上海市科学技术委员会资助项目(03JC14036)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：刘宁飞蒋朝华胡学庆更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人真皮淋巴管内皮细胞的分离及冷冻保存被引量：3
- 2007年
- 目的建立分离培养人真皮淋巴管内皮细胞(LECs)及其冷冻保存技术。方法采用中性蛋白酶及胶原酶消化结合免疫磁珠方法,分选CD34-/CD31+细胞。所获内皮细胞进行体外培养,经免疫荧光染色、RT-PCR鉴定证实为LECs。采用梯度降温法冻存内皮细胞,经复苏后进行形态学观察,以台酚蓝试验、MTT试验、流式细胞术细胞检测等方法鉴定细胞生物学特性。结果中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠分选,可从真皮组织获取高纯度的LECs。与新鲜细胞相比,复苏的内皮细胞活力保持在92%以上。复苏后的内皮细胞形态学、生物学特性及生长曲线与新鲜细胞差异无统计学意义。冻存内皮细胞的凋亡率较新鲜内皮细胞高,为(9.15±0.34)%vs(5.31±0.23)%,但无统计学差异(P>0.05)。结论中性蛋白酶及胶原酶消化结合免疫磁珠分选,可获取足够数量及纯度的LECs;冻存的内皮细胞复苏后无明显形态学改变,并保持较高的活力及体外增殖能力;可作为种子细胞来源,为淋巴管系统发育和新生研究提供方便。
- 蒋朝华胡学庆刘宁飞
- 关键词：淋巴管内皮细胞细胞培养细胞冻存流式细胞术
