博士科研启动基金(BJ-2011-30)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：毕楠王抒陈保生李国平隋靖喆更多>>
- 相关机构：中国医学科学院基础医学研究所卫生部更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 在HepG2细胞中11β-HSD1通过SREBP1调控脂代谢
- <正>目的:通过在HepG2细胞中高低表达Ⅰ型羟基固醇脱氢酶(11beta-hydroxystercid dehydrogenase type 1,11β-HSD1),分析其影响脂代谢的分子机制。方法:1、用肿瘤坏因子(...
- 徐杰李国平唐蔚青黎健
- 文献传递
- 人载脂蛋白AV原核表达载体的构建与纯化研究被引量：1
- 2013年
- 目的:构建人载脂蛋白AV(apolipoprotein AV,apoAV)的原核载体并表达纯化该蛋白。方法:从人肝癌细胞系HepG2中提取总RNA,以反转录的cDNA第一链为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增得到含有编码apoAV完整成熟肽段的PCR片段。PCR产物和原核表达载体pET30b经核酸内切酶双切后连接,连接产物经转化至大肠杆菌感受态细胞Top10,挑选克隆测序。重组质粒pET30b-apoAV转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化诱导表达条件,重组的apoAV经镍离子螯合树脂纯化获得。结果:经测序证实人apoAV目的基因成功克隆入pET30b原核表达载体中,经过IPTG诱导有约40KD的特异性蛋白表达,与预期大小一致。该蛋白在IPTG诱导下的最佳表达时间为5h,最佳浓度在31.3μmol/L。纯化的apoAV纯度在95%以上,产率约为15 mg/L。结论:成功构建人apoAV的原核表达载体,实现了高效表达和纯化,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。
- 李国平隋靖喆毕楠满永王抒陈保生黎健
- 关键词：原核表达蛋白纯化
