中国博士后科学基金(57545)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：内蒙古农业大学青海大学锡林郭勒职业学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 几种乳酸菌S-层蛋白的普查以及slp基因的克隆与序列分析被引量：5
- 2010年
- 从内蒙古传统发酵乳制品中分离的几种乳酸菌,包括干酪乳杆菌、乳酸乳球菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧乳杆菌和嗜酸乳杆菌标准株(L.acidophilus ATCC4356)等为实验材料,应用SDS-PAGE方法和PCR方法分别进行S-层蛋白(S-layers pro-tein,SLP)的普查和slp基因的检测。结果表明:在各种乳酸菌中,经SDS-PAGE电泳方法检测,只有植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和其标准菌株的样品中出现膜外蛋白的可疑条带,大小为44～66ku之间,与文献报道的slp基因表达产物大小范围是一致;经PCR方法检测,只有嗜酸乳杆菌和其标准菌株L.acidophilus ATCC4356中扩增出slp基因可疑条带,其大小约为1 300 bp。并对嗜酸乳杆菌slp基因进行克隆、基因序列测序和分析。
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- 关键词：嗜酸乳杆菌S-层蛋白克隆与序列分析
- 应用表达微小隐孢子虫P23的重组干酪乳杆菌建立微小隐孢子虫IFAT诊断方法
- 2010年
- 本试验旨在建立IFAT和间接ELISA方法作为微小隐孢子虫病诊断方法。应用DNA重组技术,构建原核表达载体pGEX-P23,经IPTG诱导表达出GST-P23融合蛋白,并进行纯化,将该重组融合蛋白作为包被抗原,建立ELISA诊断方法;同样构建重组载体pMG-P23,用电转化方法将其转入干酪乳杆菌中,称为重组活干酪乳杆菌(含pMG-P23),以此为已知抗原,建立IFAT诊断方法。应用ELISA和IFAT方法检测来自内蒙古地区的508份牛血清、187份绵羊血清和197份山羊血清:其中ELISA方法在各种动物血清中阳性率依次分别为0.59%、5.88%和4.57%,而IFAT方法则为0.19%、5.88%和4.57%。2种检测方法阳性符合率在牛血清样品中为33.33%,在绵羊和山羊中则均为100%。试验结果表明,重组抗原P23具有良好的反应原性,2种诊断方法的结果基本吻合,显示出良好的一致性和敏感性,可在微小隐孢子虫病的诊断实践中推广应用。
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- 关键词：微小隐孢子虫ELISAIFAT
- 牛微小隐孢子虫子孢子表面抗原p23基因的克隆及原核表达
- 2012年
- 从已构建的牛微小隐孢子虫子孢子cDNA文库中,用PCR方法扩增出子孢子表面抗原p23基因,将其插入到编码谷胱肽转移酶(GST)的质粒(pGEX-4T-2)多克隆位点,构建原核表达载体pGEX-p23。重组质粒经EcoRI/Sal I酶切、测序鉴定后转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达蛋白。结果成功构建了pGEX-p23原核表达载体,经IPTG诱导,转化的大肠杆菌表达出分子质量为47kDa的GST融合蛋白,且该蛋白能与抗p23抗体发生特异性结合反应。本研究为进一步研究p23的生物学功能和临床应用奠定了基础。
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- 关键词：原核表达
- 几种食用乳酸菌内源性质粒DNA的普查、消除及其稳定性试验被引量：2
- 2008年
- 以内蒙古和青海等地区牛乳中分离的11种野生乳酸菌为材料,分别应用核酸电泳技术、药物敏感试验和SDS-变温质粒DNA消除等方法,进行了内源性质粒DNA的普查、消除及其稳定性试验。结果表明:11种野生乳酸菌均被检测出不同大小的质粒DNA的可疑条带,可分为大于23 kb和小于23 kb两个型;经SDS-变温方法消除质粒DNA后,除3种乳酸菌不宜生长而被淘汰以外,在剩余8种乳酸菌中,小于23 kb型的条带全部被消除,个别大于23 kb型的可疑条带也能被消除,与药物敏感补充试验所得到的结果基本相符;已被消除质粒DNA的8种乳酸菌经过转接培养20代,显示出良好的遗传稳定性。本研究为筛选和建立新型基因工程受体菌奠定了基础。
- 格日勒图张延超王艳霞张和平
- 关键词：乳酸菌稳定性
