国家自然科学基金(81260419)
- 作品数：30 被引量：84H指数：6
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- 刺猬信号通路在慢性氟中毒大鼠关节软骨损害中作用被引量：1
- 2018年
- 目的探讨刺猬(hedgehog,Hh)信号通路在慢性氟中毒大鼠关节软骨损害中作用。方法 36只健康SD大鼠随机分为对照组(自来水含氟量<1 mg/L),低、高氟组(饮水含氟量分别为5、50 mg/L),每组12只。饲养6个月后,应用氟离子电极法检测各组大鼠尿氟、骨氟含量;苏木素–伊红(HE)染色观察关节软骨组织病理形态学改变;免疫组织化学(IHC)、蛋白印迹法(Wb)检测大鼠关节软骨组织中音速刺猬蛋白(Shh)、跨膜蛋白(Smo)、骨形态发生蛋白–2(BMP-2)及B细胞淋巴瘤基因/白血病基因–2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(Bax)蛋白表达情况。结果与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟含量[分别为(3.66±0.43)、(8.05±0.60)mg/L]与骨氟含量[分别为(402.38±33.77)、(935.12±49.60)mg/kg]明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);染氟组大鼠后肢膝关节干骺端软骨厚度变薄,软骨细胞数减少,具有硬化性氟骨症改变;与对照组比较,低、高氟组大鼠关节软骨组织中Shh、Smo、BMP-2及Bax蛋白表达[分别为(0.86±0.09)、(0.92±0.11)、(1.02±0.14)、(0.91±0.14);(1.11±0.15)、(1.17±0.14)、(1.13±0.12)、(0.92±0.11)]均明显升高,Bcl-2蛋白表达[分别为(0.78±0.03)、(0.57±0.09)]明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Hh信号通路的激活及其下游靶基因过度表达,参与慢性氟中毒关节软骨损伤的发病过程。
- 朱志坚于燕妮陈荣黄宣林
- 关键词：慢性氟中毒关节软骨
- Hedgehog信号通路与地方性氟中毒软骨损害被引量：1
- 2015年
- 地方性氟中毒是由于机体氟元素摄人过多，导致的以骨骼和牙齿为主要病变特征的慢性全身性疾病，近年来研究发现，过量氟对软骨有明显的损害作用，可抑制软骨细胞增殖并导致凋亡。从而导致关节功能障碍，严重者可致脊柱和四肢关节畸形。
- 陶欣于燕妮
- Hh信号通路在氟致大鼠原代软骨细胞损伤中作用被引量：6
- 2015年
- 目的探讨体外染氟软骨细胞中刺猥蛋白基因(Hh)信号通路中音速刺猬蛋白、跨膜蛋白(Smo)及下游骨形态发生蛋白-2(BMP-2)因子表达在氟中毒软骨细胞损伤中的作用。方法取1周龄健康SD大鼠,用机械、酶消化法分离膝关节软骨细胞,免疫细胞化学对原代软骨细胞进行鉴定。实验设对照组和染氟组(5、10、20、40 mg/L)。培养48 h后,噻唑蓝法检测各组细胞活力,蛋白印迹及逆转录PCR分别检测各组细胞Smo、Shh、BMP-2蛋白及mRNA表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组比较,5、10 mg/L染氟组细胞活力[分别为(113.33±11.74)%、(127.25±10.24)%]明显升高,40 mg/L染氟组细胞活力[(73.91±9.94)%]明显下降(P<0.05);染氟组细胞中Shh、Smo、BMP-2蛋白和mRNA的表达量随染氟浓度增加而升高;40 mg/L染氟组细胞凋亡率为(11.13±1.20)%,明显高于对照组。结论氟可激活软骨细胞中Hh信号通路,Hh信号通路与软骨细胞凋亡可能共同参与氟中毒软骨损害过程。
- 朱志坚于燕妮陶欣邓超男
- 关键词：NA
- 酪氨酸激酶／信号转导和转录激活子在氟中毒大鼠肝脏中表达被引量：4
- 2015年
- 目的探讨酪氨酸激酶／信号转导和转录激活子（JAK／STAT）通路在慢性氟中毒大鼠肝脏损伤中的作用及机制。方法36只健康SD大鼠按体质量采用随机数字表法分为对照组（饮用含氟量〈1mg／L自来水），低、高过剂量氟组（饮水含氟量分别为5、50mg／L），每组12只（雌雄各半）。饲养6个月后，股动脉放血处死，采用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟、骨氟含量；自动血生化分析仪检测大鼠肝功能；免疫组织化学和蛋白印迹（Westernblot）法检测JAK／STAT通路中酪氨酸蛋白激酶1（JAK1）、信号传导与转录激活因子3（STAT3）及凋亡因子B细胞淋巴瘤／白细胞-2（Bc1-2）、B细胞淋巴瘤／白细胞基因伴随蛋白X（Bax）蛋白表达水平；氧化应激试剂盒法检测肝组织中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性及脂质过氧化物（LPO）含量。结果低、高过剂量氟组大鼠尿氟[（1．90±0．12）、（2．20±0．17）mg／L]、骨氟[（210．37±15．81）、（222．84±10．21）mg／kg]均高于对照组[（1．74±0．11）mg／L，（165．48±10．37）mg／kg，F=33．840、69．149，P均〈0．05]；高过剂量氟组大鼠血清谷氨酸转氨酶[ALT，（69．83±11．18）U／L]及天门冬氨酸氨基转移酶[AST，（167．56±50．85）U／L]活性均高于对照组[（42．67±7．07）、（126．31±16．76）U/L，F=32．135、4．984，P均〈0．05]；高过剂量氟组JAKl、STAT3及Bax蛋白表达（1．56±0．31、1．49±0．49、1．41±0．55）明显高于对照组（1．01±0．11、1．04±0．15、0．87±0．21，F=10．923、5．361、5．009，P均〈0．05），高过剂量氟组Bcl．2蛋白表达（0．61±0．15）明显低于对照组（1．04±0．17，F=16．017，P〈0．05）；高过剂量氟组T-SOD[（7．22±0．88）U／mgprot]、GSH-PX[（7．23±2．47）U／mgprot]活性明显低于对照组[（9．52±1．51）、（12．01±5．
- 朱志坚于燕妮
- 关键词：JAK/STAT信号通路氟中毒氧化性应激
- 不同氟浓度对大鼠原代软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的观察不同氟浓度对大鼠原代软骨细胞Ⅱ型胶原(ColⅡ)表达的影响,探明ColⅡ在染氟软骨细胞的表达意义。方法取1周龄健康SD大鼠,用机械-酶消化法分离膝关节软骨细胞,经甲苯胺蓝鉴定后,取第三代细胞将实验分为对照组和染氟组(5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)五组,培养3d后,经MTT检测各组细胞活力,并采用Western blot、免疫组化检测各组细胞ColⅡ蛋白表达。结果NaF培养3d后,细胞活力在5mg/L、10mg/L组较正常组高,在40mg/L组较正常组低,ColⅡ蛋白的表达在10mg/L组较正常组高,在40mg/L组较正常组低,差异有有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度的氟对大鼠原代软骨细胞具有促进增殖作用,而高浓度具有抑制增殖作用,其机制可能与ColⅡ的分泌有关。
- 朱志坚于燕妮陶欣
- 关键词：氟化钠细胞活力
- JAK/STAT信号通路在地氟病肝损害中的机制研究被引量：1
- 2015年
- 地方性氟中毒（地氟病）是一种分布于全球的疾病，是由于当地岩石、土壤中含氟量过高，造成饮水和食物中含氟量高而引起各器官不同程度的损害的一类疾病。其类型主要有饮水型、燃煤污染型及饮茶型。主要临床改变分为骨相损害和非骨相损害，骨相损害主要包括氟斑牙及氟骨症［1］；非骨相损害侵害范围广，损伤程度重，肝脏是非骨相损害的重要器官之一。实验表明氟中毒时可干扰肝细胞的正常生理功能，引起肝脏结构、功能异常［2］。但慢性氟中毒致肝损伤的机制仍不完全肯定，大多数学者认为与氧化应激、凋亡及信号传导通路有关［3］。JAK‐STAT信号通路能将信号快速从膜传导到核，调控细胞增殖分化、凋亡、炎症、肿瘤等多种生理、病理生理过程。研究发现，该通路中的许多因子可在肝内表达，并且该通路的异常激活可导致多种肝损伤［4］。但JAK／STAT 与地氟病肝损害的相关性研究很少，本研究主要针对JAK／STAT 信号通路与地氟病肝损害关系可能机制作一综述。
- 朱志坚于燕妮
- 关键词：JANUS激酶信号传导
- 慢性氟中毒对大鼠肝脏Notch1、Hes1蛋白表达影响被引量：5
- 2015年
- 目的探讨慢性氟中毒对肝损害中Notch1、Hes1蛋白表达的影响。方法 36只SD大鼠按体重随机分为3组,每组12只,对照组饮用含氟量<1 mg/L自来水,低、高氟组分别饮用含氟化钠5、50 mg/L的自来水,饲养6个月后检测尿氟,取股骨测定骨氟,检测血清中肝功能指标;应用免疫组织化学和蛋白印记法检测肝脏组织中Notch1、Hes1及凋亡因子Bcl-2、Bax的蛋白表达;测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性及脂质过氧化物(LPO)含量;原位末端转移酶标记法检查肝组织中凋亡细胞定位及数量。结果与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟、骨氟含量分别为[(1.89±0.12)、(2.19±0.17)mg/L与(2.10±0.16)、(2.21±0.10)mg/kg]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),低、高氟组大鼠肝组织中Notch1、Hes1蛋白表达量分别为[(0.55±0.32)、(0.71±0.28)与(0.74±0.92)、(0.88±0.29)]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,染氟大鼠肝LPO含量逐渐升高,S0D、GSH-Px活性逐渐下降;与对照组比较,低、高氟组Bcl-2蛋白表达[(0.94±0.24)、(0.71±0.22)]明显降低,Bax蛋白表达[(1.25±0.42)、(1.43±0.46)]显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,染氟大鼠肝细胞凋亡细胞数增多。结论过量氟可引起肝脏氧化应激及肝细胞凋亡,Notch信号通路可能参与氟中毒引起肝脏损伤发病过程。
- 陶欣于燕妮朱志坚赵丽娜邓超男
- 关键词：氟中毒肝脏NOTCH1HES1
- 氟对大鼠成骨细胞Wnt3α、β-链蛋白mRNA和蛋白表达的影响被引量：10
- 2013年
- 目的观察氟中毒大鼠成骨细胞Wnt3α、β-链蛋白（catenin）mRNA和蛋白表达，探讨氟骨症发生与Wnt通路的关系。方法健康SD大鼠36只，体质量100—120g，按体质量将大鼠随机分为3组，每组12只。对照组大鼠饮用自来水（含氟量〈1mg／L），低氟组、高氟组大鼠分别饮用含5、50mg／L氟化钠的自来水。大鼠饲养8个月，建立慢性氟中毒模型。饲养期间检查大鼠氟斑牙发生情况，股动脉放血处死大鼠前收集大鼠24h尿样，处死后取股骨组织。采用氟离子选择电极法测定尿氟和骨氟含量；固相夹心酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清骨碱性磷酸酶（BALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶一5b（TRACP一5b）含量；光镜下观察骨组织的形态学变化，测量骨皮质厚度、骨小梁宽度及密度变化；原位杂交技术和免疫组化方法检测成骨细胞Wnt3α、β-cateninmRNA和蛋白表达。结果大鼠氟斑牙检出率低氟组为66．7％（8／12），高氟组为91．7％（11／12），对照组为0．O％（0／12），组间比较差异有统计学意义（x。：21．6，P〈0．05）。尿氟和骨氟组问比较差异有统计学意义（F=36．57、467．02，P均〈0．05），其中低氟组[（2．06±0．64）mg／L、（632．33±123．21）mg／kS]和高氟组[（7．69±1．96）mg／L、（1088．75±156．16）mg／kg]高于对照组[（1．26±0．17）mg／L、（305．58±91．26）mg／kg，P均〈0．05]，高氟组高于低氟组（P均〈0．05）。血清BALP和TRACP-5b组间比较差异有统计学意义（F=89．57、7．68，P均〈0．05）。其中低氟组[（31．47±5．30）U／L]和高氟组[（54．61±2．27）U／L]，血清BALP明显高于对照组[（16．24±1．57）U／L，P均〈0．05]，高氟组高于低氟组（P〈0．05）；血清TRACP-5b，低氟组[（3．45±1．85）U／L）明显高于对照组[（1．264±0．23）U／L]和高氟组[（2．744±1．8）]U／L，P均〈0．05]。光镜下，高
- 陈锡山于燕妮易韦万良斌谢莹
- 关键词：氟中毒成骨细胞WNT3AΒ-链蛋白
- Wnt信号通路在氟中毒肾脏中表达及其意义被引量：7
- 2015年
- 目的观察Wnt/β-catenin信号通路及其相关信号分子蛋白及mRNA表达水平在实验性氟中毒大鼠肾组织中的变化,探讨氟中毒发病机制。方法选择健康成年SD大鼠36只,雌雄各半,随机分为:对照组(饮水含氟量<1 mg/L),低、高氟组(饮水加氟量5、50 mg/L),每组12只,观察大鼠氟斑牙发生情况,测定尿氟、骨氟含量及肾功能变化;光镜观察肾组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测肾组织中Wnt4、β-连环蛋白(β-catenin)、E-粘钙蛋白(E-cadherin)蛋白及mRNA表达。结果低氟组大鼠氟斑牙检出率为75%(9/12),高氟组为91.7%(11/12),与对照组比较,染氟组大鼠尿氟、骨氟含量随染氟浓度增加而逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);染氟组大鼠血清肌酐及尿素氮明显高于对照组(均P<0.05);光镜观察染氟组大鼠肾小管上皮细胞明显水肿、渗出、坏死,细胞间界限不清,且随着染氟浓度增高,损伤加重;低、高氟组大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin、E-cadherin蛋白表达分别为[(7.78±1.17)、(6.66±0.59)、(3.23±0.82)]和[(17.46±3.18)、(12.46±0.89)、(1.23±0.35)],mRNA表达分别为[(3.01±0.81)、(1.86±0.43)、(0.276±0.12)]和[(5.79±0.86)、(5.84±1.19)、(0.12±0.46)],与对照组比较,氟中毒组大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin蛋白和mRNA表达升高,而E-cadherin蛋白及mRNA表达降低。结论慢性氟中毒时,氟通过刺激Wnt信号通路中Wnt4、β-catenin过表达、E-cadherin低表达,导致肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)。
- 张颖于燕妮范彬
- 关键词：氟中毒
- 氟对软骨细胞印度刺猬蛋白、甲状旁腺激素相关肽、跨膜蛋白表达及细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2016年
- 目的 观察氟对软骨细胞印度刺猬蛋白（Ihh）、甲状旁腺激素相关肽（PTHrp）、跨膜蛋白（Smo）表达和细胞增殖与凋亡的影响。方法原代培养乳鼠关节软骨细胞，传第3代后按染氟（氟化钠，NaF）剂量分为0（对照），5、10、20、40mg／L染氟组。采用噻唑蓝（MTr）法测定24、48、72h细胞增殖率；流式细胞术法检测24、48、72h对照组和40mg／L染氟组细胞凋亡情况；蛋白质免疫印迹法（Westernblot）和反转录PCR（RT—pCR）法检测48hIhh、PTHrp、Smo蛋白及mRNA表达。结果与对照组比较，24、48、72h5mg／L染氟组细胞增殖率明显升高，差异有统计学意义[（1．10±0．08）％比（1．17±0．07）％、（1．13±0．08）％比（1．20±0．06）％、（1．15±0．08）％比（1．16±0．08）％]；40mg／L染氟组细胞增殖率在48、72h显著降低[（0．72±0．11）％、（0．68±0．04）％，P均〈0．05]。与对照组比较，40mg／L染氟组软骨细胞凋亡率在24、48、72h逐渐增高[（1．47±0．05）％、（19．874-3．03）％、（25．30±1．28）％、（45．73士4．63）％，F=123．328，P〈0．01]。与对照组比较，5、lO、20、40mg／L染氟组在48hIhh、PTHrp、Smo蛋白及mRNA表达均明显增高（Ihh蛋白：0．77±0．08比0．98±0．07、1．23±0．06、1．37±0．07、1．34±0．07；PTHrp蛋白：0．68±0．04比0．89±0．05、0．83±0．05、1．29±0．05、1．16±0．08；Smo蛋白：0．37±0．01比0．64±0．06、0．67±0．03、0．96±0．06、0．69±0．06，IhhmRNA：0．77．4-0．05比0．98±0．05、1．09±0．05、1．27±0．03、1．46±0．06；PTHrpmRNA：0．67±0．07比0．97±0．05、1．07±0．08、1．37±0．05、1．45±O．05：SmomRNA：0．45±0．03比O．63±0．04、0．71±0．05、0．81±0．01、1．00±0．02，P均〈0．05）。结论低氟剂量对软骨细胞起增殖作用，而高氟剂量则起抑制作用。随时间的延长，氟可促进软骨细�
- 陶欣朱志坚邓超男
- 关键词：氟软骨细胞细胞增殖
