国家自然科学基金(C30371414)
- 作品数：4 被引量：28H指数：3
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- 相关机构：华中科技大学清华大学更多>>
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- Amplex Red荧光法检测组织工程瓣膜赖氨酰氧化酶活性被引量：7
- 2007年
- 目的采用Amplex red荧光法检测组织工程心脏瓣膜(tissue engineered heart valve,TEHV)中赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)的活性。方法经胰蛋白酶+乙二胺四乙酸、聚乙二醇辛基苯基醚和核酸酶处理,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分,然后在其表面种植大鼠肌成纤维细胞,构建TEHV。用高糖培养基在体外培养瓣膜27 d,再用不含酚酞和血清的培养基培养24h,收集此时的培养基作为样本,用Amplex red荧光法检测样本中LOX的浓度,同时应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TEHV中LOXmRNA的表达。结果样本中LOX的荧光值为45.60±1.66,根据标准曲线获得相应的LOX浓度为0.123±0.003μg/ml,同时各个TEHV均有LOXmRNA的表达,与Amplex red荧光法检测的结果相一致。结论应用Amplex red荧光法检测TEHV中LOX的活性具有可行性,并为反映LOX对TEHV细胞外基质中胶原交联的重要作用提供了方法依据。
- 洪昊董念国史嘉玮
- 关键词：组织工程心脏瓣膜赖氨酰氧化酶胶原交联
- 组织工程心脏瓣膜的研究进展被引量：12
- 2006年
- 洪昊董念国
- 关键词：心脏瓣膜
- 转化生长因子β1缓释壳聚糖微球制备及体外的细胞相容性被引量：3
- 2008年
- 背景:利用缓释系统释放生长因子,是目前生物活性因子应用研究的方向之一。目的:应用离子交联沉淀法制备壳聚糖-转化生长因子β1缓释微球,观察其体外缓释性能以及细胞相容性。设计、时间及地点:观察性实验,于2006-10/2007-09在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成。材料:壳聚糖,脱乙酰度90%,由清华大学化学工程系提供;转化生长因子β1,由晶美公司提供;大鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。方法:①离子交联沉淀法制备壳聚糖微球,并包裹转化生长因子β1,制备可体外缓释转化生长因子β1的壳聚糖-转化生长因子β1缓释微球。②选择传代二三次、生长良好的大鼠胸降主动脉中层肌成纤维细胞,调节细胞密度至1×108L-1,分别加入不同浓度(4,2,1g/L)壳聚糖微球浸提液,不含浸提液的培养基作为对照培养。主要观察指标:扫描电镜、激光粒度分析仪、Elisa法观察微球表面形态,测定药物载药率、包封率、体外缓释效率等指标;四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖情况,评估壳聚糖微球体外细胞相容性。结果:所得微球球形良好,表面光滑,粒径分布集中,平均粒径272nm。壳聚糖微球有较高的药物包封率,达80.60%。体外释放试验提示,转化生长因子β1初期存在突释现象,前24h释放达27%,其后可从壳聚糖微球中稳定释放,7d累计释放达41%。四甲基偶氮唑盐法提示该壳聚糖微球对细胞体外生长无不良影响,相容性好。结论:离子交联沉淀法制备壳聚糖缓释微球方法简单易行,所得壳聚糖-转化生长因子β1微球具有良好的缓释效能及细胞相容性。
- 陈思董念国史嘉玮郭超齐宏旭
- 关键词：转化生长因子Β1缓释壳聚糖微球
- 转化生长因子-β_1对体外构建组织工程瓣膜的实验研究被引量：9
- 2006年
- 目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在组织工程心脏瓣膜(TEHV)体外构建中的作用。方法经胰酶/EDTA、去污剂Triton X-100和核酸酶处理,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分,然后在其表面种植大鼠肌成纤维细胞,构建TEHV。实验组培养基中添加TGF-β1(10ng/ml),对照组采用普通培养基。体外培养2周后取瓣叶,行HE染色和扫描电镜观察,并检测羟脯氨酸、DNA含量及瓣叶最大负荷力,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测瓣膜细胞MMP-13和TIMP-1mRNA的表达。结果HE染色和扫描电镜显示实验组较对照组的细胞联合紧密且细胞外基质更丰富,羟脯氨酸含量和DNA含量增高,最大负荷力提高,MMP-13mRNA和TIMP-1mRNA的表达增强。结论TGF-β1在TEHV体外构建过程中具有积极作用,能为种子细胞生长提供有利因素,促进细胞增殖和细胞外基质分泌,提高瓣膜的最大负荷力。
- 仇玉明董念国史嘉玮叶晓峰
- 关键词：组织工程心脏瓣膜转化生长因子-Β1细胞外基质
