后连入pET-22b(+)载体构建重组质粒pET-22b(+)-gAd,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经低温、低浓度IPTG诱导使其可溶性表达,采用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析三步分离纯化,得到不带任何标签的人源性gAd;运用SDS-PAGE、Western印迹、HPLC对重组蛋白进行鉴定,通过对AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平检测纯化蛋白的生物学活性。结果:构建了原核表达载体pET-22b(+)-gAd,实现了人源性gAd在原核细胞中的可溶性表达,纯化的蛋白经SDS-PAGE和Western印迹分析证实为gAd,HPLC分析蛋白纯度达到95%以上;通过对AMPK磷酸化水平的检测,证明纯化的gAd具有高生物学活性。结论:重组表达和纯化了无标签、高生物学活性的人源性脂联素球状结构,为其进一步的理论研究、生产开发奠定了基础。
- 张立剑孙璐李冬冬郭云萍王增禄刘毅张英起陶凌
- 关键词：表达纯化活性检测
- 胰岛素控制血糖减轻Ⅰ型糖尿病小鼠心肌缺血/再灌注损伤被引量：4
- 2011年
- 目的:研究Ⅰ型糖尿病(DM)小鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的变化,以及胰岛素(ISL)治疗控制血糖对Ⅰ型DM小鼠心肌I/R损伤的影响。方法:72只健康雄性昆明小鼠以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制备Ⅰ型DM模型,建模后用ISL治疗控制血糖2周。实验分为假手术(sham)组、I/R组、DM+I/R组、DM+ISL+I/R组,每组18只。采用结扎冠状动脉左前降支30 min制备心肌梗死(MI)模型,分别于再灌注后3 h,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用ELISA法检测caspase-3活性、硝基酪氨酸的含量。再灌注后24 h,用TTC染色法检测MI面积。结果:与I/R组相比,DM+I/R组MI面积增大、心肌细胞凋亡数量增加、caspase-3活性升高、硝基酪氨酸的含量增加(P<0.01)。与DM+I/R组相比,DM+ISL+I/R组心肌细胞凋亡数量减少(P<0.01),MI面积减少、caspase-3活性降低、硝基酪氨酸含量减少(P<0.05)。结论:Ⅰ型DM小鼠心肌I/R损伤增加,ISL治疗控制血糖可以减轻其心肌I/R损伤。
- 王汝涛王海昌廉坤夏陈海刘毅马新亮陶凌
- 关键词：胰岛素糖尿病小鼠
