国家自然科学基金(39870427)
- 作品数：12 被引量：145H指数：7
- 相关作者：马大龙张颖妹宋泉声陈英玉狄春辉更多>>
- 相关机构：北京大学北京大学第三医院河北联合大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 人TFAR19的定点突变及其重组蛋白的表达、纯化和功能分析被引量：7
- 2000年
- 目的 :了解凋亡相关新基因TFAR19编码蛋白分子中潜在的Ser10 0 磷酸化位点与其促凋亡效应的关系。方法 :利用重叠延伸PCR定点突变技术构建TFAR19Ser10 0 →Ala10 0 突变体 ,用DNA测序技术验证 ,大肠杆菌表达 ,离子交换技术纯化重组突变蛋白 ,将其加入培养的白血病细胞株HL 6 0 ,通过PI染色 ,流式细胞仪分析 ,观察突变重组蛋白的促凋亡效应。结果 :构建成TFAR19Ala10 0 突变体 ,并经DNA测序所证实 ,在大肠杆菌中获得了高水平表达 ,Westernblot表明突变型重组蛋白与野生型具有相同的免疫学活性 ,流式细胞仪分析发现突变蛋白对撤除血清的HL 6 0细胞具有与野生蛋白相似的剂量依赖性促凋亡效应。结论 :TFAR19分子中潜在的Ser10 0 磷酸化位点对其促凋亡效应无影响 。
- 曹志敏张颖妹陈英玉马大龙
- 关键词：TFAR19点突变氧化磷酸化重组蛋白质
- 人程序化死亡分子5(PDCD5)核酸和蛋白质序列的数据发掘被引量：7
- 2003年
- 目的 :以程序化死亡分子 5 (PDCD5 )为靶分子 ,对其核酸与蛋白质序列进行生物信息学分析 ,为PDCD5功能的实验研究提供基础 ,同时也为人类功能基因的生物信息学分析提供新的技术路线。方法 :利用数据库相似性搜索、同源物结构比较、表达谱分析和查询基因“邻居”等技术进行数据发掘和数据综合分析。结果 :发现人PDCD5在 12号和 5号染色体上分别存在返座假基因 (retropseudogene) ,小鼠 1号染色体也存在小鼠PDCD5cDNA的返座假基因。热自养甲烷杆菌的PDCD5同源物、泛素及核糖体蛋白S13具有与人PDCD5相似的折叠方式。线虫的PDCD5同源物、泛素及IAP(inhibitorofapoptosisproteins)分子等在表达谱拓扑图上属于同一基因簇成员 ,该基因簇与生物合成和蛋白质合成相关。PDCD5同源物在多个基因组中与多种核糖体蛋白相邻。结论 :PDCD5存在 2个拷贝的假基因。PDCD5除参与细胞凋亡外 ,预测还与泛素有功能相关性 ,并可能参与蛋白质的翻译调控。
- 郑霙马大龙
- 关键词：PDCD5核酸蛋白质序列生物信息学
- 新细胞因子及细胞凋亡基因的发现与功能研究被引量：68
- 2002年
- 在人类基因组完成工作框架图以后 ,人类功能基因组学成为最重要的任务之一。我们目前正在重点研究编码细胞因子和凋亡相关分子的人类功能基因。本综述介绍其中的 2个首先由我们实验室克隆的分子 ,即趋化素样因子 1(CKLF1)和程序化细胞死亡分子 5 (PDCD5 ,过去命名为TFAR19)。CKLF1是属于一个新的基因超家族的成员 ,具有体内外对不同白细胞的趋化活性、刺激骨骼肌增殖活性和刺激骨髓细胞增殖活性。在临床应用上 ,重组CKLF1蛋白质有可能用于肌萎缩的治疗 ,CKLF1抑制剂有可能用于变态反应和自身免疫病的治疗。PDCD5是凋亡的正调节分子 ,能够结合胱天蛋白酶 3,并在体外延长其半衰期。较多证据表明 ,PDCD5在肿瘤组织的表达低于正常组织。PDCD5有可能成为肿瘤。
- 马大龙
- 关键词：细胞因子细胞凋亡PDCD5TFAR19
- 人重组胱天蛋白酶原-3的表达和体外活化
- 2002年
- 目的 :建立一个在短时间内获取大量活化胱天蛋白酶 3的方法。方法 :将胱天蛋白酶 3酶原的基因从真核表达载体中克隆到原核表达载体 pMTY4 His中 ,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达MS2 胱天蛋白酶原 3融合蛋白 ;将包涵体变性 ,经酸化和浓缩进行体外活化 ;对所得蛋白用Westernblot和活性试验进行鉴定。结果 :构建成pMTY4 His 胱天蛋白酶 3原核表达载体 ,在大肠杆菌中获得了较高水平表达的胱天蛋白酶原 3酶原 MS2融合蛋白。体外活化后每升诱导菌可获得约 10mg蛋白 ,用抗胱天蛋白酶 3单克隆抗体证实所得蛋白为胱天蛋白酶原 3,活性试验证实得到高活性的蛋白。结论 :成功地建立了大量获取高活性的胱天蛋白酶 3的方法 ,为深入研究胱天蛋白酶
- 李现亭夏东岚莫晓宁宋泉声张颖妹马大龙
- 关键词：体外活化基因重组细胞凋亡单克隆抗体
- 果蝇程序化死亡基因5(PDCD5)同源cDNA的克隆和序列分析被引量：17
- 2001年
- 为了解人类白血病细胞凋亡相关新基因 TFAR1 9(PDCD5,programmed cell death5)在不同种属间的序列同源性 ,利用 EST(expression sequence tag)拼接、RT- PCR、DNA序列测定技术及计算机分析技术 ,首次成功地进行了果蝇 PDCD5同源 c DNA编码区基因克隆和序列分析 .发现果蝇与小鼠及果蝇与人 PDCD5在核苷酸水平上分别有 57.5%和 57.1 %的同源性 ,在氨基酸水平上分别有 46.8%和 46.4%的同源性 .功能区分析发现 ,果蝇 PDCD5c DNA编码 1 33个氨基酸 ,计算机预测可能是一种核蛋白 ,含 5个可能的酪蛋白激酶 (casein kinase )磷酸化位点 ,2个可能的 PKC磷酸化位点 ,与人 PDCD5的功能区类似 .因而果蝇 PDCD5是与人 PDCD5同源的新基因 ,可能都与细胞程序化死亡相关 .
- 王应张颖妹杨田周周狄春辉马大龙
- 关键词：果蝇PDCD5TFAR19细胞凋亡基因基因克隆
- 凋亡相关蛋白TFAR19在TF-1细胞凋亡中出现细胞核转位被引量：37
- 2001年
- 目的 :探讨凋亡相关分子TFAR19在TF 1细胞凋亡过程中的表达及定位。方法 :以TFAR19的单克隆抗体为工具 ,采用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等研究手段 ,观察细胞凋亡过程中TFAR19分子的表达水平和细胞内定位 ,分析其与细胞膜磷脂酰丝氨酸 (phosphatidylserine,PS)以及细胞核DNA片段化的关系。结果 :TFAR19蛋白在撤除GM CSF的TF 1细胞中表达水平显著增高 ,伴有明显的核转位现象 ,且早于PS外翻和细胞DNA片段化。结论 :TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一 ,这一新发现为进一步探讨TFAR19蛋白的生物学效应 。
- 陈英玉孙荣华韩文玲张颖妹宋泉声狄春辉马大龙
- 关键词：TFAR19细胞凋亡
- 人凋亡相关基因TFAR19缺失突变体的原核表达、产物纯化及鉴定被引量：16
- 2002年
- 构建TF 1细胞凋亡相关基因 19(TF 1cellapoptosisrelatedgene 19,TFAR19)缺失突变体的原核表达载体 ,获取缺失突变体蛋白 ,用于TFAR19促凋亡分子机理的研究 .从真核表达载体pcDI TFAR19扩增出野生型TFAR19和 4个缺失突变体 ,重组到原核表达载体pGEX 4T 2 .经亲和层析方法对缺失体蛋白进行纯化后 ,再利用凝胶过滤的方法进一步纯化 .利用抗GST和抗TFAR19的单克隆抗体对蛋白进行免疫学鉴定 .用白血病细胞株HL 6 0检测蛋白活性 .成功地克隆并重组了野生型TFAR19及缺失突变体 pGEX 4T 2表达载体 ,对融合蛋白的表达条件进行了优化 .SDS PAGE结果显示 ,各个缺失突变体融合蛋白均有较高水平的表达 .免疫学检测证实获得了正确的表达产物 .活性检测证实 ,野生型TFAR19和缺失突变体 4可以明显促进去血清诱导的HL 6 0细胞凋亡 ,第
- 李现亭莫晓宁夏东岚刘雅楠宋泉声张颖妹马大龙
- 关键词：原核表达产物纯化GST
- 抗人凋亡相关蛋白TFAR19的单克隆抗体制备及鉴定被引量：18
- 2000年
- 目的研制鼠抗人凋亡相关蛋白 TFAR19的单克隆抗体，以进一步探讨 TFAR19蛋白的结构与功能。方法以纯化的重组人 TFAR19蛋白为抗原 ,免疫 BALB/c小鼠，将 TFAR19蛋白免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0进行细胞融合，经克隆筛选获得鼠抗人 TFAR19蛋白单抗的杂交瘤细胞株，以间接 ELISA、 Western免疫印迹分析等方法进行单克隆抗体的鉴定。结果获得了 3株稳定分泌抗人 TFAR19单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (C1,C10,2C12),其分泌的单抗效价高，特异性好，亲和力不一，免疫球蛋白亚类均为 IgG1。 Western免疫印迹分析证明 TFAR19蛋白在凋亡细胞中高表达。结论所获单抗能特异识别原核及真核细胞表达的 TFAR19蛋白，为进一步探讨 TFAR19蛋白的生物学效应提供了条件。
- 陈英玉张颖妹孙荣华宋泉声狄春辉马大龙
- 关键词：TFAR19PDCD5单克隆抗体
- 凋亡相关蛋白TFAR19在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达与定位被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨凋亡相关蛋白TFARl9在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达。 方法 以TFAR19蛋白的单克隆抗体为工具,利用过氧化酶标定的链霉卵白素染色试剂盒对老年性白内障晶状体上皮细胞行免疫组化染色,观察TFAR19蛋白在晶状体上皮细胞中的表达及定位。结果 发现正常人品状体上皮细胞中有TFAR19蛋白低水平的表达,老年性白内障晶状体上皮细胞中有3种高表达的细胞:一种为少部分细胞呈胞浆高表达,胞核不表达;另一种为偶见胞核、胞浆均高表达;第3种为凋亡晚期的细胞仅在凋亡小体上有表达。 结论 老年性白内障晶状体上皮细胞中有凋亡相关蛋白TFAR19的特征性表达,该结果对进一步揭示细胞凋亡是否参与自内障的发病有着重要意义。
- 秦虹刘祖国郝燕生王薇陈英玉
- 关键词：人晶状体上皮细胞老年性白内障凋亡蛋白表达免疫组化染色
- 凋亡相关基因PDCD5的表达与桥本甲状腺炎临床相关性的研究被引量：2
- 2014年
- 本实验旨在探明程序性死亡因子5(programmed cell death 5,PDCD5)在桥本甲状腺炎(hashimoto's thyroiditis,HT)病程中的表达,并研究其与HT疾病发生发展之间的关系。以β-actin基因、β-actin蛋白为内参照,采用RT-PCR法和Western印迹法检测60例HT患者和40例健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)PDCD5 mRNA和蛋白的表达水平。以外周血血清中抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)水平45%为标准,划分为低TMAb组(TMAb≤45%)和高TMAb组(TMAb>45%),比较两组患者的血清TGAb值、甲状腺激素水平及PDCD5的表达水平。结果表明,与健康对照组相比较HT患者PDCD5 mRNA和PDCD5蛋白的表达阳性率和相对表达水平显著升高(p<0.05),在高TMAb水平组PDCD5的表达更高,较低TMAb水平组有显著性差异(p<0.05),TGAb水平显著高于低TMAb组(p<0.01),血清TT3、TT4、FT3、FT4没有统计学差异(p>0.05)。由于PDCD5的表达量在HT患者PBMC中上调,并且随病情加重其表达量逐渐增加,初步判定在HT疾病的发生发展过程中,PDCD5具有重要意义。
- 赵杰李超赵丽娜
- 关键词：桥本甲状腺炎外周血单个核细胞反转录-聚合酶链式反应WESTERN印迹法
