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水源性原虫病流行病学与分子检测研究进展: 2008年; 水源性原虫病是由经水传播的原虫所引起的一类寄生虫病。近年来,由水污染原虫造成大量疾病的爆发引起了对水源性原虫病的高度重视。本文就近年来国内外对隐孢子虫、贾第虫和环孢子虫等水源性原虫病流行病学与分子检测研究进展作一概述。; 杨建伟李国清; 关键词：原虫水源性流行病学分子检测

隐孢子虫病原分类研究进展被引量：8: 2008年; 隐孢子虫是一种危害严重的人兽共患的传染病原,不但给畜牧业生产造成巨大损失,甚至威胁人类健康,已成为全球寄生虫学和环境科学领域研究的热点之一,具有重要的公共卫生意义。本文就隐孢子虫在分类学上的研究进展作一综述。; 杨建伟李国清; 关键词：隐孢子虫分子生物学技术

基于ITS-1基因序列的隐孢子虫种群分类被引量：4: 2009年; 本试验以内转录间隔区1(ITS-1)基因作为研究对象,用PCR技术分别对广东(GD)禽源、广东(GD)和安徽(AH)牛源3个隐孢子虫分离株ITS-1基因进行扩增、克隆、序列测定和分析。将扩增序列用DNAStar(4.0)和ClustalX1.81软件与GenBank上登录的参考序列比对,用Phylip3.67构建种群发育进化树,以确定分离株与其他隐孢子虫虫种之间的亲缘关系。通过对ITS-1基因全序列分析,结果表明:禽源隐孢子虫GD分离株为Cryptosporidium baileyi,牛源隐孢子虫GD分离株和AH分离株均为C.andersoni。因此,ITS-1基因可作为隐孢子虫分离株种群分类的遗传标记,从而为隐孢子虫属的种间鉴定以及进一步的分子流行病学调查和分子诊断学研究奠定了基础。; 杨建伟李国清刘霞张媛媛徐前明; 关键词：隐孢子虫 PCR

猴源人隐孢子虫的分离与鉴定被引量：1: 2010年; 为了解感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的人隐孢子虫(C.hominis)之间的遗传差异,本研究采用形态学和分子生物学方法对猴源隐孢子虫进行分离和鉴定。利用常规方法分离猴粪便中的隐孢子虫卵囊,通过改良抗酸染色和荧光显微镜观察对其进行形态学鉴定;并采用PCR方法扩增其卵囊壁蛋白(COWP)基因和18SrRNA基因,扩增产物克隆至pMD-18-T载体中,对阳性克隆进行测序并作进化树分析。结果表明:抗酸染色和荧光检查结果与所报道的人隐孢子虫的结果一致。PCR扩增产物经电泳检测,明显地出现554bp和370bp大小的片段,与预期结果一致;两种基因的序列分析结果显示该猴源隐孢子虫与C.hominis的相似性均为100%。由此可认为本次分离的隐孢子虫为C.hominis。; 徐前明程家林李国清叶亦见梁详解岳彩玲高振勇

贝氏隐孢子虫PCR检测试剂盒的研制被引量：3: 2009年; 目的研制禽类贝氏隐孢子虫的PCR检测试剂盒。方法根据贝氏隐孢子虫18SrRNA和ITS-1序列,选取遗传标记位点最多的一段核苷酸序列作为特异PCR引物的靶序列,设计、合成了一对针对贝氏隐孢子虫的特异性引物(YJWF:5’-ACTGATATACAATACCACGG-3’和YR:5’-GCGGATAAAGTTCAGGTTC-3’),对PCR反应条件进行了一系列优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、稳定性、重复性和保存期等进行了系列研究。结果该试剂盒能特异性地扩增出贝氏隐孢子虫基因组中相应片段,与安氏隐孢子虫,微小隐孢子虫,柔嫩艾美尔球虫等相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到3.48个卵囊;反复冻融50次对试剂盒没有影响;室温条件下至少可保存4个月。结论该试剂盒的各项指标达到了贝氏隐孢子虫的检测要求。; 杨建伟李国清刘霞张媛媛徐前明; 关键词：贝氏隐孢子虫 RRNA ITS-1 PCR 试剂盒

人隐孢子虫RT-PCR-ELISA检测方法的建立被引量：6: 2010年; 目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氧化酶标记的抗地高辛抗体反应。用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较。结果所建立的RT-PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提高了100(0.08:8ng)左右。临床检测结果显示,该方法的检出率高达86%(19/22),而RT-PCR、蔗糖漂浮法和抗酸染色法的检出率仅为27%(6/22)、27%(6/22)和50%(11/22)。结论本试验成功建立了人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法,检出率比常规检测方法高。; 徐前明李国清叶亦见梁详解高振勇岳彩玲程家林朱海波; 关键词：RT-PCR

贝氏隐孢子虫PCR诊断试剂盒的应用: 2009年; 运用首次研制的贝氏隐孢子虫PCR诊断试剂盒于2007年9月至2008年3月对广东省广州、佛山两地家禽的215份粪便样品进行了贝氏隐孢子虫感染的实际检测，并与常规检测方法，如饱和蔗糖溶液漂浮法、改良抗酸染色法进行了比较。结果显示，该试剂盒的检出率比常规检测方法提高了4.54—6.25个百分点。证实该试剂盒具有特异、敏感等优点，对开展隐孢子虫病的鉴别诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。; 杨建伟李国清刘霞张媛媛; 关键词：贝氏隐孢子虫诊断试剂盒家禽

猴源人隐孢子虫P23抗原基因克隆表达及其免疫活性的测定: 2011年; 为探索隐孢子虫病免疫预防的新途径,本文对猴源人隐孢子虫Cryptosporidium hominis P23抗原基因进行了克隆、表达及其免疫活性的测定.采用RT-PCR方法对猴源C.hominis P23抗原基因进行克隆,构建重组质粒pGEX 4T 1 P23,并用IPTG诱导其在E.Coli Rossetta中表达;采用SDS PAGE检测其表达效果;采用Dot ELISA和淋巴细胞转化试验分别检测其与抗体反应特性和淋巴细胞增殖情况.结果表明：所克隆的P23抗原基因大小为342 bp;重组质粒表达蛋白的大小为40 kDa（含26 kDa的融合蛋白GST）,以1、5、10 μg剂量的重组蛋白rP23均能刺激鼠脾脏淋巴细胞增殖,并能够与感染猴血清中的抗体明显地发生反应.; 徐前明李国清罗锋程家林岳彩玲高振永; 关键词：重组蛋白免疫活性

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广东省科技计划工业攻关项目(2006B20801006)