广州市科技计划项目(2002E3-E4012)
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 相关作者：李明宁云山李妍郝文波李莉更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恶性疟原虫重组乳酸脱氢酶胶体金免疫层析法检测试纸条的研制被引量：1
- 2006年
- 目的用氯金酸标记抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDH)单克隆抗体(McAb),研制用于诊断恶性疟原虫和间日疟原虫感染的胶体金免疫层析(GICA)试纸。方法采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒、标记抗恶性疟原虫重组乳酸脱氢酶单克隆抗体,制成免疫层析检测试纸条。用该试纸条检测已知疟疾病人及健康人血样,鉴定方法的敏感性和特异性。结果检测重组LDH抗原的最小量为5 ng/ml;对30例恶性疟病人血样及40例间日疟病人血样进行检测,敏感性分别为83.33%和57.50%,检测100例健康者血样特异性为98.00%。结论初步建立了同时诊断恶性疟原虫和间日疟原虫感染的GICA检测法。
- 李莉劳海苗吴英松郝文波李明
- 关键词：乳酸脱氢酶单克隆抗体
- 抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立被引量：9
- 2005年
- 目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择最佳反应模式对疟疾血样进行检测.结果筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG1,亲和常数(κ)介于1×10-8～2.82×10-10.以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%.结论建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒.
- 李妍宁云山李莉彭丹丹董文其李明
- 关键词：谷氨酸脱氢酶单克隆抗体
- 重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶的纯化及免疫活性测定
- 2004年
- 目的 研究恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDH)重组蛋白纯化和复性的最佳条件。方法 重组质粒PGEX-4T-1-LDH在E.coli BL21中表达,表达产物用酶裂解法洗涤、变性、复性、Q-Sepharose High Performance离子交换层析方法纯化。结果 获得具有生物活性的蛋白,其纯度达到95％。结论 此方法操作简便,纯化效果好。
- 李莉宁云山吴英松李明
- 关键词：恶性疟原虫乳酸脱氢酶蛋白纯化
- 恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶融合蛋白复性及纯化的研究被引量：5
- 2003年
- 目的建立恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)融合蛋白质的复性和纯化方法。方法将含有恶性疟原虫GDH全长基因的融合蛋白表达质粒GDH/ pGEX-4T-1转化到宿主菌BL21,该GDH/GST融合蛋白在IPTG的诱导下获得高水平的表达,经SDS-PAGE分析表达产物主要为不溶性的包涵体。经超声酶解法、离心、变性剂/去污剂洗涤后获得包涵体。包涵体经8 mol/L尿素变性后分别采用分子筛柱层析、透析和稀释3种方法复性,并通过浊度分析、非还原SDS-PAGE等方法比较、优化复性方法和条件。复性后的GDH/GST融合蛋白经过不同柱层析方法进行纯化。结果经SDS-PAGE分析表明,GDH/GST融合蛋白表达量可占到菌体总蛋白的25%左右;浊度分析表明:稀释复性法优于其它两种方法,同时20 mmol/L Tris-HCl、1 mmol/L EDTA、pH8.5及GSSG/GSH=1∶10为该融合蛋白稀释复性的最佳条件,其复性回收率可达90%以上。复性产物采用二步阴离子交换层析可获得较好的纯化效果。结论通过稀释复性,二步阴离子交换层析可获得高纯度、具有天然空间构象的重组GDH/GST融合蛋白。
- 李妍宁云山郝文波李莉李明
- 关键词：恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶复性纯化包涵体
