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国家科技部农业科技成果转化资金(2006GB23600451)
作品数:
1
被引量:16
H指数:1
相关作者:
包振民
胡晓丽
李艳
胡景杰
王明玲
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相关机构:
中国海洋大学
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发文基金:
国家科技部农业科技成果转化资金
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相关领域:
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2008
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富集文库—菌落原位杂交法筛选栉孔扇贝的微卫星标记
被引量:16
2008年
应用微卫星富集文库——菌落原位杂交法,筛选得到了40个栉孔扇贝的微卫星标记。用固定了(AG)15和(AC)15探针的尼龙膜(HybondN^+)捕捉含有微卫星DNA的片段,经洗脱、PCR扩增和TA克隆,构建栉孔扇贝的微卫星富集文库。利用ECL试剂盒(Amersham公司)标记的(AG)15和(AC)15探针进行菌落原位杂交筛选微卫星富集文库,阳性克隆经测序获得微卫星DNA。富集文库中1200个重组克隆经过菌落原位杂交后,532个(44.3%)为阳性克隆。任意挑选100个克隆测序,结果显示所有的克隆都至少含有一个微卫星位点。利用软件设计了65对特异性PCR引物,40对能扩增出清晰的带谱;利用48个栉孔扇贝个体评价微卫星位点,分析表明37个位点具有多态性。不同的位点获得的等位基因数目为2~14个不等,37个多态性位点共获得258个等位基因,平均每个位点获得7.0个等位基因。观测杂合度(H0)、期望杂合度(HP)及多态性信息含量值(P配)的范围分别为0.1000-1.0000、0.1197-0.9831和0.1172-0.9782。结果表明,富集文库一菌落原位杂交法适合大规模筛选目标物种的微卫星标记。
战爱斌
胡景杰
胡晓丽
王明玲
彭薇
李艳
李纪勤
包振民
关键词:
栉孔扇贝
富集文库
微卫星标记
多态性
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