北京市自然科学基金(7002030)
- 作品数：8 被引量：65H指数：5
- 相关作者：张成岗徐文琳韩洪彦孟凡伟郭慧云更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学安徽医科大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金海外青年学者合作研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳鼠嗅球及皮层神经元的原代培养和Netrin-4受体在神经元定位的初步研究
- 2004年
- 目的 培养原代嗅球及皮层神经元细胞 ,研究神经轴突生长诱向因子 (Netrin 4 )受体在神经元细胞中的定位。方法 改良Koh法分离、培养出生 12h内Wistar乳鼠的嗅球及皮层神经元 ,采用免疫细胞化学方法鉴定其纯度。碱性磷酸酶 (AP)标记的Netrin 4融合蛋白与原代培养第 7d的神经元孵育 ,以亲和细胞化学法检测Netrin 4受体在神经元的定位。结果 原代培养第 7d的嗅球及皮层神经元胞体饱满 ,突起长并交织成网状 ;免疫细胞化学染色见神经丝蛋白(neurofilament)在神经元胞体及突起中表达 ;嗅球及皮层神经元的细胞膜上均有Netrin 4受体表达。结论 建立起高效、稳定的原代神经元培养方法并应用于神经突起生长诱向因子受体的定位研究。
- 余科科张成岗汪思应
- 关键词：嗅球神经元
- β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化。对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Westernblot进行鉴定。同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性。另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Westernblot鉴定其特异性。结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-Netrin mAb的杂交瘤细胞。免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原。另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb。
- 余利红高艳王利红韩洪彦孙志贤张成岗
- 关键词：合成肽抗原表位抗体制备抗体鉴定
- 轴突生长诱向因子(Netrin)基因家族研究进展被引量：8
- 2003年
- 在神经系统发育过程中,神经与其靶细胞之间精确联系的形成是依靠多种细胞外诱向因子介导实现的.这些因子通过作用于轴突生长锥上的相应受体而诱导或排斥轴突生长,从而决定了轴突的生长路线以及轴突与特定靶细胞的功能联系.
- 孟凡伟郭慧云张成岗
- 关键词：基因神经系统发育
- Na^+,K^+-ATPase研究进展被引量：10
- 2003年
- Na+ ,K+ ATPase广泛分布于多种细胞的细胞膜上 ,是维持细胞内外Na+ ,K+ 浓度梯度的关键酶。Na+ ,K+ ATPase由α,β和γ亚基组成 ,在不同组织 ,不同发育阶段表达不同的亚型。激素等通过蛋白激酶A、蛋白激酶C、酪氨酸激酶等调节Na+ ,K+ ATPase的活性。小的跨膜蛋白结合Na+ ,K+ ATPase的特异亚基 ,调节其活性。Na+ ,K+ ATPase不仅参与离子转运、蛋白转运、维持离子自稳平衡 ,而且在脊椎动物胚胎发育、神经元导向、中枢神经系统发育、细胞形态维持、细胞粘附等方面发挥作用 ,甚至可作为喹巴因的受体 ,参与信号传递。
- 徐文琳钱令嘉张成岗
- 关键词：NA^+
- Neuronatin基因研究进展被引量：2
- 2003年
- Neuronatin (Nnat)是最近克隆的脑特异表达的新基因 ,在大脑发育过程中被选择性地剪接 .人Nnat基因全长 3 973bp ,含有 3个外显子和 2个内含子 .NnatmRNA有α和β两种剪接形式 ,分别编码 81个和 5 4个氨基酸 ,两者具有同一相位的开放阅读框架 ,差别在于 β形式中间的外显子被剪切掉 .人Nnat是单拷贝基因 ,定位于染色体 2 0q11 2～ 12 .小鼠Nnat基因定位于 2号染色体末端 .该基因是印记基因 (imprintedgene) ,仅在父本来源的等位基因表达 ,而母本来源的等位基因则被甲基化不能表达 .该基因在胚胎期及出生后早期大量表达 ,而在成年和衰老动物大脑中表达明显降低 ,因此推测该基因与大脑的发育和分化密切相关 .成年动物中垂体前叶是NnatmRNA唯一强表达的地方 .推测其蛋白质产物具有疏水N端和亲水C端 ,是跨膜蛋白 ,其确切功能尚属未知 .
- 余利红周仁平张成岗
- 关键词：脑发育印记基因
- β-Netrin mRNA在成年大鼠脑内的表达及其分布被引量：4
- 2004年
- 目的 研究神经细胞突起生长诱向因子 (β Netrin)在大鼠脑内的基因表达。 方法 以地高辛标记的cR NA探针利用组织原位杂交技术检测β NetrinmRNA在出生后 30d大鼠脑内的表达及其分布。结果 (1)脑内β NetrinmRNA主要定位于神经元 ;(2 )脑内β NetrinmRNA阳性细胞广泛分布于大脑皮层、边缘系统、小脑、脑干等处的神经核团及嗅球中。其中 ,梨状前皮质、杏仁核群、海马各区锥体层、小脑浦肯野细胞、小脑内侧顶核及间置核、斜方体内侧核和嗅球僧帽细胞等部位阳性信号较强 ;中等强度的阳性信号见于额叶皮质、丘脑外侧背核等处。结论 原位杂交结果显示β NetrinmRNA在成年大鼠脑内神经元中有表达 ,进一步验证了β Netrin对脑内神经细胞突起的生长具有诱向作用。同时 ,由于β Netrin在大鼠嗅觉传导相关通路和海马、大脑皮质内表达量较高 ,提示β
- 孟凡伟郭慧云周仁平张成岗
- 关键词：MRNA原位杂交
- 大鼠脑红蛋白(NGB)可溶性原核表达和单克隆抗体制备及鉴定被引量：28
- 2003年
- 脑红蛋白 (NGB)是新发现的脑特异的携氧蛋白 .为了对其功能进行深入的研究 ,应用已构建大鼠NGB基因编码区原核表达载体pGEX 4T 2 NGB转化的大肠杆菌BL2 1 ,获得可溶性表达产物 .用谷胱甘肽S 转移酶 (GST)亲和层析柱纯化后作为抗原 ,免疫Balb c小鼠 .通过传统的细胞融合方法制备了抗大鼠NGB的单克隆抗体 ,并对全部 4株单抗进行了亚类和亚型、效价和特异性鉴定 .
- 孙健伟韩洪彦徐文琳王春丽王航雁徐淑玲杨建萍张家洁于凤琴张成岗
- 关键词：脑红蛋白原核可溶性表达单克隆抗体
- 神经突起生长导向因子(netrin)受体家族研究进展被引量：7
- 2004年
- 神经突起生长导向因子netrin是一种分泌蛋白 ,在神经发育所需的轴突导向及细胞迁移中发挥双重导向功能———吸引或排斥 ,主要依赖于生长锥所表达的不同受体结肠癌缺失蛋白 (DCC)或UNC5同源物 (UNC5H) ,从而传递不同信息。同时 ,dcc和unc5h也是肿瘤抑制基因 ,近年来的研究显示这种双重导向功能可能归因于它们属于配体依赖性受体家族。依赖性受体的重要特征是缺乏相应配体时将诱导细胞凋亡 ,因此推测DCC和UNC5H不仅为神经元传递信号所必需 ,同时也是细胞生存因子 ,与细胞存活及正常功能的发挥密切相关。
- 余科科汪思应张成岗
- 关键词：轴突导向
