国家自然科学基金(39970341)
- 作品数：16 被引量：138H指数：7
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- 透析相关性淀粉样变关节滑膜组织中核转录因子的活化被引量：5
- 2002年
- 侯凡凡张桂林周展眉王国保
- 关键词：透析相关性淀粉样变关节滑膜组织核转录因子
- 晚期糖基化终产物刺激内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1信号传导途径被引量：32
- 2003年
- 目的 研究晚期糖基化终产物 (AGE)修饰蛋白对人内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)的影响及其作用的信号传导途径。方法 将培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)和人内皮细胞株ECV30 4与不同浓度AGE修饰的人血清白蛋白 (AGE HSA)或牛血清白蛋白 (AGE BSA)共同培养。用Western印迹及酶联免疫吸附法 (ELISA)检测MCP 1蛋白合成及分泌 ,用逆转录PCR(RT PCR)法检测MCP 1mRNA表达 ,用流式细胞术观察细胞内氧化应激 ,用免疫沉淀 激酶活性测定法分析细胞p38丝裂素活化蛋白激酶 (p38 MAPK)活性。结果 AGE HSA和AGE BSA以时间和剂量依赖的方式上调内皮细胞MCP 1mRNA和蛋白的表达并诱导细胞氧化应激和活化p38 MAPK。 5 0 μg/mlAGE HSA与HUVEC共同培养 12h ,使细胞上清中的MCP 1浓度由 4 8 3pg/μg± 0 6pg/μg蛋白上升至 14 8 1pg/μg± 12 6pg/μg蛋白 (P <0 0 1)。5 0 μg/mlAGE HSA与HUVEC共同孵育 30min ,使p38 MAPK的磷酸化活性升高 91%± 14 % (P <0 0 1)。抗氧化剂或p38通路特异阻断剂SB 2 0 35 80能够阻断AGE修饰蛋白诱导的MCP 1表达。结论 AGE修饰蛋白能够通过p38 MAPK信号传导途径上调内皮细胞分泌MCP 1,这一作用是经氧化应激机制介导。
- 郭志坚侯凡凡梁敏王力张训刘志强
- 关键词：糖基化终产物内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1信号传导途径
- 晚期糖基化终产物修饰的β_2-微球蛋白刺激人关节滑膜细胞分泌促炎症细胞因子被引量：1
- 2001年
- 目的 旨在探讨晚期糖基化终产物 (AGEs)修饰的 β2 微球蛋白 (AGE β2 m)对人关节滑膜细胞的病理生物学作用。方法 分离、培养正常人关节B型滑膜细胞 ,与AGE β2 m共同孵育 ,用ELISA法检测培养上清液中肿瘤坏死因子 α(TNF α)和白细胞介素 1β (IL 1β)水平。 结果 AGE β2 m诱导滑膜细胞分泌TNF α和IL 1β ,诱导作用具有时间和剂量依赖规律。抗AGE受体抗体预处理滑膜细胞能明显抑制AGE β2 m引起的TNF α和IL 1β分泌。结论 AGE β2 m通过AGE受体介导的作用 ,刺激人类关节B型滑膜细胞产生TNF α和IL 1β ,这种生物学效应可能参与了透析相关性淀粉样变 (DRA)时关节局部的炎症反应和组织损伤。
- 郭君其侯凡凡张训
- 关键词：晚期糖基化终产物关节滑膜白细胞介素1透析相关性淀粉样变DRA
- 晚期糖基化终产物通过p38信号通路抑制内皮细胞合成一氧化氮的研究被引量：24
- 2002年
- 目的 研究晚期糖基化终产物 (AGE)修饰蛋白对内皮细胞生成一氧化氮 (NO)的作用及p38丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)信号传导通路在此病理过程中的作用。方法 用来自培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)和人内皮细胞株ECV30 4。将内皮细胞与不同浓度的AGE修饰人血清白蛋白(AGE HSA)、AGE修饰牛血清白蛋白 (AGE BSA)在体外共同培养。用Griess法检测培养上清的NO水平 ;用免疫沉淀 激酶活性测定法测定细胞p38 MAPK活性。结果 AGE HSA和AGE BSA以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞生成NO ,同时导致p38信号通路激活 ;未经修饰的HSA和BSA无此作用 ,AGE HSA和AGE BSA的抑制作用亦无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;p38通路特异阻断剂SB 2 0 35 80完全阻断AGE修饰蛋白对内皮细胞生成NO的抑制效应 ,提示AGE修饰蛋白对内皮细胞的这一生物学作用是由p38通路介导的。AGE修饰蛋白激活HUVECp38通路。在AGE修饰蛋白作用 10min时 ,p38激酶磷酸化活性明显升高 ,在 30min时到达高峰 ,在 12 0min时回到基础水平。p38磷酸化激酶的磷酸化作用随着AGE修饰蛋白浓度的增高而加强。以ECV30 4细胞株为靶细胞时 ,AGE修饰蛋白对p38通路的活化作用与对HUVEC相同。AGE BSA对内皮细胞p38通路的活化作用与AGE HSA相同。结论本研究证实 ,AGE修饰蛋白能?
- 郭志坚侯凡凡张训刘志强王力
- 关键词：信号通路晚期糖基化终产物一氧化氮丝裂素激活蛋白激酶
- 二羰基化合物激活人血管内皮细胞核因子κB被引量：7
- 2000年
- 目的观察一羰基化合物对人血管内皮细胞（ＶＥＣ）核因子（ＮＦ）。κＢ的激活作用，以探讨该类物质病理生物学作用的机制。方法从人脐静脉分离ＶＥＣ并与不同浓度的二羰基化合物共同培养。以氧化敏感的荧光染料２，７－二氢二氯荧光素（ＤＣＦＨ）染色，用流式细胞仪测定细胞内氧化水平；用间接免疫荧光法观察ＮＦ－κＢ ｐ６５在细胞内的分布，判断ＮＦ－κＢ的活化、结果 二羰基化合物能够导致细胞内氧化水平升高，并激活人 ＶＥＣ ＮＦ－κＢ；抗氧化剂（Ｎ－乙酸半胱氨酸和丙丁酚）以及羰基化合物清除剂（氨基胍）能够抑制二羰基化合物导致的细胞氧化应激，同时抑制ＮＦ－κＢ的活化。结论 二羰基化合物通过诱导细胞氧化应激，激活人ＶＥＣ ＮＦ－κＢ，这一作用可能参与了慢性肾功能衰竭和糖尿病时血管病变的发生。
- 梁敏侯凡凡张训
- 关键词：核因子KB二羰基化合物VEC
- 人类关节滑膜细胞表达晚期糖基化终产物受体被引量：13
- 2000年
- 目的进一步探讨晚期糖基化终产物修饰的β２微球蛋白（ＡＧＥ－β２ｍ）对关节固有细胞的生物学作用，确定人类关节滑膜细胞是否表达对ＡＧＥ特异的受体。方法分离、培养人关节Ａ型和Ｂ型滑膜细胞，用免疫组织化学法及流式细胞仪法分别观察滑膜细胞表面ＡＧＥ受体１（ＡＧＥ－Ｒ１）、ＡＧＥ受体２（ＡＧＥ－Ｒ２）、ＡＧＥ受体３（ＡＧＥ－Ｒ３）及ＡＧＥ受体（ＲＡＧＥ）的表达，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测滑膜细胞内各种ＡＧＥ受体的ｍＲＮＡ水平。结果Ａ、Ｂ两型细胞均表达ＲＡＧＥ和ＡＧＥ－Ｒ３，两种受体均分布于细胞表面，ＲＴ－ＰＣＲ示滑膜Ａ、Ｂ两型细胞内存在ＲＡＧＥ和ＡＧＥ－Ｒ３ｍＲＮＡ。两型滑膜细胞均不表达ＡＧＥ－Ｒ１和ＡＧＥ－Ｒ２。结论人类关节滑膜Ａ、Ｂ两型细胞表达ＲＡＧＥ和ＡＧＥ－Ｒ３，提示这类关节固有细胞参与了ＡＧＥ的代谢，透析相关性淀粉样变时也可能成为ＡＧＥ病理生物效应的靶细胞。
- 候凡凡蒋建平张训
- 关键词：关节滑膜细胞晚期糖基化终产物受体DRA
- 晚期糖基化终产物修饰的β_2微球蛋白对人关节滑膜细胞的病理生物学作用被引量：6
- 2001年
- 目的 探讨晚期糖基化终产物（ＡＧＥ）修饰的β２微球蛋白（ＡＧＥ－β２ｍ）对人关节滑膜细胞的病理生物学作用。方法 分离、培养正常人关节Ｂ型滑膜细胞，与ＡＧＥ－β２ｍ共同孵育，用ＥＬＩＳＡ法检测培养上清中单核／巨噬细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）和ＲＡＮＴＥＳ水平，放射免疫法检测透明质酸（ＨＡ）、层黏蛋白和Ⅲ型前胶原水平，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析培养细胞 ＭＣＰ－１和 ＲＡＮＴＥＳ的 ｍＲＮＡ表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析培养上清中 ＨＡ的相对分子质量。结果 ＡＧＥ－β２ｍ以剂量依赖的方式刺激关节滑膜细胞分泌ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ，同时上调ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳｍＲＮＡ的表达。抗入ＡＧＥ受体（ＲＡＧＥ）ＩｇＧ和Ｂ型滑膜细胞预孵育能明显抑制ＡＧＥ－β２ｍ的上述作用。ＡＧＥ－β２ｍ增加滑膜细胞ＨＡ的分泌量，但在ＡＧＥ－β２ｍ刺激下生成的 ＨＡ的相对分子质量（３３ ０００）明显小于正常 ＨＡ（３７ ０００）。ＡＧＥ－β２ｍ对滑膜细胞层黏蛋白和Ⅲ型胶原分泌无明显影响。结论ＡＧＥ－β２ｍ通过ＲＡＧＥ介导的作用，刺激人类关节Ｂ型滑膜细胞产生ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ，井促进滑膜细胞分泌炎症性小分子ＨＡ。
- 侯凡凡郭君其张训刘志强
- 关键词：糖基化终产物Β2微球蛋白滑膜
- 终末糖基化产物对培养的人脐静脉内皮细胞粘附分子表达的影响被引量：9
- 2005年
- 目的:探讨终末糖基化产物在糖尿病动脉粥样硬化(AS)形成中的作用机理。方法:分离正常人脐静 脉内皮细胞(HUVECs),将终末糖基化终产物(AGE)修饰的人血清白蛋白(AGE-HSA)、人血清白蛋白(HSA)与HU VECs在体外共同培养,并用荧光单克隆抗体染色,流式细胞仪定量检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘 附分子-1(VCAM-1)的表达。结果:正常人HUVEC表达ICAM-1和VCAM-1。AGE-HSA能以时间和剂量依赖的 方式上调ICAM-1、VCAM-1的表达(P<0．05),而HSA对HUVECs上述粘附分子的表达均无影响。结论:AGE能上 调HUVECs粘附分子的表达,从而促进AS时单核／巨噬细胞的浸润。
- 刘宏侯凡凡梁敏
- 关键词：动脉硬化内皮细胞胞间粘附分子1
- 促炎症介质对B型滑膜细胞晚期糖基化终产物受体的调节作用
- 2002年
- 探讨促炎症介质对B型滑膜细胞晚期糖基化终产物 (AGE)受体的调节作用。通过体外实验 ,观察TNF α、IL 1β和AGE修饰的人血清白蛋白 (AGE HSA)对B型滑膜细胞AGE受体mRNA表达的影响 ,以及中和性抗TNF α和抗IL 1β抗体对AGE HSA调节作用的阻断能力。结果显示 ,滑膜B型细胞表达RAGE和AGE R3mRNA ;AGE HSA和TNF α能以时间和剂量依赖的方式下调B型滑膜细胞RAGEmRNA的表达 ,上调AGE R3mRNA的表达 ;IL 1β能以时间和剂量依赖的方式上调B型滑膜细胞AGE R3mRNA的表达 ,而对RAGEmRNA的表达无影响 ;AGE HSA对B型滑膜细胞AGE受体mRNA表达的调节作用可被抗TNF α抗体所阻断。提示促炎症介质对滑膜细胞不同的AGE受体具有不同的调节作用。
- 蒋建平侯凡凡张训
- 关键词：晚期糖基化终产物受体
- 晚期糖基化终产物修饰蛋白刺激人血管内皮细胞表达粘附分子的研究被引量：14
- 2001年
- 为探讨透析相关性淀粉样变 (DRA)时血管内皮细胞粘附分子表达上调的机制 ,采取分离正常人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,将晚期糖基化终产物 (AGE)修饰的人血清白蛋白 (AGE HSA)、人血清白蛋白 (HSA)与HUVEC在体外共同培养的方法 ,并用荧光单克隆抗体染色 ,流式细胞仪定量检测内皮细胞表面细胞间粘附分子 1(ICAM 1)、血管细胞间粘附分子 1(VCAM 1)、E 选择素 (E selectin)的表达。结果显示 ,正常人脐静脉内皮细胞表达ICAM 1和VCAM 1,但无E selectin的基础表达。AGE HSA能以时间和剂量依赖的方式上调血管内皮细胞粘附分子ICAM 1、VCAM 1、E selectin的表达 (P <0 .0 5 ) ,而HSA对血管内皮细胞上述粘附分子的表达均无影响。提示AGE能上调血管内皮细胞粘附分子的表达 ,从而促进DRA时单核 /巨噬细胞的浸润。
- 刘宏侯凡凡梁敏蒋建平张训
- 关键词：晚期糖基化终产物细胞粘附分子DRA
