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猴B病毒gG蛋白的主要特性与B细胞表位预测被引量：4: 2014年; 为了探讨猴B病毒gG基因编码蛋白作为疫苗候选抗原和ELISA试剂盒研制所需检测用抗原的可能性,本研究从Genbank数据库中获得猴B病毒gG基因序列,采用IEDB、SOSUI等在线分析系统对该基因序列的编码区进行生物信息学分析,并预测gG基因编码蛋白的理化性质、可溶性和表面可及性、跨膜区、抗原表位以及线性B细胞表位等.分析结果表明,B病毒gG蛋白为膜蛋白,具有一个跨膜螺旋,以及较为丰富的β-转角,为可溶性蛋白,蛋白序列中具有多个抗原表位和优势线性B细胞表位,有作为猴B病毒疫苗候选抗原和抗体诊断用抗原的潜力.; 张金阳孙涛杨光文宋玉竹韩芹芹夏雪山; 关键词：生物信息学 B细胞表位抗原疫苗

RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定: 2015年; 目的建立有活性的蛋白激酶C受体1(RACK1)过表达和低表达人脐静脉内皮细胞系(HUVEC),为进一步从分子水平研究RACK1在心律失常中的作用机制提供有效手段。方法扩增RACK1基因的全长c DNA序列,并插入p IRES2-EGFP获得过表达载体p IRES2-EGFP-RACK1;同时,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,亚克隆至p Genesil-1得到相应的干扰载体;脂质体转染法将重组体及相应的空质粒分别转染至HUVEC细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,qRT-PCR及Western blot鉴定RACK1 mRNA和蛋白的表达。结果RACK1真核表达载体和RNA干扰载体构建成功。重组体经脂质体法转染HUVEC 48 h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,qRT-PCR及Western blot结果证实了过表达载体和干扰载体能有效的增强和沉默HUVEC细胞中RACK1的表达。结论成功建立了RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系。; 张丽贾雄飞牛华冯悦宋玉竹张望龙李胜营吴明江毛小琴; 关键词：RACK1 过表达 RNA干扰

糖尿病视网膜病变的相关分子机制研究进展被引量：4: 2014年; 糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病微血管病变常见的并发症,具有高发病率和高致盲率,特别是增生性糖尿病视网膜病变(PDR)可引起患者严重的视力丧失。DR发病机制非常复杂,病理过程包括周细胞丧失、内皮细胞增生、基底膜增厚、管腔狭窄闭塞、视网膜缺血缺氧、血管新生及牵拉性视网膜脱离等,各进程涉及多种细胞因子。本文就血管内皮细胞生长因子VEGF、Ang-Tie系统和胰岛素样生长因子IGF系统进行讨论,该类分子机制主要参与了糖尿病引起的视网膜缺血性血管病变。; 刘晓佳徐永敏夏雪山; 关键词：糖尿病视网膜病变细胞因子视网膜缺血

TNF-α在抑郁症中的作用和机制研究被引量：10: 2015年; 抑郁症是一种情感精神疾病,临床上以显著而持久的心境低落为主要特征。抑郁症严重危害人们身心健康,降低生活质量,增加社会负担。抑郁的产生原因比较复杂,发病机制存在多种假说。在过去的几十年,虽然对于抑郁症的研究取得了一定的进展,但其确切的病因及病理生理机制目前仍不明确。近期,研究显示,促炎性细胞因子,尤其是肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在抑郁症的发生、发展及临床药理机制中扮演着重要角色。现通过对TNF-α的生物学特征、在抑郁症发病和抗抑郁治疗中的作用、基因多态性与抑郁症关联性以及未来的应用与展望等进行综述,以期从多方面阐明TNF-α在抑郁症中的作用。; 马柯张洪秀王广燕王伟刘宗涛; 关键词：抑郁症肿瘤坏死因子-Α 病理生理多态性

云南省部分乙型肝炎病毒多基因型分布被引量：1: 2013年; 目的了解云南省HBV基因型分布情况和其特殊性。方法对来自云南省7个地州市的55例HBV感染者，采集、分离其血清样本，核酸提取，套式PCR扩增前S1／前S2／部分S基因区段（877bp），进行核酸序列测定与同源关系和重组位点分析。计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用卡方检验。结果建立更为准确的HBV基因分型方法，49份样本获得有效分型，13份（26．5％）为B2亚型；33份（67．3％）为C型，其中C1亚型7份，C2亚型19份，C5亚型3份，c7亚型4份；另有2份（4．1％）为I基因型和1份为（2．0％）C／D重组型。B、C型感染者HBVDNA分别为（7．69±0．86）、（6．88±1．24）lg拷贝／mL，差异有统计学意义（t=1．621，P=0．016）；B、C型感染者碱性磷酸酶分别为（78．6±28．8）、（124．O±46．8）U／L，差异有统计学意义（t=-1．534，P=0．028）。结论建立的HBV基因型／亚型分析方法可准确分型；云南地区HBV多基因型／亚型分布状况，可能为东南亚地区所流行HBV的传人所致，并可能影响中国HBV基因型的分布态势。; 王炳辉冯悦李峥赵婷段海平代解杰刘丽夏雪山; 关键词：基因型流行病学研究聚合酶链反应

树鼩原代肝细胞分离培养条件优化: 2013年; 目的:通过优化树鼩原代肝细胞的分离及体外培养条件,获得能够在体外进行长期稳定培养的树鼩原代肝细胞。方法:优化肝脏灌流液、酶消化液及细胞离心速度等原代肝细胞分离条件,培养细胞密度和培养基配方等原代肝细胞培养条件,用台盼蓝染色细胞计数法、MTT检测法及EDU标记法评价所分离、培养树鼩原代肝细胞的数量、活力及生长状态。结果:添加葡萄糖的D-Hank’s液作为灌流液,含有0.005 mol/L CaCl2及12 ×104 units/L胶原酶IV的D-Hank’s液作为消化液,37℃消化15~20分钟,所获得细胞梯度离心洗涤三次,可获得最高得率及活力的原代肝细胞。在Williams’ ME基础培养基中添加生长因子(10 ng/ml),葡萄糖(0.25%)、ITS-X(1 ×multiple)、1%青链霉素及2% DMSO时可以维持树鼩原代肝细胞体外稳定增殖生长达42天。结论:树鼩原代肝细胞分离与体外培养条件的优化,可大大提高细胞得率,延长细胞稳定增殖生长时间,有助于以树鼩为模型研究肝细胞生理代谢特性及嗜肝病毒感染机制。; 薛兰洁冯悦徐明孙晓梅张华堂代解杰夏雪山; 关键词：树鼩原代肝细胞

IL28B基因在HCV感染中的作用和应用前景被引量：5: 2013年; 丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是造成慢性肝炎、肝硬化乃至肝癌的主要原因之一,严重威胁人类健康。宿主因素可影响HCV的感染、治疗效果和自然清除率。近期,欧美多个研究组对自愈和经过治疗的慢性丙型肝炎患者进行了全基因组关联分析(Genome-wide association study,GWAS),证明IL28B基因(编码IFN-λ3)的单核苷酸多态位点(Single nucleotide polymorphism,SNP)影响HCV患者的治疗效果和自然清除率。IFN-λ3通过与其异源二聚受体IFN-λR1·IL-10R2结合进行信号传导,上调干扰素刺激基因的表达,进而发挥抗病毒、抑制肿瘤细胞生长以及免疫调节等生物学功能,有望成为一种新型抗HCV药物。虽然IL28B基因SNP影响病毒清除的机制尚未清楚,但其关联分析结果可作为HCV患者临床治疗的辅助指导,对HCV患者进行IL28B基因遗传易感和功能研究将有助于该病的预防和治疗。; 马柯张阿梅夏雪山; 关键词：丙型肝炎

丙型肝炎病毒NS3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：3: 2015年; 提高对丙型肝炎患者实验室检测的灵敏度和特异性,对相关人群进行筛查和早期诊断,是控制丙型肝炎病毒(HCV)流行与传播的有效措施。为了建立更为可靠的HCV诊断方法,通过采用PCR方法从J6/JFH12a型病毒中克隆出HCV ns3基因片段,将其连接到p ET-28a载体上,重组载体p ET-28a-ns3转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,以10%SDS-PAGE进行鉴定,获得表达的NS3重组蛋白分子量为72 k Da。将纯化的NS3蛋白免疫BALB/c小鼠,第4次免疫后采集血液并分离血清进行抗体活性鉴定,小鼠抗体效价为1∶256 000。进一步的Western blotting和间接免疫荧光结果显示,以重组NS3蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体可以很好地识别HCV感染Huh7.5.1细胞中的NS3蛋白,为下一步开展单克隆抗体制备和检测试剂盒研制工作奠定了基础。; 孙涛杨光文张金阳夏雪山; 关键词：丙型肝炎病毒 B细胞表位 NS3蛋白多克隆抗体

丙型肝炎病毒体外培养技术的新进展被引量：1: 2013年; 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起丙型肝炎的病原体,全球约1.7亿人感染HCV.高效体外细胞培养体系的缺乏,严重影响了HCV病毒生命周期的阐明以及抗病毒药物和预防性疫苗的研发.2005年Wakita T建立了JFH1/Huh7真正的HCV体外培养体系,为HCV研究提供了必要的研究条件.其后,研究者为提高病毒复制效率,简便病毒检测方法,在病毒株的选择替换、重组病毒构建、宿主细胞的改造筛选及病毒培养操作技术改进方面做了大量工作,取得了较好进展,为HCV的病毒学研究、药物筛选以及疫苗的研发提供了更有效的技术途径.; 赵婷冯悦王炳辉夏雪山; 关键词：丙型肝炎病毒宿主细胞体外培养技术

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国家自然科学基金(81260248)

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