国家自然科学基金(30100063)
- 作品数：6 被引量：11H指数：3
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- 相关机构：第三军医大学第三军医大学新桥医院第三军医大学西南医院更多>>
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- 粘附斑激酶家族新成员Pyk2的研究进展被引量：1
- 2005年
- 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase2,Pyk2),又称细胞粘附激酶β(CAKβ)、相关粘附聚焦酪氨酸激酶(RAFTK),是粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)家族的新成员,与FAK具有高度同源性.Pyk2活化可催化多种含SH2结构域的底物蛋白磷酸化,涉及到多条信号传导通路,包括离子通道的调节、细胞生长增殖分化和细胞凋亡等,但其功能机制至今尚不清楚.
- 郝嘉严俊肖颖彬
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶蛋白激酶类心血管疾病
- 低氧促进大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成被引量：3
- 2005年
- 目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成、总蛋白合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达的影响。方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H-亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达。结果成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第24、48小时胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率较常氧组显著增加,分别增加132%(P<0.05)和163%(P<0.01);低氧12h起Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞。结论低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达,提示低氧对心脏成纤维细胞胶原合成代谢的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制。
- 严俊高钰琪张恒王培勇谢增柱
- 关键词：低氧心脏成纤维细胞胶原
- RNA干扰技术沉默黏附斑激酶诱导心脏成纤维细胞失巢凋亡被引量：3
- 2006年
- 目的:利用短发夹RNA干扰载体介导的RNA干扰技术沉默成年大鼠心脏成纤维细胞中黏附斑激酶,观察细胞增殖和凋亡的变化。方法:实验于2004-12/2005-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。实验选用10～12周龄清洁级的雄性Wistar大鼠24只,以转染靶向黏附斑激酶的重组RNA干扰质粒的心脏成纤维细胞为干预组,选择未转染细胞和转染空质粒、非特异siRNA的细胞为不同对照组,共4组,各6只。消化法培养大鼠心脏成纤维细胞,设计、构建和鉴定黏附斑激酶RNA干扰载体,westernblot法测量黏附斑激酶的沉默效率,四唑盐比色法检测细胞增殖,DNA缺口末端标记技术检测细胞凋亡,流式细胞仪测定B细胞淋巴瘤2和bax的变化。结果:Wistar大鼠24只,全部进入结果分析。①酶切鉴定和测序鉴定表明黏附斑激酶RNA干扰载体构建成功,转染细胞后,Westernblot结果表明第二个重组黏附斑激酶RNA干扰载体的RNA沉默效率最高,为72.1%,其余分别为66.2%和55.3%。②Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组A490值明显低于未转染细胞和转染空质粒、非特异siRNA组(0.179±0.017,0.30±0.002,0.296±0.006,0.281±0.007;t=17.802,16.436,14.993,P<0.01);凋亡率较其余各组则明显升高犤(22.28±2.13)%,(4.72±1.67)%,(6.36±0.92)%,(8.19±1.33)%;t=-19.05,-17.31,-15.16,P<0.01犦。③Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组bax上升明显,与正常对照组和空质粒转染组比较,差异十分显著(2.15±058,1.01±0.04,1.12±0.04;t=-4.79,-4.318,P<0.01);与阴性对照组比较,差异显著(1.19±0.31,t=-3.59,P<0.05)。④Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组B细胞淋巴瘤-2表达较正常对照组、空质粒转染组、阴性对照组显著上升(1.62±0.15,1.04±0.03,1.09±0.01,1.23±0.04;t=-9.39,-8.701,-6.338,P<0.05)。结论:通过RNA干扰技术沉默心脏成纤维细胞中黏附斑激酶基因的表达,可诱导心脏成纤维细胞凋亡,抑制或降低心脏成纤维细胞中黏附斑激酶表达可能是防
- 郝嘉严俊郭红肖颖彬
- 关键词：转录脱噬作用
- 低氧对成年大鼠心脏成纤维细胞表型的影响被引量：4
- 2005年
- 目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞表型的影响。方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞的典型标记———α平滑肌肌动蛋白,用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化。结果低氧24h、48h时,成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞的α平滑肌肌动蛋白表达较常氧组显著增强;同时细胞胶原蛋白合成速率亦显著增加,在低氧第24h、48h胶原酶敏感的3H脯氨酸掺入率较常氧组分别增加132%(P<0.05)和163%(P<0.01)。结论低氧能够促进成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转换。
- 严俊翟羽张恒王培勇高钰琪谢增柱
- 关键词：低氧成纤维细胞肌动蛋白类表型
- FAK短发夹RNA干扰重组体的构建与鉴定
- 2006年
- 目的本研究利用RNA干扰技术,以粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)为靶基因,设计构建重组体,并对重组体进行鉴定,为下一步探索心肌纤维化的新途径奠定基础。方法设计小发夹结构四条DNA序列,经退火成互补两对双链,再克隆到载体PAVU6+27中构建重组体,转化入JM109菌株,提取质粒进行酶切鉴定、测序分析。结果酶切鉴定和测序分析均提示FAK靶向RNA干扰重组体的构建成功。结论FAK靶向RNA干扰重组体的成功构建,为下一步利用该重组体沉默心脏成纤维细胞中FAK基因的表达,探索心肌纤维化机制打下基础。
- 郝嘉郭红吕伟肖颖彬
- 关键词：FAKRNA干扰重组体心脏
- PYK2靶向短发夹RNA干扰重组体的构建及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:本研究利用RNA干扰技术,以PYK2为靶基因,设计构建重组体,并对重组体进行鉴定,为下一步探索心肌纤维化机制的新途径奠定基础。方法:设计有小发夹结构的8条DNA序列,经退火成互补4对双链,再克隆到载体PAVU6+27中构建重组体,转化入JM109菌株,提取质粒进行酶切鉴定、测序分析。结果:酶切鉴定和测序分析均提示PYK2靶向RNA干扰重组体的构建成功。结论:PYK2靶向RNA干扰重组体的成功构建,为下一步利用该重组体沉默心脏成纤维细胞中PYK2基因的表达,探索心肌纤维化机制打下基础。
- 郝嘉郭红吕伟严俊肖颖彬
- 关键词：RNA干扰心脏
