海南省自然科学基金(807096)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 牙龈卟啉菌菌毛FimA基因高效植物表达载体的构建被引量：2
- 2010年
- 目的:构建果实特异启动子驱动的含牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA基因的高效植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物牙周炎疫苗打下基础。方法:以提取的番茄基因组DNA为模板扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11kb),同时合成通过接头连接的霍乱毒素B亚基和FimA(266～337)(约600bp),并通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(genesplicing by overlap extension)将两者拼接,拼接后的序列为EF。用EcoR I和Pst I分别双酶切EF序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重组质粒pCAMBIA1302-EF用电击法转化根癌农杆菌GV3103。结果:重组质粒经PCR和酶切鉴定证明已成功转化。结论:本研究成功构建了番茄果实特异性启动子驱动FimA基因,以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体。
- 戴海燕王华文少敏解娜邱瑾
- 关键词：牙龈卟啉菌
- 牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因果实特异表达载体的构建及意义
- 2011年
- 目的构建含牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体,并提高抗原基因的表达量和免疫原性,为其在番茄果实内表达和研制有效的转基因植物牙周炎疫苗奠定基础。方法通过PCR获得番茄果实特异表达启动子E8的核心序列片段(约1.11 kb),同时合成通过柔性接头连接的霍乱毒素B亚基(Cholera Tox-in B Subunit,CTB)和牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA(266-337)(约600 bp)序列的基因片段,利用重叠区扩增基因拼接法将两基因片段连接,得到重组片段E8-CTB-FimA(266-337),双酶切E8-CTB-FimA(266-337)片段和植物表达载体pBI121,酶切产物连接后,获得重组载体pBI E8-CTB-FimA(266-337),利用酶切方法和测序方法对pBIE8-CTB-FimA(266-337)进行鉴定。结果基因测序及酶切结果表明特异表达载体已成功构建。结论本研究成功构建了含牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体;该载体可用于转基因植物牙周炎疫苗的研制。
- 戴海燕王华文少敏解娜
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌
- 牙龈卟啉菌相关疫苗防治牙周炎的现状研究被引量：5
- 2011年
- 众所周知,牙周炎是发生在牙齿周围支持组织的细菌感染性疾病,以牙龈炎症和出血、牙周袋形成、牙槽骨吸收和牙松动、移位以致脱落为主要症状。牙周炎主要发生在成人,是导致成人牙齿丧失的主要原因,在世界范围内均有较高的发病率。不仅如此,牙周炎还与许多系统性疾病（如心血管疾病、中风、冠状动脉粥样疾病及糖尿病）相关。
- 戴海燕王华符起亚
- 关键词：疫苗牙龈卟啉菌牙周炎
- 牙龈卟啉菌菌毛基因在转基因番茄果实中的特异表达及小鼠免疫实验
- 2011年
- 将编码牙龈卟啉菌菌毛蛋白(Fimbrillin,FimA)(第266～337Aa)与霍乱毒素B亚基(CTB)基因用农杆菌侵染法转入番茄植株,并利用番茄果实特异启动子E8使其在果实中实现特异表达,然后用特异表达的转基因番茄果实对实验小鼠进行口服免疫实验,研究转基因番茄果实的免疫原性。实验结果表明:获得的11株转化植株中,共有9株重组了CTB-FimA基因的植株在番茄果实中实现了特异表达;口服转基因番茄果实的免疫小鼠的血清中检测到抗FimA抗体;获得了以CTB为佐剂的在番茄果实中特异表达牙龈卟啉菌菌毛基因的植物口服疫苗候选植株。
- 戴海燕王华文少敏解娜邓芳成
- 关键词：番茄牙周炎CTB
