广东省科技计划工业攻关项目(2003A3020101) 作品数:12 被引量:64 H指数:6 相关作者: 秦建强 杨俊 余磊 邱小忠 武雷 更多>> 相关机构: 南方医科大学 中国人民解放军第一军医大学 深圳市沙井人民医院 更多>> 发文基金: 广东省科技计划工业攻关项目 国家自然科学基金 广东省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
FK506在异体神经移植过程中对雪旺细胞和巨噬细胞的影响 被引量:11 2006年 目的从形态学角度研究FK506在异体神经移植后神经修复过程中对雪旺细胞增殖和巨噬细胞凋亡的影响。方法体外培养纯化雪旺细胞,流式细胞仪检测FK506促雪旺细胞增殖和促巨噬细胞凋亡作用,ELISA法检测FK506促雪旺细胞分泌神经生长因子(NGF)及促巨噬细胞分泌白细胞介素-1(IL-1)的含量,荧光显微镜和透射电镜对巨噬细胞的凋亡进行形态学观察与鉴定。结果流式细胞仪和ELISA检测结果显示FK506可促进雪旺细胞增殖并分泌NGF,促进巨噬细胞凋亡并分泌IL-1,荧光显微镜和透射电镜下观察到巨噬细胞凋亡前期和凋亡小体的出现。结论在形态学角度FK506可以在早期促进雪旺细胞增殖和分泌NGF,并促进巨噬细胞凋亡和IL-1的分泌,进而促进外周神经再生。 杨俊 张振伟 朴英杰 钟世镇 秦建强关键词:免疫抑制剂FK506 雪旺细胞 巨噬细胞 外周神经 白介素-1 周围神经修复中Schwann细胞与轴突间作用的分子机制 被引量:1 2007年 于巧莲 秦建强关键词:SCHWANN细胞 轴突生长 分子机制 周围神经 神经营养因子 IL-1β激活后的许旺细胞与人发角蛋白三维培养构建人工神经桥接体 2006年 目的探索白细胞介素-1β(IL-1β)激活后的许旺细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体,修复神经缺损。方法体外培养纯化的许旺细胞经IL-1#激活前、后与细胞外基质凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处。S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白共培养情况,原位杂交法观察人发角蛋白降解及神经生长因子(NGF)在坐骨神经内的表达,移植术4周后检测坐骨神经功能指数。结果经IL-1$激活后的许旺细胞能更好地黏附于人发角蛋白表面,进行分裂、增殖。3~4周,桥接体内的人发角蛋白开始降解,其周围可见IL-1%激活后的处于增殖分裂期的许旺细胞NGF表达强阳性,坐骨神经功能恢复时间提前。结论经IL-1&激活后的许旺细胞与细胞外基质凝胶修饰的人发角蛋白复合培养构建成人工神经桥接体,具有修复神经缺损的同时还能够加速坐骨神经损伤后功能的恢复。 杨俊 邱小忠 余磊 朴英杰 秦建强关键词:白介素-1Β 许旺细胞 人发角蛋白 周围神经 神经膜细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体的实验研究 被引量:2 2005年 目的探索神经膜(旧称许旺细胞)与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体。方法用10μmol/mlBrdU标记体外培养纯化的许旺细胞与ECM凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中。S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白的共培养,石蜡切片抗BrdU免疫组化染色观察体外培养纯化的许旺细胞在体内的生长情况。结果体外培养的许旺细胞能黏附于人发角蛋白上进行良好的生长,移植入神经缺损处4周后,坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中的桥接体内的人发角蛋白开始降解,黏附于该人发角蛋白上的许旺细胞均见成活并分裂增殖。结论许旺细胞可与人发角蛋白进行三维培养,构建成人工神经桥接体,填补神经缺损。 杨俊 刘巍 余磊 邱小忠 焦培峰 胡莲美 武雷 朴英杰 钟世镇 秦建强关键词:神经膜细胞 人发角蛋白 周围神经 生物工程 FK506促进异体神经匀浆激活的巨噬细胞凋亡的实验研究 被引量:6 2005年 目的研究FK506促进外周血来源的异体神经匀浆激活的巨噬细胞的凋亡。方法取1月龄SD幼鼠,腹腔抽取法培养异体神经匀浆激活的巨噬细胞。按不同浓度的FK506分组:A组空白对照组、B组0.25ng/ml、C组0.5ng/ml、D组1.0ng/ml。将4组处理因素分别加入长有巨噬细胞的96孔板中,用MTT法检测巨噬细胞的活力情况,用倒置显微镜和荧光显微镜及透射电镜对巨噬细胞的凋亡进行形态学上的观察与鉴定。流式细胞仪检测巨噬细胞凋亡情况。结果B组和C组均可见异体神经匀浆激活的巨噬细胞的活性减弱及细胞凋亡发生,D组可见巨噬细胞发生坏死性改变。透射电镜和荧光显微镜可观察到巨噬细胞的凋亡前期和凋亡小体出现。流式细胞仪检测B和C组凋亡率为24.6%和26.5%,均高于对照组,D组发生坏死。结论FK506可以在早期促进异体神经匀浆激活的巨噬细胞的凋亡,从而减少或抑制周围神经异体移植后巨噬细胞所介导的免疫排斥反应。 杨俊 罗勇 邱小忠 武雷 余磊 陆云涛 朴英杰 秦建强关键词:免疫抑制剂 巨噬细胞 FK506促进乳鼠雪旺细胞增殖的实验研究 被引量:8 2005年 目的观察FK506对体外培养的乳鼠雪旺细胞增殖的影响。方法将纯化的雪旺细胞分两组,一组设为对照,另一种加含终浓度为0.5ng/mlFK506的DMEM/F12培养液培养,用MTT法检测不同时间点的OD值并绘制生长曲线,另在培养第48、72小时后用3H-胸腺嘧啶核甙测定法检测其DPM值。结果经含0.5ng/mlFK506培养液培养的雪旺细胞,其对数生长期提前出现,并且在峰值上高于对照组;接种后48h和72h,3H-胸腺嘧啶核甙检测DPM值实验组也高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FK506有促进雪旺细胞分裂增殖的作用,可能是其促进周围神经再生的重要机制之一。 张振伟 武雷 杨俊 陈泽华 张家俊 庄加川 廖坚文 林冷 秦建强关键词:FK506 乳鼠 雪旺细胞 细胞增殖 周围神经 IL-1β促进Schwann细胞增殖及分泌NGF的研究 被引量:2 2008年 为观察白介素-1β(IL-1β)对Schwann细胞增殖及分泌神经生长因子(NGF)的影响,本研究取3d龄的大鼠坐骨神经纯化培养Schwann细胞,然后分4组进行处理。处理方法为:A组加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,B组仅在纯化后第1d向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,C组每天向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,D组隔天向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,分别培养5d。倒置显微镜下观察Schwann细胞的形态,用抗S-100蛋白免疫组化鉴定Schwann细胞,经流式细胞仪(FCM)检测细胞的分裂增殖情况,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测NGFmRNA表达的变化,酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测细胞培养基中NGF蛋白的表达量。结果显示:D组Schwann细胞增殖率、NGFmRNA合成量和NGF蛋白表达量均显著高于其他三组(P<0.05)。此结果说明IL-1β能够促进Schwann细胞的分裂增殖,并且促进胞内NGFmRNA的合成及胞外NGF的分泌,其作用持续时间大约为2d。 于巧莲 秦建强 余磊 邱小忠 廖华 王齐 朴英杰关键词:白介素-1Β SCHWANN细胞 神经生长因子 周围神经 成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞生长和增殖的影响 被引量:9 2004年 目的:观察成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞增殖分化的影响,探讨两者之间的协同作用,为组织工程化神经桥接体的构建奠定实践基础。方法:取20只出生四五天的SD乳鼠的臂丛和坐骨神经,运用双酶结合单酶消化法培养雪旺细胞和成纤维细胞,纯化和培养雪旺细胞并制备两种条件培养基:A组:成纤维细胞+DMEM/F12;B组:成纤维细胞+雪旺细胞+DMEM/F12;C组:DMEM/F12(对照组)。将A,B,C3组分别加入种植有纯化雪旺细胞的96孔板中,MTT检测雪旺细胞增殖情况,S-100蛋白免疫组化染色鉴定雪旺细胞。结果:B组对雪旺细胞的增殖和分化有明显的促进作用;A组次之;C组最差(P<0.001)。结论:成纤维细胞条件培养基可促进雪旺细胞的增殖和分化。 杨俊 张黎声 武雷 邱小忠 余磊 秦建强关键词:生物医学工程 成纤维细胞 许旺细胞 改良雪旺细胞传代培养的实验研究 被引量:18 2005年 目的:采用改良传代法进行雪旺细胞培养,以获取大量纯净的雪旺细胞用于周围神经组织工程研究。方法:采用4-5 d SD乳鼠坐骨神经和臂丛神经,运用双酶消化法结合单酶消化法进行雪旺细胞的原代培养。5-7 d后,采用单酶快速消化离心法进行传代培养,同时纯化雪旺细胞。结果:SABC免疫组化染色鉴定和计数板计数,改良传代法使体外培养的雪旺细胞纯度达98%左有,两种方法之间有显著性差异,P<0.001。MTT检测雪旺细胞生存和增殖时间延长1-2周左右。结论:与传统的传代培养方法相比,改良法既省时又避免了外源性物质如Ara-C对雪旺细胞的毒性作用,同时有利于雪旺细胞活力和纯度的提高。 杨俊 武雷 黄涛 余磊 邱小忠 廖华 陆云涛 刘晓静 秦建强关键词:雪旺细胞 细胞培养 基底膜与周围神经再生 被引量:8 2004年 基底膜是沉积形成在有髓或无髓神经纤维周围的一层有序致密排列的细胞外基质。基底膜在周围神经损伤与再生中发挥着重要的作用,当神经受到损伤时,轴突和髓鞘崩解溃变,其碎片被大量聚集活化的巨噬细胞吞噬,但基底膜结构仍保持完整,且其内的雪旺氏细胞由静息转为活跃的分裂增值状态,为轴突再生提供一个适宜的微环境。近年来大量的学者对基底膜的成分结构、沉积、在周围神经损伤后的变化以及对再生轴突的作用、与非神经细胞间的关系进行了大量的研究,以图从基底膜这方面为临床修复周围神经损伤寻找新方法。 武雷 杨俊 秦建强关键词:基底膜 周围神经再生 周围神经损伤 细胞外基质 轴突再生