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草菇cDNA削减文库的构建被引量：4: 2005年; 介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入构建全长cDNA削减文库的方法.分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取总RNA并采用PolyATtract mRNA Isolation System III试剂盒快速提取mRNA,由PowerScriptTM Reverse Transcriptase将诱导菌丝提取的mRNA进一步逆转录成cDNA第一链,用得到的cDNA第一链和非诱导菌丝提取的mRNA进行杂交,将未杂交上的cDNA第一链洗脱浓缩后,用SMARTTM cDNA Library Construction 试剂盒构建成草菇cDNA削减文库.经检测:原始文库滴度为2.5×105 pfu/mL,重组率为93%,插入cDNA大小在0.5～4.0 kb之间,文库扩增后,文库滴度为1.1×109 pfu/mL,并从中克隆到了若干植物纤维降解酶.结果表明其简化了实验步骤,而且更有利于富集所需全长基因,是构建cDNA文库的一种有效改进.; 李迅邵蔚蓝; 关键词：滴度重组率 PCR

系列木聚糖降解酶基因同向串连表达的研究被引量：1: 2006年; 采用分子克隆操作方法,通过设计多个SD序列的多克隆位点,首次成功构建了一个木聚糖降解酶系列基因同向串连表达载体,经筛选鉴定获得具有极耐热性的α-阿拉伯呋喃糖苷酶基因(XarB)、葡萄糖醛酸酶基因(aguA)和木聚糖酶基因(XynB)同向串连的pHsh/XarB-aguA-XynB一株克隆菌.酶学分析表明重组菌株具有较好的阿拉伯糖苷酶、木糖苷酶、葡萄糖醛酸酶和木聚糖酶活性.酶活单位分别为:阿拉伯糖苷酶11.8 U/mL,β-木糖苷酶6.87 U/mL,α-葡萄糖醛酸酶1.53 U/mL,木聚糖酶6.58 U/mL.; 刘思园邵蔚蓝裴建军吴华伟; 关键词：基因工程

担子菌草菇总RNA的快速抽提方法被引量：5: 2004年; 针对高等真菌草菇 (Volvariellavolvacea) ,提供一种改进的简易抽提总RNA的方法。纯化的RNA可直接作如下的各种应用 ,如RT PCR、polyA RNA的富集、差异显示、North ern杂交、引物延伸、cDNA合成、基因表达谱芯片和基因表达谱芯片分析。我们用此方法成功地从草菇中抽提到总RNA ,A2 60 /A2 80 为 1 7～ 2 0 ,A2 60 /A2 30 大于 2 0 ,数值显示RNA的纯度是足够高的 (RNA没有被蛋白或苯酚等污染 )。电泳图上 2 8S∶1 8S比例约为 2∶1 ,显示RNA没有被降解。; 李迅裴建军邵蔚蓝; 关键词：担子菌草菇总RNA

草菇胞外高丰度蛋白质的分离测序及cDNA片段克隆: 2005年; 经过柱层析,从以稻草粉为基质培养的草菇(Volvariella volvacea)摇瓶发酵液中纯化了HEP1(h ighexpressional protein 1)和HEP2(h igh expressional protein 2)两个在胞外高丰度存在的蛋白质.SDS-PAGE电泳和分子筛层析的结果表明HEP1和HEP2的相对分子质量分别是52.6×103和26.2×103,且都是单亚基.其中HEP1经过酶解印迹后对肽段N端前15个氨基酸进行测序.根据测序结果设计简并引物,PCR扩增到一条长约750 bp特异核酸条带.克隆测序后,该cDNA片段经GenBank多序列比对,未发现其属于某个特定的基因家族.; 罗楚平邵蔚蓝; 关键词：草菇分离纯化启动子

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国家自然科学基金(30370034)