国家科技支撑计划(2011-AA10A215)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李建华杨举曲晗李赫宫鹏涛更多>>
- 相关机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 斯氏艾美耳球虫兰州株Rhomboid基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2012年
- 目的克隆并原核表达斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai,E.stiedai)兰州株Rhomboid基因。方法通过分析基因保守区设计引物,采用RT-PCR方法与3′RACE技术相结合,扩增获得兔斯氏艾美耳球虫Rhomboid基因cDNA全序列,并对其进行序列分析;将获得的Rhomboid基因克隆至原核表达载体pET-28a中,转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果 Rhomboid基因开放阅读框全长774 bp,编码257个氨基酸残基,预测蛋白质相对分子质量和等电点分别为28 120和8.64,与鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tellan)Rhomboid蛋白氨基酸序列的同源性为84.44%;构建的重组原核表达质粒pET-Rhomboid经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29 000,并可与兔抗E.stiedai阳性血清发生特异性反应。结论成功克隆并表达了Rhomboid基因,为其生物学功能及以其作为斯氏艾美耳球虫疫苗候选基因的研究奠定了基础。
- 曲晗宫鹏涛张西臣张国才杨举李赫李建华
- 关键词：艾美耳球虫RACE原核细胞基因表达
